【正文】 方面應(yīng)用廣泛，具有增加冠脈、腦血管流量。抗心肌缺氧、缺血、抗心率失常、軟化血管、降低血清膽固醇、抑制血小板凝聚、抗?jié)?、抗腫瘤、抗炎、抗過敏、清楚體內(nèi)自由基、抗衰老增強免疫力的作用。由于黃酮類化合物的這些生物活性使它的研究進入了一個新的階段，掀起了黃酮類化合物研究、開發(fā)利用熱潮，促使其在化妝品、醫(yī)藥、食品等工業(yè)中有廣泛的應(yīng)用。黃酮類化合物可以直接從食物中獲得，如大豆、橙、洋蔥。也可以從富含黃酮化合物的植物中提取。作為食品添加劑制成各種保健食品。辣木作為一種功能性植物，有著廣闊的開發(fā)前景。目前對于辣木其他方面的營養(yǎng)物質(zhì)已有不少的報道，而辣木總黃酮為辣木中重要的有效成分之一，對辣木總黃酮的組分、功能和葉齡、器官、產(chǎn)地、采收期、管理水平、朝向等研究未見報道，目前國內(nèi)只有張濤等人采用超聲波提取法。陳瑞嬌、彭珊珊等采用乙醇回流法測定辣木葉中總黃酮含量的報道，％％。多糖指多個單糖基以糖苷鍵相連而形成的多聚物。有些多糖的長鏈是線形，另一些多糖含有支鏈。各種多糖的差別在于所含單糖單位的性質(zhì)、鏈的長度和分支的程度。多糖又稱聚糖，可以分為兩類。只含有一種單糖單位的多糖，如淀粉叫做同多糖；含有兩種或更多種單糖單位的多糖叫做雜多糖，如透明質(zhì)酸。多糖一般沒有精確的分子量，其中的單糖單位可因細胞的代謝需要增加或減少。多糖在自然界分布很廣，其功能是多種多樣的。有些多糖是單糖的貯存形式；許多多糖是單細胞微生物、高等植物細胞壁和動物細胞外部表面的結(jié)構(gòu)單元；另一些多糖是脊椎動物結(jié)締組織和節(jié)肢動物外骨骼的組分。結(jié)構(gòu)多糖有保護、支撐的作用。最重要的貯存多糖是淀粉和糖原。但由于其結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性和研究手段的局限性，使糖的研究遠滯后于蛋白質(zhì)和核酸。在20世紀60年代，人們就發(fā)現(xiàn)多糖復(fù)雜的生物活性和功能，可以調(diào)節(jié)免疫功能，促進蛋白質(zhì)和核酸的生物合成，調(diào)節(jié)細胞的生長，提高生物體的免疫力，具有抗腫瘤、抗癌和抗愛滋病(AIDS)等功效。又因多糖毒性極小，所以對多糖類物質(zhì)的研究將成為繼蛋白質(zhì)和核酸之后的探索生命奧妙的第三里程碑。多糖作為一類重要的生物活性物質(zhì)。到目前為止，雖然只有云芝多糖、豬苓多糖、香菇糖、茯苓多糖等少數(shù)應(yīng)用于臨床，但它們在抗腫瘤、抗凝血、抗突變、降血脂、抗衰老、抗病毒等疑難病癥的治療方面已顯示了誘人的前景。近些年來，我國科技工作者在多糖的研究中，特別是真菌多糖和傳統(tǒng)的中醫(yī)藥多糖研究中取得可喜的成果。但是，國內(nèi)多糖的研究一般僅限于分離純化、化學組成、生物活性和免疫藥理研究，糖結(jié)構(gòu)的分析和多糖構(gòu)效關(guān)系研究沒有很大突破。而國外，特別是日本學者加強了對中藥多糖活性片段(活性決定簇)的化學結(jié)構(gòu)與功能關(guān)系的系統(tǒng)研究，并在柴胡、當歸多糖研究方面取得了突破性進展。研究認為多糖像蛋白和酶一樣可能在多糖分子中存在一個或幾個寡糖片斷的“活性中心”，并從大量中藥多糖一級結(jié)構(gòu)中探索其活性片段。 研究多糖的活性片段及活性片段與多糖之間的關(guān)系，不僅有利于研究復(fù)雜的多糖結(jié)構(gòu)，且對揭示多糖結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系具有重要意義，對闡明多糖在機體內(nèi)的吸收分布、代謝途徑等動態(tài)變化以及作用機制都有重要的價值。特別是多糖制品的功效和多糖類藥物的質(zhì)量控制標準的研究都將起到重要促進作用。國際上對糖類的研究日新月異，內(nèi)容包括糖生物學、糖工程等，并且相繼多次召開了有關(guān)“糖生物學和糖工程”的專題會議，1995年3月。亞洲分子生物學組織(AMBO)還在日本舉辦了“糖生物學和糖工程”培訓班。