質(zhì)粒dna的抽提、純化與檢測(cè)-文庫吧
2025-04-20 23:02 本頁面
【正文】 10mmol/L EDTA ， 25mmol/L TrisHCl 溶液 Ⅱ ： , 1% SDS 溶液 Ⅲ ： , [K+]=3mol/L, （ ） [Ac]=5mol/L 重懸細(xì)菌；保護(hù)和緩沖作用 裂解細(xì)菌 蛋白、 DNA變性 中和 NaOH 質(zhì)粒 DNA復(fù)性 染色質(zhì) DNA、蛋白不能復(fù)性 重要試劑 堿裂解法 提取質(zhì)粒的 流程 離心收集菌體 溶液 III中和 溶液 I充分重懸 溶液 II裂解 上清液 抽提 離心洗滌 酒精沉淀 干燥溶解 沉淀 質(zhì)粒 DNA溶液 1. 取 1mL菌液于 ， 10000rpm離心 1min， 棄上清 。 2. 將細(xì)菌沉淀懸浮于 100μL冰預(yù)冷的 溶液 I 中 ， 振蕩混勻 。 3. 加 200μL新鮮配制的溶液 II， 蓋緊管蓋 ， 上下 輕柔 顛倒離心管混勻 5次 （ 勿強(qiáng)烈振蕩 ） ， 冰上放置 2min。 4. 加入 150μL預(yù)冷的溶液 III， 將管 輕柔上下 顛倒數(shù)次 （ 68次 ） 混勻 ， 見白色絮狀沉淀 ， 冰上放置 3min。 堿裂解法提取質(zhì)粒操作步驟 ? 步驟 1中可用移液槍將殘留液體吸取，勿吸到沉淀。 ? 步驟 2中應(yīng)充分懸浮，使細(xì)胞分散混勻。 ? 步驟 4中切記動(dòng)作輕柔，應(yīng)緩慢上下顛倒離心管混 勻 ，勿強(qiáng)烈振蕩，否則質(zhì)粒容易斷裂。 菌液： E coli JM109菌株 (含 pUC19X基因重組質(zhì)粒 ) 5. 12021rpm離心 5min， 小心 吸取上清 至干凈的 。 6. 加等體積 （ 約 450μL） 酚 :氯仿 ， 混勻 ， 12021rpm離心 5min， 取上清 移至另一 。 7. 加 1mL冰預(yù)冷無水乙醇 ， 上下顛倒混勻幾次 ， 室溫放置 10min； 12021rpm離心 5min， 棄上清 。 8. 加 1mL冰預(yù)冷 70%乙醇漂洗沉淀 ， 12021
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