《菌種操作規(guī)程》ppt課件-文庫(kù)吧
2024-12-26 10:18 本頁(yè)面
【正文】 。經(jīng)無(wú)菌試驗(yàn)檢查正常。發(fā)酵搖瓶試驗(yàn)生產(chǎn)能力符合要求。 ? 生產(chǎn)能力試驗(yàn)： 原則上每批斜面孢子應(yīng)作生產(chǎn)能力試驗(yàn)，尤其在大生產(chǎn)不正常情況下，為配合發(fā)酵工藝尋找異常原因，每批斜面應(yīng)作搖瓶考察。 79天 11天 斜面孢子 搖瓶發(fā)酵 放瓶 ? 指標(biāo)要求： DW≥（對(duì)照） 94%； TL≥（對(duì)照） 94%；AA≥ 45%，指標(biāo)符合要求，方可使用，并填寫 《 搖瓶考察配制記錄 》 和 《 原材料搖瓶考察 》 。 生產(chǎn)斜面的制備 ? 生產(chǎn)斜面 分為子斜面和母斜面，其 PDA培養(yǎng)基配方如下： 成分 馬鈴薯 葡萄糖 瓊脂 KH2PO4 MgSO4 配比 20% 2% 2% % % 規(guī)格 自然 分析純 生物試劑 分析純 分析純 生產(chǎn)斜面 ? 選擇無(wú)芽馬鈴薯去皮后用蒸餾水洗干凈，稱量所需重量，并切成邊長(zhǎng) 。 ? 將馬鈴薯碎塊放在鋁鍋內(nèi)，加入一定量的蒸餾水，置于電爐上煮沸 30分鐘，邊煮邊攪拌，防止馬鈴薯結(jié)底。 ? 用雙層紗布濾出馬鈴薯原液，然后按照配方將稱量好的葡萄糖加入溶解，再用吸管吸取 KH2PO MgSO4溶液加入，用量筒定容至所需體積， PH自然。 ? 將定容后的培養(yǎng)液放置電爐上加熱，將稱量好的瓊脂，邊攪拌邊加入，待瓊脂全部融化后，取下培養(yǎng)基進(jìn)行分裝。 ? 母斜面用 30 200mm的大試管分裝，每支大試管約 20mL；子斜面用茄子瓶分裝，每支約 60mL，裝好后，塞好棉塞，用雙層紗布扎口后，再用牛皮紙?jiān)?，放置在不銹鋼筐中，蓋上牛皮紙，準(zhǔn)備消毒。 ? 將準(zhǔn)備好的不銹鋼筐放在消毒車上推入消毒柜內(nèi)，按蒸汽消毒柜使用方法用蒸汽消毒， 119～ 121℃ ，保溫 30分鐘，接種用具保溫 60分鐘。 ? 消毒結(jié)束后，取出斜面待溫度降至 40～ 50℃ 時(shí)，將大試管或茄子瓶擺成斜面，空白斜面培養(yǎng) 1～ 2天，觀察無(wú)雜菌生長(zhǎng)后，包裝好備用，并填寫 《 PDA斜面配制記錄 》 和 《 培養(yǎng)基接種用具消毒記錄 》 。 母斜面接種及培養(yǎng) ? 母斜面接種由兩人操作，一人為主操作安瓿管，一人為輔操作大試管。首先用消毒好的砂輪在安瓿管上端 1/4處劃痕，用紗布包住，掰開(kāi)上端。 ? 用毛細(xì)吸管吸取 ，攪拌均勻，然后吸取 ～ ，每支安瓿管接 3支大試管。 ? 用無(wú)菌鏟將種液在斜面上劃線，使之均勻分布，然后塞上棉塞，用雙層紗布扎口，并將接種鏟在肉湯培養(yǎng)基中蘸一下做無(wú)菌試驗(yàn)，將肉湯放置 37℃ 培養(yǎng)間培養(yǎng)。 ? 將接種后的母斜面放置培養(yǎng)間，溫度 28℃ ，濕度 50～70%，培養(yǎng) 7～ 9天，觀察生長(zhǎng)情況，并填寫 《 母斜面生長(zhǎng)記錄 》 和 《 溫度濕度原始記錄 》 。 ? 母斜面生長(zhǎng)成熟后，取下，無(wú)菌試驗(yàn)正常則用 %新潔而滅溶液滅菌后再用牛皮紙?jiān)诤蠓胖帽涞蜏乇２貍溆脺囟?2～ 8℃ ，保藏期不超過(guò) 15天；無(wú)菌試驗(yàn)不正常則按廢樣液處理辦法處理并填寫 《 廢樣液處理記錄 》 。 子斜面接種及培養(yǎng) ? 子斜面接種由兩人操作，一人為主操作，一人為輔操作。首先將子斜面和母斜面的雙層紗布解去，將繩子和紗布放在超凈臺(tái)左邊待用。主操作將母斜面和子斜面的棉塞逐個(gè)打開(kāi)，并在酒精燈火焰上燒瓶口至無(wú)水霧為止。 ? 主操作用無(wú)菌鏟將母斜面上的孢子和菌絲刮下，接種于子斜面中，利用子斜面的冷凝水 ， 將孢子和菌絲打散，均勻涂布于子斜面表面，然后塞上棉塞，用雙層紗布扎口，并將接種鏟在肉湯培養(yǎng)基中蘸一下做無(wú)菌試驗(yàn)，將肉湯放置 36～ 38℃ 培養(yǎng)間培養(yǎng)。一支母斜面接種一般接1～ 2支子斜面。 ? 將接種后的子斜面放置培養(yǎng)間，溫度 28℃ ，濕度 50～70%，培養(yǎng) 7～ 9天，觀察生長(zhǎng)情況，并填寫 《 子斜面生長(zhǎng)記錄 》 和 《 溫
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