【正文】 第五章 檢疫性真菌病害 ? 小麥矮腥黑穗病 Wheat dwarf bunt ? 小麥印度腥黑穗病 Wheat karnal bunt ? 煙草霜霉病 Tobacco blue mold ?馬鈴薯癌腫病 Potato wart ?榆樹枯萎病 Dutch elm disease 復(fù)習(xí)思考題 植物檢疫性真菌常見檢疫檢驗(yàn)技術(shù) ? 直接檢驗(yàn) ? 染色檢驗(yàn) ? 洗滌檢驗(yàn) ? 保濕萌芽檢驗(yàn) ? 分離培養(yǎng)檢驗(yàn) ? 適用范圍：具明顯癥狀的植物材料 ? 主要工具：放大鏡或解剖鏡，主要是利用肉眼現(xiàn)場快速初檢 ? 原理：染病的組織，或病原菌本身，經(jīng)特殊的化學(xué)藥品處理后，可帶有特殊的顏色 ? 例如：馬鈴薯癌腫病 （ Synchytrium endobioticum） 薯塊上癌瘤不明顯時(shí)，可做徒手切片，加 1滴 1％的 “ 藏花紅 ” 染色液，健康組織細(xì)胞壁呈亮紅色，感病組織細(xì)胞壁呈暗紅色。 ? 原理：種子表面常附著真菌孢子，將一定量的樣品放入容器內(nèi)，加一定量的無菌水，充分振蕩，可使病菌孢子洗滌下來，而后離心后，可沉淀，鏡檢沉淀物可確定其種類和數(shù)量。 ? 主要儀器和試劑：振蕩器、離心機(jī)、顯微鏡、 ％吐溫溶液等 ? 主要試驗(yàn)流程如下： 稱取樣品 洗脫孢子（振蕩） 離心富集 鏡檢計(jì)數(shù) ? 影響檢驗(yàn)結(jié)果的因素： ① 種子表面的病菌孢子不一定能完全洗滌下來； ② 離心管內(nèi)，懸浮液表面常形成一層極難沉降的孢子薄膜，管壁上也可能黏附孢子； ③ 將懸浮液滴于玻片時(shí)，由于孢子迅速沉淀，造成一些視野間孢子分布極不均勻； ④ 操作不夠嚴(yán)格，造成人為誤差。 ? 原理：種子攜帶的真菌，無論外表黏附的還是潛伏種子內(nèi)的，在種子萌發(fā)階段即可開始侵染，甚至有些在種子還未萌發(fā)時(shí)就可長出病菌。 ? 主要儀器及試劑：吸水紙、沙土、冰箱、培養(yǎng)箱等。 ? 主要包括：保濕培養(yǎng)檢驗(yàn)、沙土萌芽和土內(nèi)萌芽檢驗(yàn)等三種方法，其中保濕培養(yǎng)檢驗(yàn)法是國內(nèi)外最常用的一種方法。 ? 吸水紙法 無菌吸水紙（ 3層） 滅菌培養(yǎng)皿 ○ ○ ○ ○ ○ 吸水 1－ 培養(yǎng)、觀察 12h光照黑暗交替 恒溫 所觀察到的結(jié)果示意圖如下 ? 常規(guī)植物病理學(xué)方法 小麥矮腥黑穗病 Wheat dwarf bunt ?分布： 是麥類黑穗病中危害最大、防治最難的一種病害，它于 1847年及 1860年先后發(fā)現(xiàn)于捷克和美國，在全世界范圍內(nèi)傳播和蔓延，目前已在歐洲、北美、南美、澳洲、亞洲、非洲等 40多個(gè)國家發(fā)生。 ?寄主： 禾本科 5個(gè)族， 18個(gè)屬， 65個(gè)種。主要栽培植物有冬小麥、大麥、黑麥，冰草屬為天然發(fā)病的主要禾草寄主。 ?危害性： 1962年美國減產(chǎn) ％， 1972年西部 7州，平均減產(chǎn) 17％，損失 1. 2億 Kg。菌癭可存活 10年以上。 ?癥狀 ： 系統(tǒng)侵染性，表現(xiàn)為：病株特矮（ 1/3～ 1/2），分孽特多（ 1倍），病穗特密，病粒特硬，有魚腥臭味。 ?病原菌： Tilletia controversa . K252。hn, in Rabenhorst, Hedwigia 13: 188 (1874) ? Position in classification: Tilletiaceae, Tilletiales, Exobasidiomycetidae, Ustilaginomycetes, Basidiomycota, Fungi ?形態(tài)特征： 冬孢子 ， 冬孢子萌發(fā) 。 ?生物學(xué)特征： 冬孢子萌發(fā) 2～ 15（ 3~8） ℃ ，弱光 400～ 600lx，土壤含水量 35～ 88％，萌發(fā)周期長 3個(gè)月。