【正文】 擴(kuò)散的腫 瘤 細(xì)胞， 治療腫瘤 轉(zhuǎn)移的納米藥物 新劑型 ；針對(duì)毛細(xì)淋巴管與毛細(xì)血管管壁孔隙大小的差異，構(gòu)建可通過(guò)局部注射導(dǎo)向淋巴系統(tǒng)的納米藥物新劑型，并采用葉酸、 RGD等修飾，構(gòu)建可在淋巴系統(tǒng)內(nèi)主動(dòng)靶向淋巴轉(zhuǎn)移腫瘤的納米藥物新劑型， 如功能化的自組裝納米粒、納米膠束、納米乳、納米脂質(zhì)體等 ，并 對(duì)其結(jié)構(gòu)、組成、細(xì)胞和組織特異性等進(jìn)行表征和評(píng)價(jià)。 ③ 針對(duì) 降低腫瘤 耐藥 性 的需要，設(shè)計(jì) 、 構(gòu)建能通過(guò)被動(dòng)靶向與主動(dòng)靶向 相結(jié)合進(jìn)入腫瘤組織 與 細(xì)胞，并能對(duì)腫瘤細(xì)胞內(nèi)特殊環(huán)境具有 刺激 響應(yīng)性，包括對(duì)腫瘤細(xì)胞內(nèi)的酶響應(yīng)性、谷胱甘肽還原響應(yīng)性、內(nèi)涵體和早期溶酶體的 pH 響應(yīng)性等的納米藥物新劑型， 如功能化自組裝納米粒、納米膠束、納米乳、脂質(zhì)納米粒等， 對(duì)其在細(xì)胞內(nèi) 刺激 響應(yīng)性產(chǎn)生的藥物釋放行為等進(jìn)行表征。 ④ 鑒于 大量基礎(chǔ)研究結(jié)果顯示，一些原癌基因在腫瘤細(xì)胞的高表達(dá)直接導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物敏感 性 下降，并最終造成腫瘤細(xì)胞耐藥，本項(xiàng)目擬設(shè)計(jì) 、構(gòu)建 能同時(shí)攜載 siRNA或 shRNA、 微小 RNA（或其反義物） 與 化療藥物的納米藥物新劑型，如 PEG化聚酯和帶正電荷高分子的核殼結(jié)構(gòu)納米膠束、納米凝膠、 功能化自組裝納米粒、納米乳、納米脂質(zhì) 體 等 ， 對(duì)其同時(shí)攜載 RNA干擾藥物和化療藥物的能力及細(xì) 胞內(nèi)外藥物釋放行為進(jìn)行評(píng)價(jià)。此外，還設(shè)計(jì)、構(gòu)建能同時(shí)攜載化療藥物和化療增敏劑的 納米藥物新劑型，并對(duì)其進(jìn)行表征。 （ 2） 納米藥物新劑型 抗腫瘤 轉(zhuǎn)移的藥效與 機(jī)理研究 ① 利用腫瘤組織新生淋巴管的生理學(xué)特征 ，腫瘤轉(zhuǎn)移啟動(dòng)過(guò)程及其微環(huán)境特征等， 運(yùn)用放射性核素和熒光示蹤技術(shù)，研究 采用 VEGF Lyp1等修飾的納米藥物 新劑型 對(duì) 新生淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞的主動(dòng)識(shí)別作用；研究 納米藥物新劑型 的組成、結(jié)構(gòu) 和 理化特性，尤其是 納米尺度、尋靶分子等 對(duì)新生淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞選擇 性的影響，闡明 納米藥物新劑型 的特性 與 抑制腫瘤新生 淋巴管的生長(zhǎng)，預(yù)防 腫瘤淋巴 轉(zhuǎn)移 效果間的關(guān)系 。 ② 利用轉(zhuǎn)移腫瘤細(xì)胞表面一些特異性受體高表達(dá)的特點(diǎn)， 以紫杉烷類藥物（如 紫杉醇） 、 阿霉素 和鉑類藥物（如順鉑） 等 抗腫瘤藥物 為研究藥物 ，研究 采用 葉酸、 EGF和 RGD肽 等修飾過(guò)的納米藥物載體對(duì) 肺癌或乳腺癌轉(zhuǎn)移瘤細(xì)胞的主動(dòng)識(shí)別作用， 尋找最佳的尋靶分子；研究 不同修飾的納米藥物 新劑型 對(duì)腫瘤細(xì)胞從原發(fā)瘤解離，并進(jìn)入周圍組織的能力，腫瘤細(xì)胞進(jìn)入脈管系統(tǒng)的能力，腫瘤細(xì)胞與血管及淋巴管、淋巴結(jié)內(nèi)皮細(xì)胞粘附 “著床 ”的能力，以及著床腫瘤細(xì)胞向周圍浸潤(rùn)、生長(zhǎng)繁殖、形成轉(zhuǎn)移瘤等能力的影響； 研究 納米藥物新劑型 特 異性增加化療藥物在腫瘤組織或細(xì)胞中富集，提高化療藥物 對(duì)腫瘤轉(zhuǎn)移病灶部位 選擇性，殺死已 轉(zhuǎn)移與擴(kuò)散的腫 瘤 細(xì)胞，治療腫瘤 轉(zhuǎn)移的效果。 ③ 利用組織間隙內(nèi)毛細(xì)淋巴管的生理學(xué)特征，運(yùn)用放射性核素和熒光示蹤技術(shù)，研究納米藥物新劑型導(dǎo)向淋巴系統(tǒng)的效果；研究 功能化 納米藥物新劑型 的組成、結(jié)構(gòu) 和 理化特性 ， 尤其是 納米尺度、表面親水性和荷電性質(zhì)等 對(duì)淋巴系統(tǒng)導(dǎo)向速度和程度、 對(duì)注射部位和正常淋巴結(jié)損傷程度 的影響，闡明 納米藥物新劑型 的特性 與正常 組織 的 安全性、 抗淋巴系統(tǒng)轉(zhuǎn)移 腫瘤 效果間的關(guān)系 。 ④ 選 擇轉(zhuǎn)移瘤細(xì)胞表面高表達(dá)的目標(biāo)蛋白分子（如 PAR1等），將沉默這些高表達(dá)蛋白分子的 siRNA和具有腫瘤選擇性作用的尋靶分子 （如 葉酸、 EGF、 RGD肽、轉(zhuǎn)鐵蛋白 和 單鏈片段抗體 修飾等） 組裝到納米藥物新劑型上，利用納米藥物新劑型將 siRNA等定向輸送到淋巴結(jié)中的腫瘤細(xì)胞，同時(shí)利用納米藥物新劑型激發(fā)免疫系統(tǒng)固有免疫反應(yīng)水平的特性，促進(jìn)免疫細(xì)胞攻擊轉(zhuǎn)移到淋巴結(jié)中的腫瘤細(xì)胞，通過(guò)上述兩種作用的有機(jī)結(jié)合來(lái)抗淋巴轉(zhuǎn)移腫瘤。 （ 3） 納米藥物新劑型 降低 腫 瘤耐藥 性 的 機(jī)理研究 ① 選擇臨床上治療肺癌和乳腺癌的一線藥物，包括鉑類藥物（順鉑、奧鉑等）、紫杉烷類藥物（紫杉醇、 多西他賽）、阿霉素和氟脲嘧啶等，以肺癌和乳腺癌的典型耐藥細(xì)胞株 A549/T、 LCC2/ATM、 MX1/T 和 MCF7/ADR 等及相應(yīng)的敏感細(xì)胞株作為模型， 研究納米藥物新劑型 與 腫瘤耐藥細(xì)胞和敏感細(xì)胞的 結(jié)合 /粘附、攝取、 胞內(nèi) 滯留 和 轉(zhuǎn)運(yùn)等過(guò)程與經(jīng)時(shí)變化規(guī)律，研究其入胞速度與程度、胞內(nèi)分布與動(dòng)力學(xué)過(guò)程，比較納米藥物新劑型在腫瘤耐藥細(xì)胞和敏感細(xì)胞中的行 為特征及其抗腫瘤活性，揭示納米藥物新劑型的組成、結(jié)構(gòu)和特性對(duì)其入胞過(guò)程及胞內(nèi)行為的影響，闡明其與降低腫瘤耐藥性之間的關(guān)系。 ② 研究納米藥物新劑型對(duì) 肺癌和乳腺癌 細(xì)胞凋 亡信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的影響，通過(guò)形態(tài)學(xué)觀察、 DNA 凝膠電泳、酶聯(lián)免疫（ ELISA）和 TUNEL 法等檢測(cè)腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞凋亡，測(cè)定葡萄糖神經(jīng)酰胺合成酶（ GCS）的活性，測(cè)定 與 腫瘤細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白（ Bcl2， BclXL 等）及編碼基因的表達(dá)，探討細(xì)胞凋亡信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與納米藥物新劑型降低腫瘤耐藥間的關(guān)系。 ③ 研究納米藥物新劑型對(duì)腫瘤耐藥細(xì)胞藥物外排系統(tǒng)和細(xì)胞解毒途徑的影響，通過(guò)測(cè)定納米藥物新劑型在腫瘤耐藥細(xì)胞和敏感細(xì)胞中的藥物濃度，細(xì)胞中的 ATP 酶活性，腫瘤耐藥轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（ Pgp、 MRP、 BCRP 和 LRP 等）及編碼基因的表達(dá) ，闡明藥物外排系統(tǒng)與納米藥物新劑型降低腫瘤耐藥性的關(guān)系；通過(guò)測(cè)定細(xì)胞中谷胱甘肽的含量及谷胱甘肽 S 轉(zhuǎn)移酶的活性，揭示細(xì)胞解毒途徑與納米藥物新劑型降低腫瘤耐藥性的關(guān)系。 ④ 研究納米藥物新劑型在腫瘤耐藥細(xì)胞和敏感細(xì)胞動(dòng)物模型體內(nèi)的藥物動(dòng)力學(xué)行為和藥效，考察其在體內(nèi)各組織、器官中 的 分布，探討納米藥物新劑型在腫瘤部位 的 分布特征及動(dòng)力學(xué)行為，測(cè)定納米藥物新劑型抑制腫瘤生長(zhǎng)、抑制GST和 GCS酶活性、體內(nèi)腫瘤細(xì)胞凋亡、腫瘤耐藥轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（ Pgp、 MRP、 BCRP和 LRP等）和細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白及編碼基因的表達(dá)，從整體動(dòng)物 水平探討納米藥物新劑型降低腫瘤耐藥的作用機(jī)理。 （ 4） 抗癌藥物納米新劑型 及相關(guān)納米材料 生物安全性 研究 ① 研究抗 腫瘤轉(zhuǎn)移 或 降低 腫瘤耐藥 納米藥物新劑型 及相關(guān)納米材料 的組成、結(jié)構(gòu)和特性等對(duì) 腫瘤 細(xì)胞分裂、增殖 和 凋亡等過(guò)程和相關(guān)信號(hào)傳導(dǎo)通路調(diào)控的影響，用表達(dá)譜基因芯片檢測(cè) 納米 載體材料對(duì)靶細(xì)胞基因表達(dá)的影響，并找出相關(guān)基因，闡明不同納米藥物新劑型 及相關(guān)納米材料 產(chǎn)生毒性的靶點(diǎn)、作用機(jī)理和作用規(guī)律，在細(xì)胞水平上初步揭示抗 腫瘤 納米藥物新劑型 及相關(guān)納米材料 的 生物安全性。 ② 研究 納米藥物新劑型 及相關(guān)納米材料 對(duì)機(jī)體免疫系統(tǒng)影響 ，包括對(duì)吞噬細(xì)胞吞噬功能的影響，在巨噬細(xì)胞和白細(xì)胞內(nèi)的代謝過(guò)程，對(duì) DNA、 RNA的遺傳表達(dá)和蛋白質(zhì)合成的影響及與生物大分子和細(xì)胞的相互作用規(guī)律。