二元手性選擇體系毛細管電泳分離檢測未衍生化氨基酸對映體的研究-文庫吧
2025-07-20 13:35 本頁面
【正文】 時，各取適量以制得不同濃度的電泳運行液。D,L苯丙氨酸和L苯丙氨酸配制成1 mg/mL的儲備液，進樣時用緩沖液稀釋到所需的濃度。 實驗方法毛細管柱在使用前依次用去離子水、 mol/L HCl溶液、去離子水、 mol/L NaOH溶液、去離子水和運行緩沖液分別沖洗約5 min，檢測電極用超聲波清洗，電極及檢測池的制作參見文獻[10]。采用電動進樣方式，進樣時間為8 s， kV，分離電壓為＋15 kV。實驗在室溫（25℃）、相對濕度75%的實驗條件下進行。3 結果與討論實驗僅采用銅離子作手性選擇劑，苯丙氨酸對映體未能達到分離，結果見圖Ⅱ.a；在銅離子存在的運行液中，加入L賴氨酸，以CuLLys作配體絡合手性選擇劑，苯丙氨酸對映體不能達到基線分離，見圖Ⅱ.b；實驗中發(fā)現，在上述體系中添加羥丙基甲基纖維素（HPMC），苯丙氨酸對映體的分離度得到改善，如圖Ⅱ.c所示。因此采用Cu(II)LLysHPMC的運行體系，本文認為HPMC和Cu(II)LLys形成二元手性選擇劑協(xié)同體系，提高了對映體的分離度。在配體交換中，配體和中心離子的選擇、配體與中心離子的濃度比、配體與中心離子形成的絡合物的濃度對分離度有至關重要的影響。本實驗通過固定Cu(II) mmol/L，改變L賴氨酸的濃度( mmol/L, mmol/L, mmol/L, mmol/L)，考察了不同摩爾配比對分離度的影響，見表I所示。結果發(fā)現當Cu(II):LLys=1 : 1時，對映體得不到分離；當配比為1 : ；當配比達到1 : 2時，對映體已達到基線分離；當配比為1 : 3時，對映體峰的遷移時間增加，分離效果沒有得到改善。因此，本實驗選擇銅和L賴氨酸絡合物的最佳配比為1 : 2。固定銅和L賴氨酸絡合物的摩爾配比為1 : 2，在0～ mmol/L濃度范圍內考察銅和L賴氨酸絡合物濃度對苯丙氨酸分離度的影響。逐漸增大絡合物的濃度，分離度提高，對映體遷移時間減少； mmol/L時，分離度明顯下降，對映體得不到分離（見表I）。因此，本實驗選取絡合物的最佳添加濃度為銅: L賴氨酸＝ mmol/ L : mmol/L。圖Ⅱ 三種不同的手性選擇體系對分離度的影響Fig.Ⅱ The effect of three different chiral selectors on the resolutiona. Cu(II) b. Cu(II)+Llys c. Cu(II)+LLys+HPMCConditions: (concentration of Cu(II), LLys, HPMC: mmol/L, mmol/L, 20 mg/L)。 mmol/L NaOH+ mmol/L Cit。 working voltage: 15 kV。 injection time: 8 s。 injection voltage: kV.表I 銅和L賴氨酸絡合物配比和濃度對分離度的影響Tab. I The effect of concentration ratio of Cu(Ⅱ) to LLys , concentration of Cu(Ⅱ) and LLys on the resolutionconcentration ratio of Cu(Ⅱ) to LLys(mmol/L : mmol/L)1 : 11 : 1 : 21 : 3Rs0 concentration of Cu(Ⅱ) and LLys(mmol/L : mmol/L) : : : : Rs Conditions: mmol/L
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