【正文】 SO47H2O =0.5g/L, ρ(Ca(NO3)2 = 0.01g/L , ρ(FeSO47H2O) = 20 g/L。 2) 9K+ S 培養(yǎng)基:在 9K培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上加入一定量的硫粉 ,適用于培養(yǎng)氧化硫、氧化鐵的喜中溫細(xì)菌。 3) Waksman 培養(yǎng)基：適用于培養(yǎng)氧化硫的喜中溫細(xì)菌，其中ρ((NH 4)2SO4) = 0.2 g/L , ρ(K2 HPO4)=3 g/L, ρ(MgSO47H2O)= 0.5g/L, ρ(CaCl26H2O) = 0.25g/L g/L, FeSO47H2 O痕量 , ρ(S0 )= 2g/L。,第五十四頁，共八十頁。,培養(yǎng)基的測定方法及監(jiān)測(jiān c232。)目的,1.測定方法 用 EDTA 對 Fe3+、Fe2+ 連續(xù)滴定測定。用精密酸度儀測定培養(yǎng)基的pH值。 2.監(jiān)測目的 pH是反應(yīng)介質(zhì)酸堿性的重要指標(biāo)。硫桿菌具有將還原態(tài)的硫轉(zhuǎn)化成硫酸(li suān)的功能 ,其發(fā)育會改變介質(zhì)原有的酸性條件。通過監(jiān)測 pH 的變化,可以判斷硫桿菌的發(fā)育情況。Fe2+向Fe3+的轉(zhuǎn)化標(biāo)志著鐵桿菌的活性狀況。,第五十五頁，共八十頁。,（四）細(xì)菌(x236。jūn)的培養(yǎng)特征,第五十六頁，共八十頁。,菌落(jūnlu242。)特征,第五十七頁，共八十頁。,第五十八頁，共八十頁。,細(xì)菌(x236。jūn)的其他培養(yǎng),液體培養(yǎng)(p233。iyǎng) 半固體培養(yǎng)(p233。iyǎng),第五十九頁，共八十頁。,（五）氧化鐵硫桿菌(gǎnjūn)的檢查和鑒定方法,1)肉眼觀察(guānch225。) 如有該菌生長，則培養(yǎng)基中的亞鐵將被氧化變成高鐵，培養(yǎng)基的顏色由淺綠變成紅棕色，最后產(chǎn)生高鐵沉淀。 2)重鉻酸鉀容量法測定 測定培養(yǎng)液中亞鐵變成高鐵的數(shù)量。變化快的，說明細(xì)菌生長旺盛。 3)顯微鏡觀察 觀察細(xì)菌的形成，是否具有氧化鐵硫桿菌的形狀特征。 說明：上述方法得到的菌種是不純的，如要分離純種，上述分離過程要無菌操作，并且要作平板分離。,第六十頁，共八十頁。,（六）平板(p237。ngbǎn)分離,方法 1) 把配制好的固體培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板。 2)在無菌操作下，用接種環(huán)取上述培養(yǎng)菌液在平板上劃線分離，使所取菌液中的菌體細(xì)胞盡量沿劃線分散開。 3)將劃好的線培養(yǎng)皿在25～30℃條件下恒溫培養(yǎng)。 4)經(jīng)10天左右，借解剖鏡挑選適當(dāng)菌落并用取樣針轉(zhuǎn)移到裝有數(shù)毫升培養(yǎng)基的小試管中恒溫培養(yǎng)，一般(yībān)7天左右培養(yǎng)液就可變成紅棕色。 5)將此培養(yǎng)液重新在固體培養(yǎng)基上劃線分離，如此反復(fù)進(jìn)行數(shù)次分離和培養(yǎng)，就可獲得純菌株。,第六十一頁，共八十頁。,（七）細(xì)菌(x236。jūn)生長曲線,細(xì)菌(x236。jūn)生長 分成四個時期 生長緩慢期 對數(shù)生長期 穩(wěn)定生長期 衰亡期 說明： 以上是所有微生物生長繁殖所必須經(jīng)歷的四個時期，每個時期的長短和細(xì)菌的活躍程度受環(huán)境因素制約。