實(shí)驗(yàn)二蛋白質(zhì)的顏色反應(yīng)及蛋白質(zhì)含量測(cè)定-文庫(kù)吧
2025-04-23 22:03 本頁(yè)面
【正文】 銅 鈉 雙 縮 脲 絡(luò) 合 物雙縮脲能夠與堿性硫酸銅作用，產(chǎn)生蘭色的銅 雙縮脲絡(luò)合物，稱為雙縮脲反應(yīng)。在一定濃度范圍內(nèi)，反應(yīng)后顏色深淺與蛋白質(zhì)含量呈線性關(guān)系。蛋白質(zhì)濃度越高，體系的顏色越深。反應(yīng)產(chǎn)物在 540nm處有最大光吸收。 含有 兩個(gè)以上肽鍵的多肽 ，具有與雙縮脲相似的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，也能發(fā)生 雙縮脲 反應(yīng)，生成 紫紅色或藍(lán)紫色絡(luò)合物 。 這是多肽定量測(cè)定的重要反應(yīng)。但有雙縮脲反應(yīng)的物質(zhì)不一定都是蛋白質(zhì)或多肽。含有一個(gè)肽鍵和一個(gè) —CS—NH2， —CH2—NH2， —CRH—NH2， —CH2—NH2—CHNH2—CH2OH或 —CHOHCH2NH2等基團(tuán)的物質(zhì)也有此反應(yīng)。 NH3干擾此反應(yīng)，因?yàn)?NH3與 Cu2+可生成暗藍(lán)色的絡(luò)離子 Cu（ NH3） 42+。 ? 雙縮脲法測(cè)蛋白質(zhì)濃度操作簡(jiǎn)便、迅速，蛋白質(zhì)濃度與光密度的線性關(guān)系好，是蛋白質(zhì)濃度分析的常用方法之一，但本法缺點(diǎn)是靈敏度低，蛋白質(zhì)量須在 120mg/mL測(cè)定結(jié)果較準(zhǔn)確。在需要快速、但準(zhǔn)確性要求不高的測(cè)定中常用此法。 、茚三酮反應(yīng) C 2 C H C C C O O H O H 2 C C O O H R C C C O O O H O H 還原茚三酮 CCCOOO茚三酮 CCCOOO HO HH 2 OH 2 O 水合茚三酮 O NH3 R O + + + + H N H +2 N H 3CCCOOCCCOO N H 4 +N H 2 O2++CCCOOOCCCOOHH O水合茚三酮 茚三酮 還原茚三酮 籃紫色化合物 茚三酮反應(yīng)，即：所有 氨基酸及具有游離 α 氨基的肽 與 茚三酮 反應(yīng)都產(chǎn)生 藍(lán)紫色物質(zhì) ，只有 脯氨酸和羥脯氨酸 與 茚三酮 反應(yīng)產(chǎn)生 黃色物質(zhì) 。在 570nm波長(zhǎng)下進(jìn)行比色就可測(cè)定樣品中氨基酸的含量，也可以在分離氨基酸時(shí)作為顯色劑對(duì)氨基酸進(jìn)行定性或定量分析。在多肽合成中常用來(lái)檢驗(yàn)有無(wú)自由氨基的肽類存在 .β 丙氨酸、氨、許多一級(jí)胺呈正反應(yīng)。 在法醫(yī)學(xué)上，使用茚三酮反應(yīng)可采集嫌疑犯在犯罪現(xiàn)場(chǎng)留下來(lái)的指紋。因?yàn)槭趾怪泻卸喾N氨基酸，遇茚三酮后起顯色反應(yīng)。 、米倫氏反應(yīng)（ Millon反應(yīng)） 苯酚及某些二羥苯衍生物 中加入 米倫試劑 (硝酸、亞硝酸、硝酸汞、亞硝酸汞的混合物 )后產(chǎn)生白色沉淀，可能是羥苯之亞硝基衍生物，經(jīng)變位作用變成顏色更深的鄰醌肟，最終得具有穩(wěn)定 紅色 的產(chǎn)物。含有 酚基的化合物 都有這個(gè)反應(yīng)，故 酪氨酸及含有酪氨酸的蛋白質(zhì) 都能與米倫試劑反應(yīng)。（溶液中不能含有大量無(wú)機(jī)鹽、 H2O2 、醇或堿，因它們能使汞變成沉淀，中和堿時(shí)不能用 HCl） O HO HN = OON O H( Z )( E )( Z )O HO = N
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