sds-聚丙烯酰胺凝膠電泳-文庫吧
2025-01-04 09:35 本頁面
【正文】 膠束在 SDSPAGE系統(tǒng)中的電泳遷移率不再受蛋白質原有電荷的影響，而主要 取決于橢圓棒的長軸長度 ，即蛋白質或亞基分子量的大小。 當蛋白質的分子量在 15KD— 200KD之間時， 電泳遷移率與分子量的對數呈線性關系 影響 SDS電泳的關鍵因素 （ 1） 溶液中 SDS單體濃度（ 1mmol/L) 大多數蛋白質與 SDS結合的重量比為 1： （ 2） 樣品緩沖液的離子強度（不 ) 低離子強度 的溶液中， SDS單體才具有較高的平衡濃度。 （ 3） 二硫鍵是否完全被還原 當二硫鍵被 徹底還原 后，蛋白質分子才能 被解聚 ， SDS才能定量地結合到亞基上而給出相對遷移率和分子量對數的線性關系。 （二）緩沖系統(tǒng)的選擇 一般情況下，在被分析的蛋白質穩(wěn)定的 pH范圍，凡 不與 SDS發(fā)生相互作用 的緩沖液都可以使用，但緩沖液的選擇對蛋白質的分離和電泳的速度是非常關鍵的。 電泳緩沖液的種類： 磷酸緩沖液 Tris醋酸鈉緩沖系統(tǒng) 咪唑緩沖液系統(tǒng)： 比磷酸緩沖系統(tǒng)的導電性低，電泳速 度要比后者快一倍。 尿素系統(tǒng)： 適用分子量低于 15KD的蛋白樣品。 Tris甘氨酸 系統(tǒng)： 使用最多的緩沖液 Tris硼酸鹽緩沖液： 測定糖蛋白的分子量 （三）凝膠濃度的選擇 由于 SDS電泳分離并不取決于蛋白質的電荷密度，只取決于分子解聚后SDS蛋白質膠束的大小，因此凝膠濃度的選擇會直接影響分辨率。 不同分子量范圍的蛋白質應選用不同的凝膠濃度 . （四）分子量測定 相對遷移率（ Rf） Rf即用每個帶的遷移距離除以溴酚藍前沿的遷移距離得到的。 測量位置應在蛋白帶的中
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