新一代的流行性乙型腦炎疫苗-文庫吧
2025-07-03 06:05 本頁面
【正文】 ro細(xì)胞種毒后，9天收毒，～,第7天的滴度最高。病毒原液離心過濾去除細(xì)胞碎片，超濾濃縮，硫酸魚精蛋白處理，蔗糖密度梯度離心，福爾馬林滅活，Al(OH)3吸附，加硫柳汞，配制成Vero細(xì)胞純化滅活疫苗(JEPIV)。把Vero細(xì)胞純化滅活疫苗(JEPIV)與現(xiàn)在國際通用的日本鼠腦純化乙腦滅活疫苗（JEVaX），在小鼠模型做免疫原性和保護(hù)力對比，半數(shù)有效免疫劑量（ID50 ）JEPIV是4ng，JEVaX是15ng。JEPIV引起100%中和抗體陽性的最低劑量是32ng。免疫小鼠后，用乙腦SA14株≤1000LD50的病毒量攻毒，需要保護(hù)50%的免疫小鼠的半數(shù)有效劑量（ED50）, 。保護(hù)100%免疫小鼠的JEPIV的最低劑量是150ng。疫苗的純毒試驗(yàn)，用RTPCR，分析核苷酸序列與公布的SA14142株比較，只有5311核苷酸不同。疫苗是胸腺嘧啶（T），而公布的SA14142株是胞嘧啶（C）。此疫苗的優(yōu)點(diǎn)是：（1）Vero細(xì)胞培養(yǎng)乙腦病毒，可用無血清培養(yǎng)基并達(dá)到較高的滴度（～）；(2)可反復(fù)收毒，易于大規(guī)模生產(chǎn)；（3）無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)乙腦病毒，增加了疫苗的安全性，并可用簡易、經(jīng)濟(jì)的純化方法。在小鼠模型中，JEPIV較JEVaX在相同劑量下，都能保護(hù)小鼠，JEPIV有更強(qiáng)的免疫原性。JEPIV安全、有效、經(jīng)濟(jì)，將在志愿者中進(jìn)行I期臨床觀察[12]。乙腦北京1株Vero細(xì)胞滅活純化疫苗日本Chemosero Therapeutic Research研究所的Keishin Sugawara等，以乙腦北京1株，Vero細(xì)胞為基質(zhì)開發(fā)出滅活純化疫苗。細(xì)胞庫：Vero細(xì)胞122代購自ATCC，126代建立主細(xì)胞庫，129代建立工作細(xì)胞庫。然后對細(xì)胞庫進(jìn)行生物安全檢查合格。病毒庫：使用無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)北京1株，種毒5天后收毒。在第2代建立主種子批（MVB），第4代建立工作種子批（WVB），第9代建立擴(kuò)大種子批（EVB）。無菌試驗(yàn)，外源因子檢測合格，核苷酸序列分析各種子批都一致。為了便于大規(guī)模的工業(yè)生產(chǎn)該疫苗，開發(fā)了一條易于放大的工藝流程。采用培養(yǎng)罐、微載體技術(shù)培養(yǎng)Vero細(xì)胞，5L、50L、500L培養(yǎng)罐逐級放大，種毒后用無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)病毒，第3天病毒滴度達(dá)高峰（），第4天E蛋白酶標(biāo)抗體（EELISA）檢測達(dá)高峰，第4天收毒。去除細(xì)胞及碎片，超濾濃縮，福爾馬林滅活，蔗糖密度梯度離心，柱層析，再加附加劑制成Vero細(xì)胞滅活純化疫苗。177。（pg/mg）,ELISA檢測Vero細(xì)胞的蛋白質(zhì)（HCP）177。(ng/mg)。把Vero細(xì)胞和鼠腦乙腦滅活純化疫苗的物理化學(xué)和免疫原特性做一比較，見表1。表1 Vero細(xì)胞和鼠腦乙腦滅活純化疫苗的物理化學(xué)和免疫原特性比較疫苗名稱電鏡觀察病毒直徑蔗糖密度梯度離心SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDSPAGE）蛋白質(zhì)印跡（Western blot）免疫雙向擴(kuò)散效力（病毒中和滴度Log10）免疫血清中和病毒譜Vero細(xì)胞177。病毒都濃縮在43%蔗糖處結(jié)果相似都觀察到6條帶都觀察到E抗原呈雙帶抗原和免疫原性沒有差異【】【】兩者相似鼠腦177?！尽俊尽俊尽浚簠⒖家呙鐝谋?可知，乙腦北京1株在Vero細(xì)胞和鼠腦上制備的疫苗，物理化學(xué)特性和免疫原性相似[6]。對Vero細(xì)胞和鼠腦乙腦北京1株滅活純化疫苗的安全和效果，進(jìn)行了動物和I期臨床觀察。在小鼠、狗、兔中一劑量的異常毒性觀察，未顯示有毒性；致畸性試驗(yàn)，結(jié)果陰性。兩組志愿者各30名血清乙腦抗體陰性（對乙腦北京1株中和抗體滴度101），分別接種Vero細(xì)胞和鼠腦乙腦北京1株滅活純化疫苗。兩組局部藥物反應(yīng)，頭痛和不舒服輕微，%，%。兩組接種3針后，血清陽轉(zhuǎn)率都是100%，幾何抗體平均滴度（GMT），[13]。黃熱乙腦嵌合病毒（ChimeriVaxJE）Vero細(xì)胞減毒活疫苗黃熱病毒（YF）17D株，制備黃熱病減毒活疫苗有60年的安全和有效的使用
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