冬孢子內(nèi)含有內(nèi)源孢子萌發(fā)抑制劑。 ?生理分化： 美國 15小種，德國 8個(gè)小種。 ?初侵染來源： 土壤帶菌，冬孢子可存活 1年，菌癭可存活 3～10年。 ?傳播： 種子；運(yùn)輸工具、包裝材料及下腳料；糞肥；雨水。 ?發(fā)病規(guī)律 ： 侵染期長， 12月～ 4月， 1～ 2月是盛期，幼嫩分蘗處侵入，細(xì)胞間蔓延， 50天到生長點(diǎn)，隨寄主生長，菌絲進(jìn)入穗原始體，到各個(gè)花器，破壞子房，形成冬孢子堆。長時(shí)間 3～ 8 ℃ 低溫利于侵染；冬麥區(qū)苗期日平均溫度 0～ 10 ℃ 達(dá) 45d以上，即使沒有雪覆蓋也同樣利于發(fā)病。 ?TCK的循環(huán) : ?流行因素 ： 大面積感病品種、足夠菌源、冬季日均溫 0～ 10 ℃ 的日數(shù) 》 40d、穩(wěn)定積雪 70d以上，積雪厚度 10cm以上。 ?國內(nèi)適生區(qū)域： 西北高原冬麥區(qū)和新疆、青藏高原晚播冬麥區(qū)極為適宜病害的發(fā)生，屬高度危險(xiǎn)區(qū)；江淮流域及華北、東北冬麥區(qū)基本適合病害發(fā)生，屬危險(xiǎn)區(qū)；西南高海拔地區(qū)有時(shí)也具備病菌入侵條件，也可能受害；春麥區(qū)不發(fā)病。 ? 檢驗(yàn)與檢測(cè)： ① 直接檢查：放大鏡 菌癭 ② 洗滌檢查： 50g＋ 100ml無菌水，振蕩 5min， 10～15ml離心 3min，定容，制片觀察。 ③ 冬孢子鑒定：孢子形態(tài)鑒定（ 網(wǎng)脊高度、膠鞘厚度、網(wǎng)目徑、孢子大小、不育細(xì)胞等） 。 ④ 冬孢子自發(fā)熒光實(shí)驗(yàn)： TCK孢子于熒光顯微鏡下有自發(fā)熒光現(xiàn)象，而 TCT孢子則無。 ⑤ 冬孢子萌發(fā)試驗(yàn)： 5 ℃ 、 17 ℃ 下，光照。矮腥孢子 5 ℃ 下 21d開始萌發(fā)， 17 ℃ 不萌發(fā)。 ⑥ PCR技術(shù)：引物 5`TGACAACGGATCTCTTGGTT3`、 5` TCACCAACTCCAAGCAATCT3 `,206bp處有特異擴(kuò)增帶。 ? 檢疫和防治 ① 進(jìn)口小麥和原糧必須進(jìn)行檢疫，病麥需除害處理 ② 帶菌小麥原糧必須集中在幾個(gè)規(guī)定有條件的口岸加工滅菌處理。采用高溫滅菌法，130℃30min 或 120 ℃1h 。 ③ 病區(qū)用 40％五氯硝基苯，種子重量 ％的藥量拌種，并在播種溝內(nèi)施藥處理?；騿斡?1％的藥量拌種 ④ 重病地應(yīng)輪作倒茬或改種春小麥。冬小麥晚播可減輕發(fā)病。 ⑤ 種植抗病品種。 小麥印度腥黑穗病 Wheat karnal bunt ?分布： 印度、巴基斯坦、尼泊爾、阿富汗、伊拉克、土耳其、黎巴嫩、敘利亞、原蘇聯(lián)、瑞典、美國、墨西哥、澳大利亞等。 ?寄主 ： 小麥、硬粒小麥、六倍體小麥 ?危害及重要性 ： 產(chǎn)量影響不大，對(duì)品質(zhì)影響較大， 3%面粉具臭味（三甲胺）。 ?癥狀 ： 局部侵染性， 部分黑穗病，麥粒的一部分被侵染，小穗頂端麥粒黑斑，穎片張開，主要侵染胚乳，一般不侵染胚，在種子腹面表皮下形成冬孢子堆，背面胚乳部分仍完好。 ?病原菌 ： Tilletia indica Mitra 異名： Neovossia indica Position in classification: Tilletiaceae, Tilletiales, Exobasidiomycetidae, Ustilaginomycetes, Basidiomycota, Fungi ?冬孢子 ： 棕褐色，球形，近球形， 22～ 49μ m ，外壁棘狀突起， ～ 5μ m ；未成熟黃色，透明膠質(zhì)鞘，成熟消失，外壁有尖形尾絲。不孕細(xì)胞球形，近球形，淚珠狀，半透明，淡黃褐色，附著菌絲體殘?bào)w， 13～ 33μ m 。 ?