核增生李斯特氏菌檢測概述(1)-文庫吧
2025-01-06 15:21 本頁面
【正文】 孕婦 /胎兒 — 圍產(chǎn)期和新生兒的感染； ? 接受皮質(zhì)激素、抗癌劑治療、器官移植 治療、艾滋病患者等免疫缺損者； ? 癌癥病人 — 尤其是白血病的患者； ? 不太常見的報道 — 糖尿病、肝硬化、哮喘和潰瘍性結(jié)腸炎的患者； ? 年紀(jì)較大的人； ? 沒有免疫缺陷的健康的人，食用污染該菌尤其是大量污染該菌的食品后，也有患病的危險。 致病機理 ? 單增李氏菌的抗原結(jié)構(gòu)與毒力無關(guān)，它的致病性與毒力機理如下： 寄生物介導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)增生，使它附著及進(jìn)入腸細(xì)胞與巨噬細(xì)胞； 抗活化的巨噬細(xì)胞，單增李氏菌有細(xì)菌性過氧化物歧化酶，使它能抗活化巨噬細(xì)胞內(nèi)的過氧物（為殺菌的毒性游離基團(tuán)）分解； 溶血素 ，即李氏桿菌素 O，可以從培養(yǎng)物上清液中獲得，有 α和 β兩種，為毒力因子。 實驗室危害 ? 不是一種普遍的與實驗室相關(guān)的傳染病，目前只有少數(shù)有報道的案例發(fā)生； ? 直接攝取 是最普遍的一種感染方式，除此之外，暴露在該菌高濃度的氣溶膠中，也可通過眼睛和破損的皮膚、粘膜進(jìn)入體內(nèi)造成感染。 注意事項 ? 生物安全 2級 ，操作時應(yīng)有相應(yīng)的防污染設(shè)施，在進(jìn)行可能產(chǎn)生氣溶膠的操作時，應(yīng)在生物安全柜內(nèi)完成； ? 在直接接觸有感染性的材料時，必須穿著實驗服，戴手套和護(hù)目鏡； ? 懷孕的婦女 應(yīng)避免接觸傳染物。 操作要求 ? 濺灑 ：使氣溶膠沉降，穿著防護(hù)服裝，用紙巾輕輕覆蓋濺灑處，加入 1%次氯酸鈉溶液，由周邊向中心加，在清理之前要留充足的接觸時間（ 30min）； ? 廢棄 ：在廢棄前應(yīng)先采取凈化措施，高壓蒸汽滅菌、化學(xué)消毒、焚燒等； ? 儲存 ：在有適當(dāng)標(biāo)記的密封容器內(nèi)儲存。 檢測程序 增菌 目前常用的單核增生李斯特氏菌檢測增菌肉湯主要有 半量 Fraser肉湯 、 Fraser肉湯 （ FB）、 UVM（ Modified University of Vermont broth，也叫 UVM1）、 LEB（ Listeria enrichment broth）和 BLEB（ buffered Listeria enrichment broth） 半量 Fraser肉湯和 Fraser肉湯 ? 具有 選擇性 和 區(qū)別性 。 ? 加入 檸檬酸鐵銨 和 七葉靈 ，起到區(qū)別的作用。李斯特氏菌可以水解七葉靈，與培養(yǎng)基中的鐵離子反應(yīng)，使培養(yǎng)基變黑，可直觀的從培養(yǎng)液的顏色就可以判斷是否有單核李斯特氏菌的生長。 ? 氯化鋰 、 吖啶黃 和 萘啶酮酸 作為選擇性因子。 ? 半量 Fraser肉湯與 Fraser肉湯所用的添加劑一樣 半量 Fraser肉湯：萘啶酮酸 10mg/L，吖啶黃 Fraser肉湯：萘啶酮酸 20mg/L，吖啶黃的 25mg/L UVM ? UVM只有選擇性沒有區(qū)別性 ? 加入 萘啶酮酸 和 鹽酸吖啶黃 ，作為選擇性因子。雖然其中含有七葉靈，但是沒有添加檸檬酸鐵銨，不能發(fā)生黑色的顏色反應(yīng)。 LEB和 BLEB ? 只有選擇性沒有區(qū)別性 ? LEB是在 TSBYE的基礎(chǔ)上加入 鹽酸吖啶黃 、萘啶酮酸 和 放線菌酮 等選擇性因子；加入的 丙酮酸鈉 ，有助于受損細(xì)胞的恢復(fù)；不含七葉靈和檸檬酸鐵銨，無顏色反應(yīng) ? BLEB是在 LEB基礎(chǔ)上加入緩沖體系：磷酸二氫鉀和磷酸氫二鈉 檢測程序 分離 ? 分離培養(yǎng)基有： OXA、 PALCOM、 LPM、 MOX等，但首選仍然是 OXA。分離原理主要是基于李斯特氏菌具有 β－ D－葡萄糖苷酶 的活性，能水解培養(yǎng)基中的七葉靈，產(chǎn)生七葉苷，與鐵離子產(chǎn)生顏色反應(yīng)而，使菌落為棕褐色，并帶有褐色暈圈，而致病性和非致病性李斯特氏菌病都能發(fā)生這種反應(yīng) ? 還有一些選擇性顯色培養(yǎng)基，如 BCM、 ALOA、CHROMagar listeria、 Rapid’L. mono等，其原理主要是檢測由毒力基因編碼的 溶血素 ，而此種溶血素只存在于單核增生李斯特氏菌和伊氏李斯特氏菌中，因而可以很好的將此兩種菌同李斯特屬的其他種分開。 OXA平板 單核增生李斯特氏菌 ATCC 19117 48h， 35℃ 培養(yǎng) OXA平板 無害李斯特氏菌ATCC 33090 48h， 35℃ 培養(yǎng) 檢測程序 鑒定 ? 藍(lán)色菌落檢驗（ Henry illumination） ? 典型運動：相差顯微鏡，輕微旋轉(zhuǎn)或翻跟頭 動力試驗： 7天，傘形生長 ? 過氧化氫酶 試驗：陽性 ? 革蘭氏染色 ：陽性短桿菌 ? 溶血試驗 ：穿刺接種血平板 ? 硝酸鹽還原試驗： 5天，陰性 ? 糖發(fā)酵試驗 ：葡萄糖、麥芽糖和七葉靈，李斯特菌屬反應(yīng)均為陽性，除格氏李斯特甘露醇陰性，李斯特其他種甘露醇陰性， 木糖 和 鼠李糖 最有檢測意義 動力試驗 血平板 單核增生李斯特氏菌 ATCC 19117 36h， 35℃ 培養(yǎng) 血平板 無害李斯特氏菌 ATCC 33090 36h， 35℃ 培養(yǎng) 血平板 伊氏李斯特氏菌 ATCC 19119 24h， 35℃ 培養(yǎng) 單核增生李斯特氏菌檢測流程 25g樣品 +225ml BLEB基礎(chǔ)（加入丙酮酸鈉） 加入萘啶酮酸、鹽酸吖錠黃、放線菌酮 30℃ 4hr 劃線接種 OXA平板 30℃ 24hr和 48hr 科瑪嘉李氏菌顯色培養(yǎng)基 TSAYE分純 35
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1