20xx年醫(yī)學專題—愛愛醫(yī)資源—免疫膠乳濁度分析在自動生化分析儀上應用-文庫吧
2024-11-12 00:30 本頁面
【正文】 比濁法技術，架起了現(xiàn)代生化檢驗和現(xiàn)代免疫技術的橋梁。 免疫化學是免疫學技術和生物化學技術的結合。既具有(j249。yǒu)免疫學抗原抗體結合的特異性，又具有(j249。yǒu)生物化學反應動力學特點。,11,透射還是(h225。i shi)散射,第十一頁，共四十八頁。,透射(t242。u sh232。)免疫比濁,可溶性抗原(k224。ngyu225。n)與其特異性抗體，在一定緩沖液中形成的復合物，經(jīng)一段時間聚合后出現(xiàn)濁度，人射光在滲過反應液時，由于溶液內(nèi)IC粒子對光線的反射和吸收，引起透射光減少，可用吸光度A表示。 用已知濃度的標準參考品建立標準曲線，測出待測抗原的含量。 透射比濁法主要用于生化分析儀。,12,第十二頁，共四十八頁。,透射(t242。u sh232。)免疫比濁,免疫復合物直徑為35～lOOnm，這一范圍要求近紫外光處入射光發(fā)出最大的干擾(最大吸收峰)，選擇290～410nm波長測定最佳。 由于抗原抗體結合后在短時間內(nèi)(19s)形成(x237。ngch233。ng)可見的復合物，才能進行比濁。 為了提高復合物形成速度，加入促聚劑，如4％聚乙二醇(MW：6000～8000)，可使復合物形成在3～10min完成。,13,第十三頁，共四十八頁。,比濁法中，少量的小的抗原抗體復合物極難形成濁度(zhu243。 d249。)，除非放置較長時間；如形成較大的復合物，則抗原和抗體用量也較大，顯然不符合微量化的要求。 為解決快速反應及微量化的要求，建立了免疫膠乳濁度法（immunolatex turbidimetry）。,14,免疫膠乳濁度(zhu243。 d249。)分析 （immunolatex turbidimetry）,第十四頁，共四十八頁。,其基本原理是： 將特異性抗體吸附在大小適中、均勻一致的膠乳顆粒上，當遇到相應抗原時，則使膠乳顆粒發(fā)生凝集。 單個膠乳顆粒在入射光波之內(nèi)，不阻礙光線透過；兩個(liǎnɡ ɡ232。)或兩個(liǎnɡ ɡ232。)以上膠乳顆粒凝聚時則使透過光減少。 免疫微球凝聚的程度為被測物濃度的函數(shù)，由此可測出標本中待測物的含量。,15,免疫(miǎny236。)膠乳濁度分析 （immunolatex turbidimetry）,第十五頁，共四十八頁。,16,(a)帶抗體的膠乳在1個波長之內(nèi)可透過光線 (b)結合(ji233。h233。)后，則形成光線衰減,第十六頁，共四十八頁。,該技術的關鍵在于兩個方面： 首先是選擇適用的膠乳，其大小（直徑）要稍小于波長。用500nm波長者，選擇100nm顆粒(kēl236。)較適合；用585nm波長者，則選用100～200nm顆粒為好。目前多用200nm的膠乳顆粒。 其次，膠乳與抗體結合時用化學交聯(lián)雖好，但失活也較嚴重；一般用吸附法即可。,17,免疫膠乳(jiāorǔ)濁度分析 （immunolatex turbidimetry）,第十七頁，共四十八頁。,18,免疫膠乳(jiāorǔ)濁度分析 （immunolatex turbidimetry）,第十八頁，共四十八頁。,膠乳顆粒多為惰性微球和羧基化微球 氨基化高分子納米微球 氨基化納米微球的顆粒大小較傳統(tǒng)的微球更?。s0.1μm），它與抗體的結合是通過其表面的氨基與抗體的氨基端共價結合，在微球與抗體之間有一個橋聯(lián)化學臂，降低了位阻效應，不僅提高了抗體的結合率，而且還為抗體提供合適的三維空間立體結構，有效地保護了抗體與抗原(k224。ngyu225。n)結合的活性區(qū)域。 與采用惰性納米微球的傳統(tǒng)技術相比，檢測的靈敏度得到了極大的改善，最高可達到1.0ng/ml。,19,免疫(miǎny236。)膠乳濁度分析 （immunolatex turbidimetry）,第十九頁，共四十八頁。,（1）操作簡單，可在幾分鐘內(nèi)快速、準確地檢測血清蛋白含量，真實反映病情進展和評估治療效果，對于疾病的早期診斷和治療具有重要的臨床意義； （2）不易受人為操作和外界
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