普通病理學(xué)實(shí)習(xí)報(bào)告-文庫(kù)吧
2025-07-21 07:58 本頁(yè)面
【正文】 加入半碟75%酒精、%升汞、無(wú)菌水。選取一小片新鮮的柑橘潰瘍病植株維管束病組織，用清水洗凈；洗凈后放于裝有75%酒精的小碟中進(jìn)行表面消毒30秒~1分鐘；%升汞中消毒1分鐘；將病組織加入到無(wú)菌水的小碟中漂洗3次。 ② 搗碎：滴1~2ml無(wú)菌水在一個(gè)滅菌小皿中，將消毒好的病組織搗碎在所滴無(wú)菌水中，攪拌后靜置10分鐘，用以制備菌懸液。 ③ 劃線：用接種環(huán)沾取一環(huán)菌懸液，用劃線分離法在準(zhǔn)備好的培養(yǎng)基中劃線4次，每劃完一次在酒精燈下灼燒一次。 ④ 培養(yǎng)：將劃線的平板倒置，寫(xiě)好標(biāo)簽（注明姓名和日期），置于25—28℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，3—5天后觀察結(jié)果。要求及注意事項(xiàng)：a先倒平板，每2人一個(gè)小三角瓶，共倒4個(gè)皿，沒(méi)人分離兩個(gè)皿；b無(wú)菌操作，保持環(huán)境干凈，減少人員流動(dòng)；c分離時(shí)保持安靜；d劃線時(shí)動(dòng)作要輕微，不要?jiǎng)澠婆囵B(yǎng)基。 成果展示：（2）植物病原真菌的分離與培養(yǎng)步驟： ① PDA培養(yǎng)基：在酒精燈火焰上方將PDA培養(yǎng)基倒在無(wú)菌培養(yǎng)皿中，倒的過(guò)程中應(yīng)避免污染。 ② 消毒：并取3個(gè)小碟，分別加入少許95%的酒精點(diǎn)燃消毒。然后在其中依次分別加入半碟75%酒精、%升汞、無(wú)菌水。切取十小片新鮮的真菌性病害植株組織（取病健部位），用清水洗凈；洗凈后放于裝有75%酒精的小碟中進(jìn)行表面消毒少于40秒鐘；%升汞中消毒不超過(guò)40秒鐘；將病組織加入到無(wú)菌水的小碟中漂洗3次。 ③ 放置：選取十小片病組織中較合格的五片，用鑷子夾起并輕輕放在培養(yǎng)基上。 ④ 培養(yǎng)：將劃線的平板倒置，寫(xiě)好標(biāo)簽（注明姓名和日期），置于25—28℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，3—5天后觀察結(jié)果。要求及注意事項(xiàng)：a無(wú)菌操作，防止培養(yǎng)基受污染b放置病組織于培養(yǎng)基時(shí)，為防止平板倒置時(shí)病組織掉落，可輕輕用鑷子按下病組織，使之固定，但動(dòng)作要輕微，不能弄破培養(yǎng)基。成果展示： （沒(méi)有分離出相應(yīng)的真菌）原因分析：1. 培養(yǎng)皿很干凈:可能沒(méi)有找到病原部位或者在制作過(guò)程中用了酒精燈加熱；2. 培養(yǎng)皿受污染：在制作過(guò)程中讓實(shí)驗(yàn)室的菌物進(jìn)入培養(yǎng)皿。（寄生性線蟲(chóng)與腐生性線蟲(chóng)區(qū)別觀察）；（1）植物病原線蟲(chóng)的分離（貝曼漏斗法）： ① 分離前用水洗凈分離線充所需實(shí)驗(yàn)器材，有漏斗、小試管、篩網(wǎng)。 ② 分離時(shí)在漏斗下面接一個(gè)小管后，在漏斗中加入適量的水；漏斗放大小適中的篩網(wǎng)，篩網(wǎng)上鋪一張紙巾（維達(dá)牌）后，加土樣于篩網(wǎng)上，土樣要淹沒(méi)在水中（若之前加的水過(guò)少，則用蒸餾瓶小心的在漏斗邊緣注入水直至淹沒(méi)土樣），靜置漏斗24小時(shí)。注：每小組采集了三種種植不同作物的土樣，每種土樣都要進(jìn)行植物病原線蟲(chóng)分離，故上述實(shí)驗(yàn)共操作三次。(2)植物病原線蟲(chóng)的觀察： ① 將小試管中收集到的物質(zhì)倒入小皿中，在解剖鏡下尋找線蟲(chóng)。 ② 找到線蟲(chóng)后用膠頭滴管將線蟲(chóng)吸到凹玻片中，蓋上蓋玻片，玻片在酒精燈上來(lái)回移動(dòng)3~4次后，用顯微鏡尋找并觀察、判斷所分離出線蟲(chóng)。（有口針的線蟲(chóng)為寄生線蟲(chóng)，無(wú)口針的線蟲(chóng)為腐生線蟲(chóng)；有交合刺的線蟲(chóng)為雄蟲(chóng)，無(wú)交合刺的線蟲(chóng)為雌蟲(chóng)）（3）成果展示 這個(gè)實(shí)驗(yàn)還算成功，腐生型的、寄生型的都被我們找到了，而且，部分線蟲(chóng)可以很清晰地看到其內(nèi)部結(jié)構(gòu)。：（1）選取鑒定完成的病害病癥典型的葉片，至少兩片。（2）將選取的葉片置于吸水紙中，用熨斗加壓烘干葉片至葉片完全干燥。（3）將熨干的病害葉片固定在一張A4白紙上（最好展示葉片的正反面），在白紙的右下角寫(xiě)上采集時(shí)間、病害名稱、拉丁學(xué)名、采集時(shí)間、采集地點(diǎn)、采集人。（主要掌握半永久性玻片的制作）：（1）玻片標(biāo)本分類（按保存時(shí)間長(zhǎng)短、浮載劑的不同而分類）臨時(shí)玻片 保存時(shí)間：半天 浮載劑：水半永久玻片 保存時(shí)間：3—10年 浮載劑：棉藍(lán)乳酚油 封固劑：中性樹(shù)膠永久玻片 保存時(shí)間：永久 浮載劑（封固劑）：中性樹(shù)膠、加拿大樹(shù)膠（2）制作方法：挑刮法（實(shí)驗(yàn)要求）、撕表皮法、粘貼法、蓋玻片培養(yǎng)菌制作法、涂抹法、組織整體透明法、徒手切片法（實(shí)驗(yàn)要求）、冰凍切片法、石蠟切片法等等。（3）玻片制作：楊媚老師指導(dǎo)我們的實(shí)習(xí)要求是學(xué)習(xí)用挑刮法制作豇豆煤霉?。≒seudocercospora cruenta）和徒手切片法制作竹子黑痣病菌（Phallychora graminis）的半永久玻片。 Ⅰ.挑刮法制作豇豆煤霉?。≒seudocercospora cruenta）的半永久玻片：步驟：在載玻片上滴一滴浮載劑，用刀片沾取浮載劑后刮下豇豆葉表面上生長(zhǎng)良好的粉狀物，并將其點(diǎn)在已滴有浮載劑的載玻片上，蓋上蓋玻片；在顯微鏡下觀察到煤霉菌的分生孢子梗上著生著串生的橢圓形或卵形分生孢子；完成后寫(xiě)上標(biāo)簽。 注意：a不能兩種菌混雜；b浮載劑不能太大滴；c蓋玻片要用手帕擦干凈。 Ⅱ.徒手切片法制作竹子黑痣病菌（Phallychora graminis）的半永久玻片：步驟：選取小黑粒較多且明顯突出的病組織，將病組織切成長(zhǎng)1cm,（橫切或縱切皆可）；在載玻片上連續(xù)快速切片；切完后滴上適量清水，在解剖鏡下挑取至少3個(gè)能夠觀察到子囊殼中子囊的薄片；
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