生物實(shí)驗(yàn)專題復(fù)習(xí)-文庫(kù)吧
2025-04-02 07:21 本頁(yè)面
【正文】 離時(shí)的時(shí)間要嚴(yán)格控制。解離時(shí)間不足，壓片時(shí)細(xì)胞不易分散，效果不好；解離時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，根尖細(xì)胞分離過(guò)度，無(wú)法用鑷子取出進(jìn)行染色、制片。（／mL的龍膽紫溶液或醋酸洋紅液），其目的是讓染色體著色，便于觀察分裂過(guò)程中染色體的行為。（分生區(qū)細(xì)胞的特點(diǎn)：細(xì)胞呈正方形，排列緊密，有的細(xì)胞處于分裂狀態(tài)）。然后再轉(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)換器換用高倍鏡，調(diào)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋即可觀察到清晰的分裂相。，分裂期的細(xì)胞相對(duì)較少。此時(shí)應(yīng)緩慢移動(dòng)裝片，變換視野，才能觀察到各個(gè)時(shí)期的分裂圖像。而不是等待同一個(gè)細(xì)胞中下一個(gè)分裂時(shí)期的出現(xiàn)（由于在解離過(guò)程中細(xì)胞已經(jīng)死亡，不可能繼續(xù)分裂。所以在顯微鏡的視野中只能觀察到某一細(xì)胞某一時(shí)刻的形態(tài)結(jié)構(gòu)）。（四）觀察植物細(xì)胞的質(zhì)壁分離和復(fù)原1．選材時(shí)應(yīng)選用活的紫色洋蔥鱗片葉的外表皮。最外層的表皮中，有的細(xì)胞雖然含有大量的紫色花青素，但死亡的細(xì)胞太多，內(nèi)表皮細(xì)胞的液泡中花青素少呈無(wú)色，均不能選用。2．／mL的蔗糖溶液。濃度過(guò)高，質(zhì)壁分離速度雖快，但不久就將細(xì)胞殺死，不能再進(jìn)行質(zhì)壁分離復(fù)原；濃度過(guò)低不能引起質(zhì)壁分離或質(zhì)壁分離速度太慢。小于細(xì)胞液濃度的溶液選用清水。3．洋蔥表皮細(xì)胞的臨時(shí)裝片制好后首先觀察正常情況下的洋蔥表皮細(xì)胞（具有紫色的大液泡，原生質(zhì)層和細(xì)胞壁緊貼在一起），／mL的蔗糖溶液，另一側(cè)用吸水紙吸引觀察質(zhì)壁分離現(xiàn)象，接下來(lái)在蓋玻片一側(cè)滴清水另一側(cè)用吸水紙吸引觀察質(zhì)壁分離的復(fù)原現(xiàn)象。上述操作必須均在載物臺(tái)上進(jìn)行（即不把洋蔥表皮的臨時(shí)裝片從顯微鏡上取下），其目的是不變換顯微鏡視野中的細(xì)胞，從而構(gòu)成前后的自身對(duì)照。（五）葉綠體中色素的提取和分離1．葉綠體中的色素能夠溶解在有機(jī)溶劑丙酮中，所以，用丙酮（可以用酒精來(lái)代替）提取葉綠體中的色素；分離色素用的是紙層析法。由于葉綠體中的色素在層析液中的溶解度不同：溶解度高的隨層析液在濾紙上擴(kuò)散的快；溶解度低的隨層析液在濾紙條上擴(kuò)散的慢。這樣，葉綠體中的色素就在擴(kuò)散的過(guò)程中分離開來(lái)。2．在色素提取過(guò)程中，研磨時(shí)加入少許二氧化硅，目的是為了研磨得充分，有利于色素的提??；加入少許碳酸鈣的目的是中和細(xì)胞中的酸性物質(zhì)，防止研磨過(guò)程中葉綠體中的色素受到破壞。3．在色素分離的過(guò)程中，畫濾液細(xì)線時(shí)應(yīng)以細(xì)、直為標(biāo)準(zhǔn)，目的是為了防止色素帶在濾紙條上擴(kuò)散時(shí)重疊；畫線完畢等干燥后須重復(fù)畫線至顏色濃綠，是為了在濾液細(xì)線中具有更多的色素，實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象明顯。4．紙上層析時(shí)，一定不要讓濾紙條上的濾液細(xì)線接觸到層析液，這是因?yàn)樯匾兹芙庥趯游鲆褐?，?dǎo)致色素帶不清晰，影響實(shí)驗(yàn)效果。