《dna的復(fù)制和修復(fù)》ppt課件-文庫吧
2025-01-04 02:00 本頁面
【正文】 ouver, Canada （三） PCR的基本原理 首先使 DNA變性 ,兩條鏈解開 , 然后使引物與模板 退火 ,二者堿基配對 。 DNA聚合酶隨即以 4種 dNTP為底物 ,在引物的引導(dǎo)下 合成 與摸板互補(bǔ)的新鏈。 重復(fù) 這個過程， DNA以 指數(shù)方式擴(kuò)增 。 體 外 三個階段 高溫（ 90~95℃ ） 變性(Denaturation) 循環(huán)（ n次） 低溫 （ 40~60℃ ） 退火 (復(fù)性 ) (Annealing) 適溫 （ 70~75℃ ） 延伸 (Elongation) 動畫 n次循環(huán)后 DNA序列擴(kuò)增的數(shù)量 No. of No. Amplicon Cycles Copies of DNA 1 2 2 4 3 8 4 16 5 32 6 64 20 1,048,576 25 33,554,432 30 1,073,741,824 1 cycle = 2 Amplicon 2 cycle = 4 Amplicon 3 cycle = 8 Amplicon 4 cycle = 16 Amplicon 5 cycle = 32 Amplicon 6 cycle = 64 Amplicon 7 cycle = 128 Amplicon 8 cycle = 256 Amplicon 擴(kuò)增的公式： Y=( 1+X ) n 其中： Y— 產(chǎn)量； X— 擴(kuò)增效率； n— 循環(huán)次數(shù)； 設(shè) X=60%， n=30， Y = 106 （四） PCR的特點(diǎn) ? 特異性強(qiáng) ? 靈敏度高 ? 簡便、快速 ? 對標(biāo)本的純度要求低 ? 發(fā)展： PCR儀的變遷、 PCR的種類 ? 應(yīng)用： 生物學(xué)、醫(yī)學(xué) （五） PCR的發(fā)展和應(yīng)用 PCR儀 定性 定量 第一代：手動 /機(jī)械手式 +水浴 /電加熱 PCR儀 (熱循環(huán)儀 ) +電泳儀 +紫外分析儀 +定性試劑 第二代：自動化控制型 第三代：終點(diǎn)定量 PCR儀 (熱循環(huán)儀 ) +熒光儀 +終點(diǎn)熒光定量試劑 第四代：實(shí)時定量 實(shí)時定量 PCR儀＋實(shí)時熒光定量試劑 PCR儀的變遷
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