電泳法和高效毛細(xì)管電泳法-文庫(kù)吧
2025-01-03 18:30 本頁(yè)面
【正文】 HPLC 分離柱效為 5000－ 25000理論板數(shù) /m MECC 可達(dá)到 50000－ 500000理論板數(shù) /m ? 比高效液相色譜更為 高速 .MECC分離時(shí)間通常小于30min， 但達(dá)到相仿效率的毛細(xì)管 LC， 需要更長(zhǎng)的時(shí)間 。 第 10章 毛細(xì)管電泳 分離模式 第 10章 毛細(xì)管電泳 分離模式 3 毛細(xì)管凝膠電泳 CGE 是毛細(xì)管自由溶液區(qū)帶電泳派生出的一種電泳方式 用多孔性的凝膠或其它篩分劑作介質(zhì) ， 網(wǎng)狀結(jié)構(gòu) ，按分子的大小分離 毛細(xì)管凝膠電泳的特點(diǎn)： 綜合了 電泳技術(shù)和平板凝膠電泳 的優(yōu)點(diǎn) ， 1. 電泳峰尖銳 ， 柱效極高 2. 短柱上實(shí)現(xiàn)極好的分離 3. 試樣容量為 10－ 12g 主要缺點(diǎn) :制備柱較困難 ， 壽命較短 已成為分離分析生物大分子如蛋白質(zhì) 、 多肽 、 核酸 、 DNA等強(qiáng)有力的工具 。 例應(yīng)用 CGE分離與激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)相結(jié)合 ， 用于 DNA序列快速分析 。 第 10章 毛細(xì)管電泳 分離模式 第 10章 毛細(xì)管電泳 分離模式 5 毛細(xì)管電色譜 ? CEC:以電滲流驅(qū)動(dòng)流動(dòng)相 ， 開(kāi)管和填充兩種 ， 通常 填充或涂布固定相 比高效液相色譜具有更高的柱效 第 10章 毛細(xì)管電泳 分離模式 6 毛細(xì)管等電聚焦 CIEF: 建立在不同蛋白質(zhì)或多肽之間等電點(diǎn) （ pI值 ） 差異基礎(chǔ)上的分離方法 ， 通過(guò)建立 pH值梯度 。 蛋白質(zhì)的等電點(diǎn) (pI): 指蛋白質(zhì)分子的表觀電荷數(shù)為零時(shí)的 pH值 。 進(jìn)樣－等電聚焦－檢測(cè) 1. 先將脫鹽的試樣 （ 蛋白質(zhì) ） 以 ≥ 1％ 的濃度與兩性電解質(zhì)溶液混合 ， 用壓力進(jìn)樣充入毛細(xì)管柱 (陽(yáng)極端 )，置于陽(yáng)極電解質(zhì)溶液如 H3PO4中 ， 檢測(cè)端為陰極端 ，置于陰極電解質(zhì)如 NaOH中 。 2. 施加電壓 ， 進(jìn)行電泳實(shí)驗(yàn) 。 兩性電解質(zhì)離子形成 pH的位置梯度 ， 而蛋白質(zhì)在遷移時(shí)
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