5．因丙酮和層析液都是易揮發(fā)且有一定毒性的有機(jī)溶劑，所以研磨時(shí)一定要快，收集的濾液要用棉塞塞住，層析時(shí)要加蓋，盡量減少有機(jī)溶劑的揮發(fā)。（六）DNA的粗提取與鑒定本實(shí)驗(yàn)步驟有些煩瑣，整理如下： ①加蒸餾水、攪拌 ②加2mol/L的NaCl ③緩緩加蒸餾水雞血細(xì)胞液———————→濾液中含核物質(zhì)———————→溶解DNA————— 過(guò)濾 ④過(guò)濾 ⑤加2mol/L的NaCl ⑥過(guò)濾→絲狀物（含DNA）———→紗布上的黏稠物———————→黏稠物再溶解———→含 ⑦加95％冷酒精 ⑧DNA的濾液—————→絲狀物——————————————→溶液出現(xiàn)淺藍(lán)色 沸水浴5分鐘1．實(shí)驗(yàn)中有兩次使用蒸餾水。第一次加蒸餾水是在第①步，目的是為了使血細(xì)胞吸水脹破。加水后必須充分?jǐn)嚢?，不?yīng)少于5分鐘，否則血細(xì)胞核不會(huì)充分破碎，釋放出的DNA就會(huì)減少；第二次加蒸餾水是在第③步，目的是為了稀釋氯化鈉溶液。必須充分加水，才能稀釋氯化鈉溶液，使DNA的溶解度變小，蛋白質(zhì)溶解度增大，二者分離。2．實(shí)驗(yàn)中有三次過(guò)濾。過(guò)濾時(shí)使用的紗布層數(shù)與取其濾液還是黏稠物有關(guān)。在第①、⑥兩步中因?yàn)橐闷錇V液，使用的紗布為1－2層；在第④步中的過(guò)濾要用其黏稠物，則使用的紗布為多層，該步過(guò)濾一定要有耐心，要盡最大量收集黏稠物。3．實(shí)驗(yàn)中有三次加氯化鈉溶液。第②步中加2mol/L氯化鈉后，必須充分晃動(dòng)燒杯，使二者混合均勻。加速染色質(zhì)中DNA和蛋白質(zhì)分離，使DNA充分游離并溶解在氯化鈉溶液中。第⑤步中加2mol/L氯化鈉溶液也是為了DNA的再溶解。第⑧步中加的氯化鈉溶液的濃度不是2mol/，但其目的還是為了溶解DNA。4．用酒精濃縮和沉淀DNA時(shí)所用的95％的酒精，必須經(jīng)過(guò)充分預(yù)冷后才能使用（通常為5℃以下存放24小時(shí)以上），冷酒精與含DNA的氯化鈉溶液體積比是2︰1。如果用冷酒精處理后，懸浮于溶液中的絲狀物較少，可將混合物放于冰箱中再冷卻幾分鐘，然后再用玻璃棒卷起絲狀物。5．盛放雞血細(xì)胞液的容器和實(shí)驗(yàn)中的燒杯和試管最好是塑料制品。因?yàn)椴Ａе破繁砻鎺щ姾?，DNA中的磷酸基帶相反的電荷，會(huì)被吸附于玻璃表面不易分離。（七）種群密度的取樣調(diào)查——樣方法從研究對(duì)象的總體中，抽取出來(lái)的部分個(gè)體的集合，就叫做樣方。樣方法即在被調(diào)查種群的生存環(huán)境內(nèi)，隨機(jī)選取若干個(gè)樣方，通過(guò)計(jì)數(shù)每個(gè)樣方內(nèi)的個(gè)體數(shù)，求得每個(gè)樣方的種群密度，以所有樣方種群密度的平均值作為該種群密度。其具體實(shí)施步驟為：確定調(diào)查對(duì)象→選取樣方→計(jì)數(shù)→計(jì)算種群密度。注意在取樣時(shí)，要保證總體中每個(gè)個(gè)體被抽選的機(jī)會(huì)均等，且每一個(gè)個(gè)體被選與其它的個(gè)體間無(wú)任何牽連，這樣就滿足了隨機(jī)性，叫隨機(jī)取樣。隨機(jī)取樣不允許摻入任何主觀因素?！獦?biāo)志重捕法在被調(diào)查種群的生存環(huán)境中，捕獲一部分個(gè)體，將這些個(gè)體進(jìn)行標(biāo)志后再放回原來(lái)的環(huán)境中，經(jīng)過(guò)一段時(shí)間后進(jìn)行重捕，根據(jù)重捕中標(biāo)志個(gè)體占總捕獲數(shù)的比例，來(lái)估計(jì)該種群的數(shù)量，進(jìn)而求得該種群的密度。如：在對(duì)草原上某種鼠的種群密
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