采用免疫學(xué) 方法，研究體內(nèi)特異性抗體的產(chǎn)生、特異性的 T細(xì)胞反應(yīng)等；用細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)的手段，研究在不同條件下（濃度、時(shí)間 和 次數(shù)等），不同納米藥物新劑型 及相關(guān)納米材料 對(duì)細(xì)胞中的特定蛋白質(zhì)、細(xì)胞膜和細(xì)胞結(jié)構(gòu)與功能的影響。 ③ 對(duì) 顯著改善抗腫瘤 轉(zhuǎn)移 或 降低 腫瘤耐藥 性 的 納米藥物新劑型 及相關(guān)納米材料 ,以不同種類及不同狀態(tài)的動(dòng)物（小鼠、大鼠、兔 和 犬等）為模型，采用不同的給藥方 案（劑量、給藥次數(shù) 和 周期等）給藥后，研究不同納米藥物新劑型 及相關(guān)納米材料的 吸收、分布、代謝和排泄等體內(nèi) 藥物動(dòng)力學(xué)過(guò)程，揭示 納米藥物新劑型 及相關(guān)納米材料 的藥代動(dòng)力學(xué)特征與毒性的相關(guān)性。 ④ 對(duì) 顯著改善抗腫瘤（ 肺癌和乳腺癌）轉(zhuǎn)移 或 降低 腫瘤耐藥 性 的 納米藥物新劑型 及相關(guān)納米材料 , 采用毒理學(xué) 的 方法 ， 在整體動(dòng)物 （小鼠、大鼠、兔 和 犬等） 水平上 進(jìn)行包括 急性毒性、長(zhǎng)期毒性和一般藥理學(xué)等安全性 評(píng)價(jià)研究； 采用形態(tài)觀察和生化檢測(cè)等方法，考察不同納米藥物新劑型 及相關(guān)納米材料 對(duì)分布較多的組織或器官（如淋巴組織、血液 、 心、肝、脾、肺、 腎等）的形態(tài)和功能的影響，如有明顯改變，則研究其作用的可逆性以及長(zhǎng)期應(yīng)用的影響等。 技術(shù)途徑 本項(xiàng)目將采用多學(xué)科相互交叉、滲透和有機(jī)結(jié)合的模式，以 納米藥物 新劑型抗 腫瘤轉(zhuǎn)移 或 降低 腫瘤耐藥，改善肺癌和乳腺癌的治療效果為目標(biāo)， 通過(guò)合成新的功能性納米材料，設(shè)計(jì)、構(gòu)建可調(diào)控的納米 藥物 載體，利用先進(jìn)的納米表征技術(shù)和體內(nèi)外檢測(cè)手段，系統(tǒng)地研究 納米 藥物 新劑型的組成成分、 組裝機(jī)制、 結(jié)構(gòu)特性、理化特性 、體內(nèi)外的作用機(jī)理和生物效應(yīng)， 為揭示納米技術(shù)進(jìn)一步 改善肺癌和乳腺癌治療效果 提供研究方法和理論依據(jù)，具體技術(shù)途徑 見圖 2。 創(chuàng)新性 本項(xiàng)目在學(xué)術(shù)思路、材料、劑型 和 技術(shù)等方面都具有明顯的創(chuàng)新性。 ① 提出新思路， 抓住 “轉(zhuǎn)移 ”與 “耐藥 ”這兩個(gè)造成腫瘤難以治愈和復(fù)發(fā)的關(guān)鍵問題，提出采用功能化的納米材料構(gòu)建納米藥物新劑型，從 分子、細(xì)胞、組織和整體動(dòng)物水平上系統(tǒng)揭示 抗 腫瘤轉(zhuǎn)移與降低腫瘤 耐藥性的機(jī)理 ，探索其生物安全性的評(píng)價(jià)方法，力爭(zhēng)在改善腫瘤治療 的 效果方面取得突破。 圖 2 納米藥物新劑型改善腫瘤治療 效果 的 技術(shù) 途徑 功能性納米材料、納米藥物新劑型的設(shè)計(jì)、構(gòu)建與表征 功能性納米材料的設(shè)計(jì)、合成、改性、修飾及表征 抗腫瘤轉(zhuǎn)移的納米藥物新劑型設(shè)計(jì)、構(gòu)建、表征及質(zhì)量研究 降低腫瘤耐藥納米藥物新劑型的設(shè)計(jì)、構(gòu)建、表征及質(zhì)量研究 納米藥物新劑型抗腫瘤轉(zhuǎn)移和 降低腫瘤