基因表達(dá)調(diào)控及重組dna技術(shù)(已改無(wú)錯(cuò)字)
2023-01-26 18:06:57 本頁(yè)面
【正文】 蛋白 ? 基本轉(zhuǎn)錄因子 ? 轉(zhuǎn)錄激活因子 ? 轉(zhuǎn)錄抑制因子 49 絕大多數(shù)轉(zhuǎn)錄因子屬于 反式作用因子 * 真核生物： 由某一基因表達(dá)后，通過(guò) DNA蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì) 蛋白質(zhì)相互作用控制另一基因的轉(zhuǎn)錄。 50 A B 51 RNA聚合酶結(jié)合啟動(dòng)子所必須的一組轉(zhuǎn)錄因子 ? 基本轉(zhuǎn)錄因子 F E B D A RNA pol Ⅱ TATA DNA TATA TFⅡ D TFⅡ A TFⅡ B TFⅡ F TFⅡ E RNA polⅡ 52 ? 轉(zhuǎn)錄激活因子 （正性調(diào)節(jié)因子） 通過(guò) DNA－蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)相互作用起 正性調(diào)節(jié)作用的轉(zhuǎn)錄因子。 ? 轉(zhuǎn)錄抑制因子 （負(fù)性調(diào)節(jié)因子） 通過(guò) DNA－蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)相互作用起負(fù) 性調(diào)節(jié)作用的轉(zhuǎn)錄因子。 與增強(qiáng)子結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子 與抑制子結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子 53 真核 RNA聚合酶 II不能單獨(dú)識(shí)別啟動(dòng)子 ， 而是由基本轉(zhuǎn)錄因子 TFIID識(shí)別并結(jié)合啟動(dòng)子 ， 形成 TFIID－啟動(dòng)子復(fù)合物 ， 然后有一系列的轉(zhuǎn)錄因子 （ 如 TFIIA、TFIIB、 TFIIE、 TFIIF等 ） 加入形成前起始復(fù)合物 ，調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄的起始 。 3． mRNA轉(zhuǎn)錄激活及其調(diào)節(jié) 54 第三節(jié) 重組 DNA技術(shù) 55 基因重組（ geic rebination） ? 自然發(fā)生的基因重排 ? 真核、原核均會(huì)發(fā)生 ? 基因變異、物種演變、生物進(jìn)化的基礎(chǔ) 基因工程（ geic engineering）重組 DNA技術(shù) 人工進(jìn)行基因重組 56 克隆 *(名詞 )： 就是指來(lái)自同一母本的所有副本或 拷貝的集合 。 克隆化 （ 動(dòng)詞 ） ： 獲取同一拷貝的過(guò)程 。 二、重組 DNA技術(shù)相關(guān)概念 母本 克隆 clone cloning （一） 克隆與克隆化 57 細(xì)胞克?。? 從大量群體細(xì)胞中分離出某一種類型細(xì)胞 ， 經(jīng)擴(kuò)增獲得這樣一類相同的細(xì)胞 。 在分子生物學(xué)領(lǐng)域所說(shuō)的分子克隆專指 DNA克隆 (DNA cloning)。 分子克?。? 從眾多不同的分子群體中分離到的很多相同分子的集合。 58 （二） 重組 DNA技術(shù) * 應(yīng)用酶學(xué)的方法，在體外將各種來(lái)源的遺傳物質(zhì)（目的基因或目的 DNA）與載體 DNA連接成復(fù)制子，然后通過(guò)轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染等方法導(dǎo)入宿主細(xì)胞，生長(zhǎng)、篩選出含有目的基因的轉(zhuǎn)化子細(xì)胞。轉(zhuǎn)化子細(xì)胞經(jīng)擴(kuò)增、提取，獲得大量目的 DNA的無(wú)性繁殖系，即DNA克隆，基因工程。 59 目的 DNA 載體 DNA 連接 復(fù)制子（重組 DNA） 導(dǎo)入宿主細(xì)胞 （轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染） 轉(zhuǎn)化子細(xì)胞 轉(zhuǎn)化子細(xì)胞擴(kuò)增，可獲得大量重組 DNA 60 基因克隆 DNA 克隆 重組 DNA 同一概念 生物技術(shù)工程 基因工程、細(xì)胞工程、酶工程、蛋白質(zhì)工程 ? 獲得 DNA的無(wú)性繁殖系 ? 獲得目的基因的表達(dá)產(chǎn)物 重組 DNA的目的 61 （三） 工具酶 限制性核酸內(nèi)切酶 連接酶 DNA聚合酶 反轉(zhuǎn)錄酶 多聚核苷酸激酶 62 限制性核酸內(nèi)切酶 * 識(shí)別和切割雙鏈 DNA分子內(nèi)部特異核苷酸序列的一類核酸酶。 限制性核酸內(nèi)切酶共分三類，基因工程常用 II類酶，這類酶常識(shí)別 DNA的回文序列 * 。 63 Hpa I： 5’ GTT AAC 3’ 3’ CAA TTG 5’ 平端 Pst I： 5’ CTGCA G 3’ 3’ G ACGTC 5’ 3’突出粘性末端 EcoRI： 5’ G AATT C 3’ 3’ C TTAA G 5’ 5’突出粘性末端 64 （四）目的基因 target gene cDNA (plementary DNA) 在體外以 RNA（通常為 mRNA）為模板， 經(jīng)反轉(zhuǎn)錄合成的單鏈 DNA。 基因組 DNA(genomic DNA) 代表一個(gè)細(xì)胞或生物體整套遺傳信息的 所有 DNA序列。 目
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