現(xiàn)代微生物遺傳學第四授課單元-文庫吧
2025-01-01 10:10 本頁面
【正文】 – 位于酵母細胞核內， 50~100拷貝 – 只攜帶與復制和重組有關的 4 個基因，無遺傳表型 – 質粒上有兩個 600bp長的 IR，被一個 一個 – 兩個 IR上都有一個專一重組位點 (FRT)，經過重組，可使質?；プ儺悩嫵?A型和 B型。 第三節(jié) 質粒的檢測 ? 檢測質粒的方法主要根據質粒的（遺傳學特性）和（分子結構特性）。 – 遺傳特性：獨特的表型、轉移、人為消除等。 – 分子結構： cccDNA和染色體相比對理化因子有更強的抗性。 ? 一、質粒消除（理化因子和生物學方法） – 理化因子消除法 ? 消除劑：吖啶類， EB，某些抗生素，高溫， UV等 ? 如何判斷某一遺傳性狀的喪失是質粒消除的結果還是染色體基因突變的結果呢？ – 回復突變情況 – 突變率 ? 理化因子消除質粒的作用機制： – 對質粒本身的復制和分離產生抑制作用，在生長中被淘汰 – 選擇性抑制帶有質粒的菌的生長。 – ? 使待消除質粒的菌株在一定條件下形成原生質體，在再生后生長的菌株中可出現(xiàn)高頻率質粒消除菌。 ? 二、遺傳轉移 – 將質粒導入已經消除了該質粒的原宿主細胞，比較導入前后表型性狀的差異或恢復程度。 ? 三、分子雜交 – 在初步確定某菌株可能含有質粒的情況下，利用已知表型性狀的基因片段作探針進行分子雜交，來檢測其菌株是否含有該種質粒。 ? 四、質粒的分離、檢測與純化 – 質粒分離方法：堿變性法 ? 菌體的培養(yǎng)和收集 ? 溶菌 ? 堿變性處理 ? 離心分離 ? 有時為了快速提取質粒 DNA，可以在提取液堿變性后，用 pH到中性，這時染色體 DNA不能復性而形成纏連的網狀結構，而即使變性的質粒可以恢復到原來的構型，再通過離心，這樣可以縮短提取質粒的時間。 – 純化和檢測方法 ? 瓊脂糖凝膠電泳 (質粒 3種構型泳動速度不同，瓊脂糖濃度， EB染色，分子量的判斷 ) ? 氯化銫 EB密度梯度離心 ? 電鏡觀察 第四節(jié) 質粒的復制與調節(jié) ? 一、質粒的大小和拷貝數(shù) – ? 表示方式： MD或 kb， 1MD的雙鏈 DNA≈。 ? 測定方法：電泳、電鏡、測序。 ? 大小范圍： 1~200kb，個別 800~1000。 – ? 嚴緊型質粒 (stringent plasmid)或低拷貝質粒； ? 松弛型質粒
環(huán)評公示相關推薦
鄂ICP備17016276號-1