甜瓜屬remap分子標(biāo)記系統(tǒng)的建立和應(yīng)用(中國科技論文在線)-文庫吧
2025-05-17 23:38 本頁面
【正文】 瓜材料和 23 份甜瓜收集于中國南北方以及各大洲多個國家，包括各個基因型。 名稱及來源見表 1。 表 1 用于 REMAP 標(biāo)記系統(tǒng)所使用的甜瓜屬材料 Tab. 1 The materials in Cucumis used for REMAP 編號 品種 類型（來源） 染色體數(shù)目 編號 品種 類型（來源） 染色體數(shù)目 1 EC1 歐洲溫室型 黃瓜 2n=2x=14 24 PI436533 塞內(nèi)加爾 甜瓜 2n=2x=24 2 EC2 歐洲鹽漬型 黃瓜 2n=2x=14 25 PI136170 意大利 甜瓜 2n=2x=24 3 Hazerd 歐洲溫室型 黃瓜 2n=2x=14 26 PI136229 加拿大 甜瓜 2n=2x=24 4 Beit Alpha 美國生態(tài)型 黃瓜 2n=2x=14 27 PI295431 澳大利亞 甜瓜 2n=2x=24 5 Marketmore 97 美國生態(tài)型 黃瓜 2n=2x=14 28 PI323498 中國 甜瓜 2n=2x=24 6 5211 種間漸滲系 黃瓜 2n=2x=14 29 PI157071 中國 甜瓜 2n=2x=24 7 7011A 美國生態(tài)型 黃瓜 2n=2x=14 30 AMES2829 美國 甜瓜 2n=2x=24 8 PI483342 美國生態(tài)型 黃瓜 2n=2x=14 31 PI525135 埃及 甜瓜 2n=2x=24 9 PI508454 美國生態(tài)型 黃瓜 2n=2x=14 32 PI525141 埃及 甜瓜 2n=2x=24 10 PI508455 美國生態(tài)型 黃瓜 2n=2x=14 33 PI500362 贊比亞 甜瓜 2n=2x=24 11 PO2 華北生態(tài)型 黃瓜 2n=2x=14 34 PI5O5601 贊比亞 甜瓜 2n=2x=24 12 PO1 華北型 黃瓜 2n=2x=14 35 PI525115 埃及 甜瓜 2n=2x=24 13 PO3 華北型 黃瓜 2n=2x=14 36 PI249897 贊比亞 甜瓜 2n=2x=24 14 CC1 華北型 黃瓜 2n=2x=14 37 PI196477 巴西 甜瓜 2n=2x=24 15 CC3 華北型 黃瓜 2n=2x=14 38 PI185111 加納 甜瓜 2n=2x=24 16 平望 華南型 黃瓜 2n=2x=14 39 PI299568 南非 甜瓜 2n=2x=24 17 SWCC8 西雙版納黃瓜 2n=2x=14 40 PI292190 南非 甜瓜 2n=2x=24 18 SWCC9 西雙版納黃瓜 2n=2x=14 41 PI374152 南非 甜瓜 2n=2x=24 3 中國 科技論文在線 19 SWCC10 西雙版納黃瓜 2n=2x=14 42 PI324525 阿富汗 甜瓜 2n=2x=24 20 SWCC12 西雙版納黃瓜 2n=2x=14 43 PI476332 俄羅斯 甜瓜 2n=2x=24 21 二早子 華南型 黃瓜 2n=2x=14 44 PI489689 墨西哥 甜瓜 2n=2x=24 22 C. hystrix 黃瓜近緣野生種 2n=2x=24 45 PI507873 匈牙利 甜瓜 2n=2x=24 23 C. hytivus 黃瓜種間雜交種 2n=4x=38 46 AMES2830 美國 甜瓜 2n=2x=24 方法 基因組 DNA 提取 供試植株于溫室中統(tǒng)一播種，待植株長至第 5片真葉時，取剛展開的新葉，采用 CTAB 法 [8]提取基因組 DNA，利用瓊脂糖凝膠電泳和溴化乙錠顯色進行 DNA濃度的定量。 REMAP 引物的設(shè)計與合成 REMAP 標(biāo)記系統(tǒng)的引物正反向引物分別來源于 Ty1copia 類逆轉(zhuǎn)座子的 LTR 區(qū)和 ISSR 標(biāo)記，其中 Ty1copia 類逆轉(zhuǎn)座子序列信息來源于 GenBank，登陸號為 GQ326556，引物序列信息見表 2。引物由上海英 駿 生物有限公司合成。 表 2 甜瓜屬 REMAP 引物 Tab. 2 the primers used in this study 序列來源 引物 名稱 序列 退火溫度 Ty1copia LTRA TCGCTGAAGTGAATGGTGGTC 55℃ Ty1copia LTRZ ISSR J1 ACACACACACACACACGC REMAP 反應(yīng)程序的建立 調(diào)整反應(yīng)體系中 DNA 模板量、 Taq 酶 、 Mg2+、 dNTP 和引物 等各成分 的比例， 優(yōu)化擴增體系。 PCR擴增反應(yīng)在 PTC100 PCR 儀上進行， 擴增程序為： 94℃ 預(yù)變性 5min， 94℃ 變性 30s，50℃ 退火 30s， 72℃ 延伸 2min， 40 個循環(huán)；循環(huán)結(jié)束后 72℃ 延伸 10min， 4℃ 終止反應(yīng)。 PCR 產(chǎn)物檢測 1μL上樣緩沖液與 6μL PCR 產(chǎn)物混合后，在 2%瓊脂糖凝膠上以 1 TAE 緩沖液進行電泳，EB 染色，在凝膠成像系統(tǒng)中采集圖像。 1μL上樣緩沖液和 3μLPCR產(chǎn)物混勻后， 6%非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳，銀染檢測。 聚類分析 每對 REMAP 引物檢測，視每條多態(tài)性條帶為一個 數(shù)據(jù)統(tǒng)計條帶，采用 1（有）和 0（無）的方法統(tǒng)計條帶， 用 軟件進行分析作圖。 2 結(jié)果與分析 REMAP 標(biāo)記技術(shù)的建立 采用 CTAB 法提取黃瓜基因組 DNA， 通過調(diào)整 DNA模板量、 Taq 酶、 Mg2+、 dNTP 和 4 中國 科技論文在線 引物的比例，確定 REMAP 標(biāo)記的反應(yīng)體系為： 1buffe
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