,第六十二頁，共八十頁。,a. 生長(shēngzhǎng)緩慢期,當(dāng)細(xì)菌(x236。jūn)由一個環(huán)境轉(zhuǎn)移到一個新環(huán)境時，會出現(xiàn)一個逐步適應(yīng)的緩慢生長期，細(xì)菌(x236。jūn)生長繁殖速度很慢，細(xì)菌(x236。jūn)也不活躍。根據(jù)被培養(yǎng)細(xì)菌(x236。jūn)對環(huán)境的適應(yīng)性，這個時期可能很短，也可能較長。 ?比較正常的情況是2～4周 ?如果在含硫化銅培養(yǎng)基中培養(yǎng)，一般要2～4周 ?如果細(xì)菌的養(yǎng)料不變，則轉(zhuǎn)移當(dāng)中的的緩慢期就很短，甚至沒有緩慢期。,第六十三頁，共八十頁。,b.對數(shù)(du236。 sh249。)生長期,隨著細(xì)菌適應(yīng)環(huán)境后，生長非常活躍，以對數(shù)增長的速度繁殖，此時細(xì)胞數(shù)目(sh249。m249。)大量增加，對數(shù)生長期的曲線斜率就是細(xì)菌生長率μ： 這個時期新增加的細(xì)菌數(shù)目遠(yuǎn)超過死亡的細(xì)菌數(shù)。,第六十四頁，共八十頁。,c. 穩(wěn)定(wěnd236。ng)生長期,細(xì)菌死亡數(shù)目和新生數(shù)目大致相等，總的細(xì)菌數(shù)維持恒定。這個時期培養(yǎng)器內(nèi)細(xì)菌的絕對數(shù)是最多的。但此時培養(yǎng)基中營養(yǎng)大量消耗，細(xì)菌已變得不太活躍，當(dāng)進(jìn)入(j236。nr249。)大量培養(yǎng)或用于生產(chǎn)接種時，應(yīng)當(dāng)使用穩(wěn)定期內(nèi)盡量靠近對數(shù)期的細(xì)菌。,第六十五頁，共八十頁。,d. 衰亡(shuāiw225。ng)期,細(xì)菌開始大量(d224。li224。ng)死亡，培養(yǎng)器內(nèi)總的細(xì)菌數(shù)目急劇減少。此時培養(yǎng)基中的營養(yǎng)物質(zhì)已基本消耗完。,第六十六頁，共八十頁。,(八）細(xì)菌(x236。jūn)的繁殖,第六十七頁，共八十頁。,細(xì)菌分裂(fēnli232。)過程,第六十八頁，共八十頁。,2.3.3 浸礦細(xì)菌(x236。jūn)的馴化,細(xì)菌的馴化：對細(xì)菌進(jìn)行轉(zhuǎn)移培養(yǎng)過程中逐漸變化外界條件，使對新環(huán)境不適應(yīng)的細(xì)菌死亡，而某些活力較強的細(xì)菌會發(fā)生(fāshēng)變異，演變成耐受性更強的細(xì)菌而活下來，形成新在耐性菌株。,第六十九頁，共八十頁。,1） 影響(yǐngxiǎng)細(xì)菌生長的因素,（1）浸礦細(xì)菌的細(xì)胞膜類似于半透膜，可透過水分而對其他物質(zhì)有選擇性。細(xì)菌較其他生物細(xì)胞對滲透壓的變化有較強的適應(yīng)能力，但外界鹽分濃度過高，會抑制細(xì)菌生長，甚至因滲透壓變化過大，造成細(xì)菌死亡。 （2）重金屬離子可使細(xì)胞蛋白質(zhì)凝固，大部分重金屬離子對細(xì)菌有毒性(d x236。nɡ)作用，超過一定限度，細(xì)菌會因細(xì)胞脫水而死亡。 （3）非金屬離子對細(xì)菌影響小些，但濃度過高也不行。如F，細(xì)菌對它很敏感，濃度超過幾個ppm就會嚴(yán)重抑制細(xì)菌生長,第七十頁，共八十頁。,2) 馴