冬孢子萌發(fā) ： 4月以上休眠期，萌發(fā)產(chǎn)生 10～ 190μ m 先菌絲，上產(chǎn)生 65～ 185個(gè)擔(dān)孢子，長鐮刀形，可不配對(duì)結(jié)合，而直接產(chǎn)生芽管，作侵染菌絲用。 A partially mature teliospore showing ornamentation in median view A partially mature teliospore showing ornamentation in surface view ?初侵染來源： 種子帶菌，土壤帶菌，秸稈和糞肥等帶菌。 冬孢子可存活 5年。 ?傳播： 種子；運(yùn)輸工具、包裝材料及下腳料；糞肥；雨水 。也可氣傳。 ?生理分化： 異宗配合，印度 7個(gè)生理小種。 ?發(fā)生規(guī)律： 冬孢子萌發(fā)的適溫 15～ 22 ℃ ，揚(yáng)花期先菌絲產(chǎn)生的擔(dān)孢子隨氣流傳播到麥穗上，產(chǎn)生次生擔(dān)孢子，上生芽管，從穎片、外稃和內(nèi)稃開張的氣孔侵入。 在一定溫度范圍內(nèi)，該病流行與濕度正相關(guān)，與溫度反相關(guān)。因此，揚(yáng)花期遇多云、寡日照、細(xì)雨多霧的高濕天氣適宜發(fā)病。 ? 檢驗(yàn)方法 ： ① 直接檢查：根據(jù)病粒的特有癥狀鑒定 ② 洗滌檢驗(yàn) ③ 發(fā)病輕的麥?？捎?％ NaOH浸 24h（ 18～ 25 ℃ ），吸去多余液體，實(shí)體顯微鏡下觀察。烏黑發(fā)亮的種子有病，淡褐色無病。 ④ PCR技術(shù)： 擴(kuò)增引物為 5’CGTGTGAGCCATGCTACGACT3’和 5’AACTTCCAAGGCGACCGTTT3’，在 743bp處有一特異性擴(kuò)增帶，其他近似種或相關(guān)種均未出現(xiàn)該擴(kuò)增帶。 ? 檢疫和防治： ① 嚴(yán)格檢疫 ② 高溫滅菌：帶菌小麥原糧必須集中在幾個(gè)規(guī)定有條件的口岸加工滅菌處理。采用高溫滅菌法，85℃ ，相對(duì)濕度 80％，處理 3min可以殺死孢子，處理 5min可以殺死菌癭。 ③ 農(nóng)業(yè)措施：小麥與鷹嘴豆間作，適時(shí)早播，病輕。 ④ 化學(xué)防治：三唑類和苯并吡咯類拌種，噴灑藥劑（萎銹靈）等。 煙草霜霉病 Tobacoo blue mold ?分布與危害： 1891年澳大利亞首先報(bào)道，后傳入歐洲、非洲、美洲和亞洲，現(xiàn)廣泛分布，中國尚未發(fā)現(xiàn)。 苗床和田間均發(fā)病，蔓延速度極快，引起大量植株枯死，是煙草的毀滅性病害。 1960年歐洲流行，法國和比利時(shí)煙草損失 80～ 90％， 1961年損失干煙葉 100,000噸。 ?寄主范圍： 專性侵染，寄主范圍窄，主要侵染煙草，自然條件下，還可侵染番茄、辣椒、茄子和馬鈴薯等茄科植物，人工接種可侵染矮牽牛、酸漿和燈籠草等。 ? 癥狀 ： ① 發(fā)病時(shí)期：主要在苗期，大田期也發(fā)生。 ② 發(fā)病部位：主要為害葉片。 ③ 癥狀特點(diǎn)：因病原菌的生理型不同，受害部門也有差異，如美國流行的是美國生理型。主要危害幼苗，成株感染較少，不易感染莖部；歐洲流行提澳洲生理型，其危害特點(diǎn)是除危害煙草幼苗外，還能危害煙莖和成株。病葉表面和邊緣表現(xiàn)淡黃色、黃綠色、暗綠色的病斑，病斑為圓形、近圓形、多角形或形狀不規(guī)則。病害發(fā)展迅速時(shí)，病斑可相互連接起來，布滿整個(gè)葉片，或沒有明顯的界限。病葉背面密生灰藍(lán)色或灰褐色的霜霉層，干煙葉一般表現(xiàn)為灰白色或灰褐色，苗床上的病苗表現(xiàn)為灰藍(lán)色。條件適宜時(shí)，葉表面也產(chǎn)生霜霉層，隨著病斑的發(fā)展，逐漸變褐色，甚至深褐色，最后成為枯褐色。干煙葉上病斑表面有突起，老病斑邊緣有一圈青褐色環(huán)，與馬鈴薯晚疫病癥狀相似?？竞蟮臒熑~癥狀尚隱約可見；空氣濕度大時(shí)，病斑更為明顯。 ④ 煙草霜霉病與其他病害