動物細(xì)胞培養(yǎng)常用技術(shù)-文庫吧
2025-07-20 14:27 本頁面
【正文】 階段：或稱繼代培養(yǎng)。也就是細(xì)胞系（Cell line）階段，細(xì)胞增殖旺盛，一般細(xì)胞可傳代1050代）。 ： 自發(fā)性轉(zhuǎn)化（Spontaneous Transformation）：其標(biāo)志是獲得永生性（Immortality）或惡性性（Malignancy）: 細(xì)胞獲持久性增殖能力，這樣的細(xì)胞群體稱無限細(xì)胞系(Infinite cell line)或連續(xù)細(xì)胞系(Continuous cell line)。 如：BHK（倉鼠腎成纖維細(xì)胞），F(xiàn)9（小鼠胚胎癌細(xì)胞），M2R（黑色素瘤細(xì)胞）等。培養(yǎng)細(xì)胞的傳代培養(yǎng) 當(dāng)細(xì)胞生長達(dá)到一定密度后，都需要做傳代處理，傳代的頻率或間隔與培養(yǎng)液的性質(zhì)、接種細(xì)胞的數(shù)量和細(xì)胞增殖速度有關(guān)。所謂細(xì)胞“一代”，即從細(xì)胞接種到分離再培養(yǎng)的一段時間。如某一細(xì)胞系為50代即該細(xì)胞已傳代50次。 細(xì)胞傳代的三個階段 1）潛伏期（Latent phase）： 細(xì)胞從接種到貼壁生長繁殖的一段時間。二倍體細(xì)胞該期時間長（24~96h）；連續(xù)細(xì)胞系時間短（10~30min）。 2) 指數(shù)生長期（Logarthmic growth phase）： 細(xì)胞增殖最旺盛時期，一般用細(xì)胞分裂指數(shù)（Mitotic index，MI）表示，即細(xì)胞群中每1000個細(xì)胞中的分裂相數(shù)。~%，且受細(xì)胞種類培養(yǎng)液成分、pH、溫度等影響。指數(shù)生長期是細(xì)胞活力最好的時期，在接種細(xì)胞數(shù)量適宜情況下，指數(shù)生長期持續(xù)35d后，隨細(xì)胞數(shù)量不斷增多，生長空間日趨減少，細(xì)胞相互接觸匯合成片，呈現(xiàn)接觸抑制（Contact inhibition）。而惡性細(xì)胞則無接觸抑制現(xiàn)象，因此接觸抑制可作為區(qū)分正常與癌細(xì)胞標(biāo)志之一。癌細(xì)胞則由于營養(yǎng)成分的消耗和細(xì)胞代謝產(chǎn)物的影響而發(fā)生密度抑制（Density inhibition）3)停滯期（Stagnate phase）： 即細(xì)胞數(shù)量達(dá)到飽和密度后，細(xì)胞與營養(yǎng)液的交換面積減少，代謝產(chǎn)物積累，PH下降細(xì)胞停止增殖，進(jìn)入停滯期。在此時應(yīng)及時進(jìn)行換液傳代，否則因細(xì)胞中毒受損，大量細(xì)胞出現(xiàn)死亡，至少再傳12代后，細(xì)胞才能恢復(fù)。細(xì)胞培養(yǎng)的基本條件 1)儀器和設(shè)備:常規(guī)的細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)備：如CO2孵箱；培養(yǎng)器材：如培養(yǎng)瓶，純水設(shè)備，干燥消毒除菌設(shè)備，清洗設(shè)備等。2)培養(yǎng)液:目前常用的基礎(chǔ)培養(yǎng)液均已商品化，如RPMI1640，MEM，DMEM，F(xiàn)12等，可根據(jù)培養(yǎng)需求合理選擇。細(xì)胞培養(yǎng)的基本條件 3)血清：一般常用為小牛血清(包括胎牛血清)，人血清和其它動物血清。 由于不同的研究目的，血清成分往往干擾研究實(shí)驗(yàn)，如進(jìn)行藥物和受體及營養(yǎng)等方面的研究時，需要使用無血清培養(yǎng)基。 細(xì)胞培養(yǎng)的基本條件4)平衡鹽溶液:主要用于作為稀釋和灌注的液體，維持細(xì)胞滲透壓，提供緩沖系統(tǒng)，使培養(yǎng)液的酸監(jiān)度維持在培養(yǎng)細(xì)胞生理范圍內(nèi)，提供細(xì)胞正常代謝所需的水分和無機(jī)離子等。常用的有PBS，Hank’s等。5)抗生素:常用為青霉素（每毫升培養(yǎng)液50~100單位）和鏈霉素（每毫升培養(yǎng)液50~100微克）。
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