【正文】 。 ） 第 18 頁 共 29 頁 （二）傾注培養(yǎng) 操作方法： （ 1） 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)要求或?qū)ξ廴厩闆r的估計(jì)，選擇 2~3 個(gè)適宜稀釋度，分別在制10 倍遞增稀釋的同時(shí)，以吸取該稀釋度的吸管移取 1ml 稀釋液于滅菌平皿中，每個(gè)稀釋度做兩個(gè)平皿。 （ 2） 將涼至 46℃ 左右 沙氏 瓊脂培養(yǎng)基注入平皿約 15ml，并轉(zhuǎn)動(dòng)平皿，混合均勻。同時(shí) 將沙氏 瓊脂培養(yǎng)基傾入加有 1ml 稀釋液（不含樣品）的滅菌平皿內(nèi)作空白對(duì)照。 （ 3） 待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平板，置 28177。1 ℃ 溫箱內(nèi)培養(yǎng) 5 天 ，取出計(jì)算平板內(nèi)菌落數(shù)目，乘以稀釋倍數(shù)，即得每克（每毫升）樣品所含菌落總數(shù)。 （ 為了防止 樣品 顆粒與菌落混淆不清，可在營養(yǎng)瓊脂中加入氯化三苯四氮唑（ TTC），培養(yǎng)后菌落呈紅色，易于分別。 ） （三）計(jì)數(shù) 操 作方法：培養(yǎng)到時(shí)間后，計(jì)數(shù)每個(gè)平板上的菌落數(shù)?？捎萌庋塾^察，必要時(shí)用放大鏡檢查，以防遺漏。在記下各平板的菌落總數(shù)后，求出同稀釋度的各平板平均菌落數(shù)，計(jì)算處原始樣品中每克（或每 ml）中的菌落數(shù)，進(jìn)行報(bào)告。 （ 到達(dá)規(guī)定培養(yǎng)時(shí)間，應(yīng)立即計(jì)數(shù)。如果不能立即計(jì)數(shù)，應(yīng)將平板放置于 0－ 4℃ ，但不得超過 24h。 ） 注：計(jì)數(shù)方法與細(xì)菌菌落的計(jì)數(shù)一致。 8 結(jié)果報(bào)告 第 19 頁 共 29 頁 嬰氏（福建）紙業(yè)有限公司 YINGSHI（ FUJIAN） PAPER CO.,LTD. 紙尿褲中大腸菌群的測定 編制：許金釵 審核： YSQ 檢測方法 15 批準(zhǔn)： 大腸菌群的測定 1 目的 為了更好地統(tǒng)一公司的檢測方法，確保公司質(zhì)量控制和產(chǎn)品檢測的準(zhǔn)確性。 2 職責(zé) 品管部負(fù)責(zé)檢測方法的收集、編寫、審核，確保產(chǎn)品和環(huán)境衛(wèi)生。確實(shí)做好產(chǎn)品檢測的準(zhǔn)確性，并做問題反饋 3 適用范圍 本本方法適于大腸桿菌的檢測。 4 儀器與試劑 10ml25 25 試管， 1ml 15 15 試管， 9cm平皿， 10ml 移液管， 1ml 移液管， ％生理鹽水， 250ml 三角瓶， 溫箱： 36177。 1℃ ， 恒溫水 ?。?177。 ℃，天平，顯微鏡 ， 均質(zhì)器 ，載玻片，酒精燈，試管架，乳糖膽鹽發(fā)酵管，伊紅美藍(lán)瓊脂平板，乳糖發(fā)酵管， EC肉湯，磷酸鹽緩沖稀釋液，生理鹽水，革蘭氏染色液 5 定義 大腸菌群 ： 大腸菌群系指一群能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽胞桿菌。該菌主要來源于人畜糞便，故以此作為糞便污染指標(biāo)來評(píng)價(jià)食品的衛(wèi)生質(zhì)量，推斷 樣品 中有否污染腸道致病菌的可能 。 