【正文】 ％ 1997年 日本 Kawamura H, Ikeda K 胃腸道腫瘤 陽性預測值： 64%，陰性預測值： 100% 整體預測精確值： 84% 2022年 美國 Koney G, Crohns C FIGO Ⅲ 期卵巢癌 陽性預測值 ： 66%， 陰性預測值 ： 89% 敏感性 ： 95%， 特異性 ： 44% 2022年 德國 Mollgard L, Tidefelt U 急性非淋巴細胞白血病 陽性預測值 ： 86%， 陰性預測值 ： 100% 2022年 美國 O39。Meara AT, Sevin BU 上皮性卵巢癌 陽性預測值 ： 83%， 陰性預測值 ： % ATPTCA技術(shù)的臨床相關性研究結(jié)果 ATPTCA與其它藥敏檢測方法的相關性 ATPTCA技術(shù)與 DiSC法的相關性 ATPTCA技術(shù)與 MTT法的相關性 1. 1998年 德國 DCS公司將該技術(shù)產(chǎn)業(yè)化 ， 并獲得國際 ISO質(zhì)量評估體系認證 ， 在歐洲和北美市場獲得準入 。 ， 美國全國醫(yī)療保險協(xié)會 (Health Maintenance Organization)認為 ， 該技術(shù)是一項精確和可靠的并能指導醫(yī)生選擇用藥的 先進技術(shù) ， 建議在全美進行醫(yī)療保險賠付 。 目前在加州等 6個州已獲醫(yī)療保險賠付 。 3. 2022年日本厚生省和保險聯(lián)合會也認為 ， 該技術(shù)是一項 先進的臨床醫(yī)學項目 ， 該技術(shù)指導的腫瘤化療較傳統(tǒng)的化療方案更能明顯提高胃腸道腫瘤的治愈率 ， 建議該項技術(shù)在全國范圍內(nèi)獲得醫(yī)療保險賠付 。 因此， ATPTCA技術(shù)是目前最先進的體外藥敏技術(shù)，該技術(shù)敏感，可靠，具有極大的臨床應用價值 第二部分 ATPTCA藥敏檢測技術(shù)及質(zhì)量標準的建立 ? ATPTCA技術(shù)的核心試劑 ? 1. 熒光酶試劑 ? 熱穩(wěn)定性和發(fā)光效率均好的重組酶試劑保證檢測的敏感性和可 ? 靠性，滿足臨床實際工作的需要 ? 2. 培養(yǎng)基 ? 腫瘤細胞選擇性培養(yǎng)基支持腫瘤細胞生長增殖，促進正常細胞 死亡，從而保證藥敏檢測的腫瘤細胞特異性 下面我將就這兩個核心試劑的研發(fā)匯報我所做的一些工作 ● 熒光酶基因克隆、點突變、表達及純化 (2022,4－ 2022,10) ● 腫瘤細胞選擇性培養(yǎng)基配方篩選及優(yōu)化 (2022,5－ 2022,12) ● 檢測技術(shù)核心試劑的質(zhì)量標準的建立 (2022,1－ 2022,3) 工作內(nèi)容及進展 自熒火蟲體內(nèi)發(fā)光腺體提取熒光酶 mRNA 逆轉(zhuǎn)錄為 cDNA,PCR擴增，克隆 構(gòu)建重組質(zhì)粒 PET22bluc 設計點突變引物，定點突變熒光酶第 245和215位氨基酸序列 將含點突變 PET22bluc導入原核高效表達系統(tǒng)EcoliBL21 篩選高表達株，高效穩(wěn)定表達重組熒光酶 通過蛋白工作站，純化生產(chǎn)重組熒光酶 制備凍干 熒光酶制劑 重組熒光酶研發(fā)路線 熒光酶基因的克隆和鑒定 PCR產(chǎn)物電泳圖 重組質(zhì)粒 PET22bluc鑒定圖 野生型 熒光酶基因編碼序列 (1653bp) M215： GC → AG Ala→Leu M245： C → G His→Gln atggaagacgccaaaaacataaagaaaggcccggcgccattctatcctctagaggatggaaccgctggagagcaactgcataaggctatgaagagatacgccctggttcctggaacaattgcttttacagatgcacatatcgaggtgaacatcacgtacgcggaatacttcgaaatgtccgttcggttggcagaagctatgaaacgatatgggctgaatacaaatcacagaatcgtcgtatgcagtgaaaactctcttcaattctttatgccggtgttgggcgcgttatttatcggagttgcagttgcgcccgcgaacgacatttataatgaacgtgaattgctcaacagtatgaacatttcgcagcctaccgtagtgtttgtttccaaaaaggggttgcaaaaaattttgaacgtgcaaaaaaaattaccaataatccagaaaattattatcatggattctaaaacggattaccagggatttcagtcgatgtacacgttcgtcacatctcatctacctcccggttttaatgaatacgattttgtaccagagtcctttgatcgtgacaaaacaattgcactgataatgaattcctctggatctactgggttacctaagggtgtggcccttccgcatagaactgc*ctgcgtcagattctcgcatgccagagatcctatttttggcaatcaaatcattccggatactgcgattttaagtgttgttccattccatcac*ggttttggaatgtttactacactcggatatttgatatgtggatttcgagtcgtcttaatgtatagatttgaagaagagctgtttttacgatcccttcaggattacaaaattcaaagtgcgttgctagtaccaaccctattttcattcttcgccaaaagcactctgattgacaaatacgatttatctaatttacacgaaattgcttctgggggcgcacctctttcgaaagaagtcggggaagcggttgcaaaacgcttccatcttccagggatacgacaaggatatgggctcactgagactacatcagctattctgattacacccgagggggatgataaaccgggcgcggtcggtaaagttgttccattttttgaagcgaaggttgtggatctggataccgggaaaacgctgggcgttaatcagagaggcgaattatgtgtcagaggacctatgattatgtccggttatgtaaacaatccggaagcgaccaacgccttgattgacaaggatggatggctacattctggagacatagcttactgggacgaagacgaacacttcttcatagttgaccgcttgaagtctttaattaaatacaaaggatatcaggtggcccccgctgaattggaatcgatattgttacaacaccccaacatcttcgacgcgggcgtggcaggtcttcccgacgatgacgccggtgaacttcccgccgccgttgttgttttggagcacggaaagacgatgacggaaaaagagatcgtggattacgtcgccagtcaagtaacaaccgcgaaaaagttgcgcggaggagttgtgtttgtggacgaagtaccgaaaggtcttaccggaaaactcgacgcaagaaaaatcagagagatcctcataaaggccaagaagggcggaaag