目前，日本、美國、及歐盟十分重視糖類的研究，歐盟在1994一1998年的研究計劃中啟動了“歐洲糖研究與開發(fā)平臺”，旨在協(xié)調(diào)歐洲的糖研究與開發(fā)，強化在糖的研究成果轉(zhuǎn)化成商品與美國和日本競爭的能力。值得指出的是我國對于糖的研究尚無重大計劃。植物多糖的廣泛生物活性已被人們認知。植物多糖藥理作用極其廣泛，其獨特活性和低毒效應(yīng)在臨床應(yīng)用中具有很大潛力。多糖已越來越受到人們關(guān)注。為此有學者預(yù)言2l世紀前幾十年將是“多糖時代”。多糖作為一種重要生命物質(zhì)，具有豐富生物活性，且無毒副作用，這有利于我們進一步開發(fā)新藥，并不斷擴展其在保健品、功能性食品中應(yīng)用，這是多糖區(qū)別予其它藥物一大優(yōu)勢。但由于多糖本身原因。如多糖結(jié)構(gòu)太復(fù)雜，其質(zhì)量標準不易控制；多糖結(jié)構(gòu)測定及合成有其自身難度和特殊性；有些多糖在天然產(chǎn)物中含量低而不易分離及多糖藥理活性與多種因素有關(guān)，給多糖研究和臨床應(yīng)用帶來很大限制。而我國各種多糖資源豐富，尤其是來源于中草藥植物多糖，具有巨大開發(fā)潛力。要使更多多糖應(yīng)用于l臨床，造福于人類，這需要廣大化學家、食品學家、以顯示多糖類化臺物廣闊應(yīng)用前景。辣木作為一種功能性植物，有著廣闊的開發(fā)前景。辣木多糖為辣木中重要的有效成分之一，對辣木多糖的組分、功能和葉齡、器官、產(chǎn)地、采收期、管理水平、朝向等研究未見報道。目前國內(nèi)只有張濤等、陳瑞嬌采用苯酚一硫酸分光光度法，陳瑞嬌、彭珊珊等采用葸酮一硫酸比色法測定辣木葉中多糖含量的報道，％、％％。近年來我國廣東、云南、海南、福建等地紛紛引種種植辣木，對辣木的開發(fā)利用研究正在南方各地展開。為了穩(wěn)定和提高辣木產(chǎn)品的有效成分含量，首先比較了有效成分黃酮和多糖的提取和測定方法并對其進行優(yōu)化，同時在測定總黃酮的乙醇回流提取法和測定多糖的苯酚硫酸分光光度法的基礎(chǔ)上，對葉齡、器官、產(chǎn)地、采收期、管理水平、朝向等與有效成分含量的關(guān)系進行了初步研究。為辣木有效成分的開發(fā)和利用建立一種快速、簡便、準確的提取方法。為辣木高效生產(chǎn)的栽培技術(shù)提供理論依據(jù)。2材料與方法辣木于2000年4月28日播種，經(jīng)過整枝，修剪，土壤肥力控制等各種管理后，經(jīng)鑒定生長情況良好，采樣時間為2007年711月。試驗材料的處理是先將各種經(jīng)試驗設(shè)計的新鮮樣品采回后，洗凈，然后于105℃殺青5min，80℃烘至恒重，粉碎，得到供試辣木粉。隨機選定60株為試驗樣本，～ cm時為標準進行標記，每次每株隨機選取2～5個葉總計120片葉以上。三次標記在1460天時分別進行采樣，每個處理每次隨機采摘30片標記葉，共采摘6次，形成三次重復(fù)。標記當天為第1天，、葉柄、莖、花、花柄、果、果莢、根各30個。并選擇同時期用于播種的種子作為供試樣本。在辣木種植區(qū)內(nèi)隨機選擇30株辣木樹為試驗樣本，在樣本樹上用彩帶做標記。從7月29日開始采收第一次，以后每30天采收一次，一直到11月26日，共采收5次。每次在樣本樹上隨機采摘45天的樣品各30個作為供試樣本。本試驗以三個種植區(qū)的辣木為材料，分別代表三種管理水平：高管理水平為每株辣木施有機肥20kg、中等管理水平為沒施肥，但在該種植地上種了兩季的花生，低管理水平為沒施肥也沒種過其他作物。分別在這三個種植區(qū)內(nèi)隨機選擇30株辣木樹為試驗樣本，在樣本樹上用彩帶做標記。從7月29日開始采收第一次，以后每30天采收一次，一直到11月26日。設(shè)向陽、背陽兩個處理，線北為背陽。隨機選定30株辣木樹為試驗樣本。在樣本樹上劃分方位，～。共標記三次。標記在45天時分別進行采樣，每個處理每次隨機采摘30片標記葉，共采摘3次，形成三次重復(fù).、硝酸鋁、氫氧化鈉、濃鹽酸、鎂粉、硫酸銨、醋酸鉛、三氯化鐵、濃硫酸、無水乙醇、甲醇、丙酮、苯酚、石油醚等均為國產(chǎn)分析純；蘆丁標準品、葡萄糖標準品為分析純。