激光共聚焦顯微鏡原理和操作(已修改)
2025-05-26 02:29 本頁面
【正文】 激光掃描共焦顯微鏡技術 ? 樣品要求 ? 原理 ? 功能 ? 在生物醫(yī)學中的應用 激光掃描共焦顯微鏡技術及應用 The techniques and application of Confocal Laser Scanning Microscopy 激光掃描共焦顯微鏡技術 人眼分辨率： 光學顯微鏡分辨率： 電子顯微鏡分辨率： 共焦顯微鏡分辨率： 二 、 原理 激光掃描共焦顯微鏡技術 原理小結 : Confocal 利用放置在光源后的 照明針孔 和放置在檢測器前的 探測針孔 實現(xiàn) 點 照明 和 點 探測 ， 來自光源的光通過照明針孔發(fā)射出的光聚焦在樣品焦平面的某個點上 ， 該點所發(fā)射的熒光成像在探測針孔上 ， 該點以外的任何發(fā)射光均被探測針孔阻擋 。 照明針孔 與 探測針孔 對 被照射點 或 被探測點 來說是 共軛 的 ， 因此被探測點即共焦點 ， 被探測點所在的平面即共焦平面 。 計算機以像點的方式將被探測點顯示在計算機屏幕上 ， 為了產生一幅完整的圖像 ， 由光路中的掃描系統(tǒng)在樣品焦平面上掃描 ， 從而產生一幅完整的 共焦圖像 。 只要載物臺沿著 Z軸上下移動 ， 將樣品新的一個層面移動到共焦平面上 ， 樣品的新層面又成像在顯示器上 ， 隨著 Z軸的不斷移動 ， 就可得到樣品不同層面連續(xù)的光切圖像 。 激光掃描共焦顯微鏡技術 激光掃描共焦顯微鏡技術 激光掃描共焦顯微鏡技術 激光掃描共焦顯微鏡技術 ? 共焦顯微鏡與傳統(tǒng)顯微鏡的 區(qū)別 ，獲得清晰的圖像 激光掃描共焦顯微鏡技術 ? 共焦顯微鏡與傳統(tǒng)顯微鏡的 區(qū)別 2. 具有更高的軸向分辨率，并可獲取連續(xù)光學切片 conventional confocal 激光掃描共焦顯微鏡技術 ? 共焦顯微鏡與傳統(tǒng)顯微鏡的 區(qū)別 3. 增加側向分辨率 d2alco n v e n tio nco n fo ca l dd ?激光掃描共焦顯微鏡技術 ? 共焦顯微鏡與傳統(tǒng)顯微鏡的 區(qū)別 4. 由于點對點掃描去除了雜散光的影響 激光掃描共焦顯微鏡技術 三 . 激光掃描共焦顯微鏡的設計特點 : pinhole和探測 pinhole pinhole和探測 pinhole共軛 (共焦 ), 共焦點即被探測點，被探測點所在的平面為共焦平面 —— 逐點掃描成像 （四個） 熒光通道，可同時探測多個被標記物 激光掃描共焦顯微鏡技術 ? 技術指標 （ Leica TCS SP2) : 1. xy分辨率比傳統(tǒng)顯微鏡小 傳統(tǒng)顯微鏡 : Rxy=?/NA （ mm ) Confocal: Rxy=?/NA（ mm ) 2. 樣品的最大厚度 : 取決于 : 物鏡的 NA、 物鏡的 工作距離 激光的穿透力 、 樣品的透明度 Z軸的最大移動范圍 (166mm、 Zwide) 3. 樣品的最小光切厚度 : (載物臺最小移動距離為 40nm） 取決于 : 物鏡的 NA、針孔大小 Z軸的最小移動步距 : 40nm Z軸的分辨率 : mm 激光掃描共焦顯微鏡技術 4. 激光器 Ar激光器 : 458nm, 476nm, 488nm, 514nm GreNe : 543nm。 HeNe: 633nm Ar激光器 (UV): 361nm ? 激光器的特點 : 1) 方向性好 : 激光基本延直線傳播 2) 單色性好 :??=108nm 3) 高亮度 : 激光方向性好 , 其在空間上的能量分布是高度 集中的 。 4) 偏振性 : 激光為平面偏振光 , 光纖耦合 激光掃描共焦顯微鏡技術 5. 四個熒光通道 , 一個透射光通道 即除了可同時采集多標記熒光圖像外 還可以同時采集透射光圖像 ,但透射光 圖像為 非共焦圖像 。 激光掃描共焦顯微鏡技術 : slow 220lines/s 512?512 23秒 slow2 440lines/s（ 2：雙向掃描）
環(huán)評公示相關推薦
鄂ICP備17016276號-1