總rna的提取與電泳-文庫(kù)吧
2025-07-10 07:36 本頁面
【正文】 1 Northern blotting 2 通過 Oligo (dT) 制備 mRNA 3 通過反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（ RTPCR）建立 cDNA文庫(kù) 4 用于消減雜交和消減文庫(kù)的構(gòu)建，篩選差異 表達(dá)基因 5 體外蛋白質(zhì)的生物合成 RNA的提取與電泳 7 2022/8/22 ? 苯酚法：用 SDS變性蛋白并抑制 RNase活性，經(jīng)多次酚 /氯仿抽提除去蛋白、多糖、色素等后，用 NaAC和乙醇沉淀 RNA； ? 胍鹽法：用異硫氰酸胍或鹽酸胍和 ?巰基乙醇變性蛋白，并抑制 RNase的活性，經(jīng)酚氯仿抽提后再沉淀； ? 氯化鋰沉淀法：因?yàn)殇囋谠谝欢?pH下能使RNA相對(duì)特異地沉淀，但容易使小分子 RNA損失，而且殘留的鋰離子對(duì) mRNA有抑制作用。 3. 常用方法 已有多種較為成熟的分離總 RNA的方法，常用的有 3種 : RNA的提取與電泳 8 2022/8/22 本實(shí)驗(yàn)采用 胍鹽法 。 其原理是： 在解偶聯(lián)劑異硫氰酸胍作用下，蛋 白質(zhì)與 RNA解偶聯(lián)；利用蛋白質(zhì)為 酚 – 氯仿 – 異戊醇變性后可除去 ； 而 RNA不溶于 50%異丙醇析出得到分 離純化
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