本試驗使用的儀器設(shè)備有HHSll2型電熱恒溫水浴鍋(江蘇東臺市電器廠)；RE52AA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海雅榮生化設(shè)備儀器有限公司)。SHD一Ⅲ型循環(huán)水式多用真空泵(保定高新區(qū)陽光科教儀器廠)。TDL5000B型低速冷凍奪冠離心機(上海安亭科學儀器廠)；飛穗牌JFSD100G干樣粉碎機(上海嘉定糧油儀器有限公司)：Ultrospec 2000紫外分光光度計(瑞士Amersham Pharmacia Biotech公司)等。分別采用水提取法、有機溶劑回流提取法、有機溶劑離心提取法、超聲波提取法和分級沉淀法。對辣木中總黃酮量進行測定、選出適合辣木總黃酮提取的最佳方法。，置回流提取器中，加入一定比例的乙醇在一定溫度下回流提取，提取液合并，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器減壓濃縮(溫度為6070℃，濃縮液用石油醚萃取23次，脫脂、脫色，下層溶液置100ml容量瓶中，分別加對應(yīng)濃度的乙醇至刻度，搖勻。從上述提取液中準確吸取5ml，置于25ml容量瓶中，分別用對應(yīng)濃度的乙醇定容至刻度，即得樣品溶液，備用。具體方法是分別取提取液2ml置3支潔凈干燥試管中：1)加入少許鎂粉、濃鹽酸顯紫紅色；2)加5％醋酸鉛溶液產(chǎn)生黃色沉淀；3)加5％三氯化鐵溶液顯藍綠色。，置100ml容量瓶中，加入60%乙醇至刻度，搖勻，／ml的標準溶液。、、 ml。分別置于10ml刻度試管中，各加30%乙醇至5ml，再分別加入質(zhì)量分數(shù)為5％，搖勻。室溫放置6 min，再加質(zhì)量分數(shù)為10％的Al(N∞。室溫放置6 min。再加質(zhì)量分數(shù)為4％的NaOH溶液4ml，搖勻，室溫放置10～15 min。在510nm波長下測定吸光度，同時以試劑空白作參比。 。分別置于10ml刻度試管中，平行三管，分別加對應(yīng)濃度的乙醇至5ml，余下部分按標準曲線繪制項所述的方法操作得樣品供試液。同時，置于10m1刻度試管中，％，在510hm波長下測定吸光度值，并按回歸方程計算樣品溶液中總黃酮含量。取供試液，每隔一定時間測定吸光度值，觀察其結(jié)果在顯色一定時間內(nèi)吸光度值有無變化。在方法比較的基礎(chǔ)上選擇乙醇、甲醇、丙酮等提取溶劑對辣木中總黃酮量進行測定、選擇出最適宜的提取溶劑。在此研究的基礎(chǔ)上，分別研究不同溶劑濃度(50％、60％、70％、8吣、90％)：不同乙醇用量(6倍、10倍、15倍、20倍、25倍、30倍)；不同提取溫度(50℃、60℃、70℃、80℃、90℃)：不同提取時間(30min、60min、90min、120min、150min、180min)：不同提取次數(shù)(1次、2次、3次、4次、5次)等單因素對辣木中總黃酮量的影響?？紤]到上述各因素之間的互作效應(yīng)，在單因素試驗的基礎(chǔ)上，采用四因素三水平L9(34)進行正交試驗，以確定最佳提取條件組合。正交試驗因素水平見表l。表1黃酮正交實驗因素水平表水平ABCD提取溫度/℃溶劑用量/倍提取時間/min提取次數(shù)16015901270201202380251503 分別采用水提法、回流法、酸提法、常規(guī)法和超聲法對辣木中多糖量進行測定、選出適合辣木多糖提取的方法。 準確稱取辣木干樣5g，用10倍量的石油醚80℃回流兩小時，提取兩次→過濾取濾渣→10倍量的80%乙醇80℃回流兩小時除去單糖、多聚糖→過濾取濾渣→加入一定比例的蒸餾水在一定溫度下回流提取，冷卻真空抽濾→取沉淀重復(fù)上一步驟2次→合并上清液→6065℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮→把濃縮液用Sevag法去蛋白：上清液置于一般分液漏斗中，按l：l加入Sevage溶劑(氯仿：正丁醇=4:1)，劇烈搖動20min，使其充分混勻，靜置30min，離心(10000r／min，10min)，棄去蛋白質(zhì)和氯仿層，上層水溶液按此法反復(fù)去蛋白，直至上清液中無明顯的蛋白質(zhì)出現(xiàn)為止。將透明的上清液定容至250ml，獲得多糖待測液，用于測定吸光度值。 測完吸光值后的剩余待測