6 操作步驟 檢樣稀釋 以無菌操作將檢樣 25mL(或 g)放于含有 225mL 滅菌生理鹽水 的 滅菌均質(zhì)器，以 8 000～ 10000r/min 的速度處理 1min，做成 1∶ 10 的均勻稀釋液。 用 1mL 滅菌 移液管 吸取 1∶ 10 稀釋液 1mL，注入含有 9mL 滅菌生理鹽水的試管內(nèi)，振搖試管混勻，做成 1∶ 100 的稀釋液。 另取 1mL 滅菌吸管，按上條操作依次做 10 倍遞增稀釋液，每遞增稀釋一次，換用 1 支 1mL 滅菌吸管。 根據(jù) 衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)要求或?qū)z樣污染情況的估計(jì)，選擇三個(gè)稀釋度，每個(gè)稀釋度接種 3 管。 乳糖發(fā)酵試驗(yàn) 將待檢樣品接種于乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，接種量在 1mL 以上者，用 雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管， 1mL 及 1mL 以下者，用單料乳糖膽鹽發(fā)酵管。每一稀釋度接種 3 管，置 36177。 1℃溫箱內(nèi)，培養(yǎng) 24177。 2h，如所有乳糖膽鹽發(fā)酵管都不產(chǎn)氣，則可報(bào)告為大腸菌群陰性，如有產(chǎn)氣者，則按下列程序進(jìn)行。 分離培養(yǎng) 將產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別轉(zhuǎn)種在伊紅美藍(lán)瓊脂平板上，置 36177。 1℃溫箱內(nèi)，培養(yǎng) 18～ 24h，然后取出，觀察菌落形態(tài)，并做革蘭氏染色和證實(shí)試驗(yàn)。 第 20 頁 共 29 頁 證實(shí)試驗(yàn) 在上述平板上，挑取可疑大腸菌群菌落 1～ 2 個(gè)進(jìn)行革蘭氏染色，同時(shí)接種乳糖發(fā)酵管，置 36177。 1℃溫箱內(nèi)培養(yǎng) 24177。 2h，觀察產(chǎn)氣 情況。凡乳糖管產(chǎn)氣、革蘭氏染色為陰性的無芽胞桿菌，即可報(bào)告為大腸菌群陽性。 報(bào)告 根據(jù)證實(shí)為大腸菌群陽性的管數(shù)，查 MPN 檢索表，報(bào)告每 100mL(g)大腸菌群的 MPN值。 7 糞大腸菌群 (faecal coliform) 用接種環(huán)將所有產(chǎn)氣的乳糖膽鹽發(fā)酵管培養(yǎng)物 ,轉(zhuǎn)種于 EC 肉湯管內(nèi)，置 177?！嫠∠鋬?nèi) (水浴箱內(nèi)的水面應(yīng)高于 EC 肉湯液面 )，培養(yǎng) 24177。 2h，經(jīng)培養(yǎng)后，如所有 EC肉湯管均不產(chǎn)氣，則可報(bào)告為陰性；如有產(chǎn)氣者，則將所有產(chǎn)氣的 EC 肉湯管分別轉(zhuǎn)種于伊紅美藍(lán)瓊脂平板上 ，置 36177。 1℃培養(yǎng) 18～ 24h，凡平板上有典型菌落者，則證實(shí)為糞大腸菌群陽性。 結(jié)果報(bào)告 根據(jù)證實(shí)為糞大腸菌群的陽性管數(shù)，查 MPN 檢索表，報(bào)告每 100mL(g)糞大腸菌群的MPN 值。 8 最后結(jié)果報(bào)告 第 21 頁 共 29 頁 嬰氏（福建）紙業(yè)有限公司 YINGSHI（ FUJIAN） PAPER CO.,LTD. 紙尿褲中綠膿桿菌的測定 編制：許金釵 審核： YSQ 檢測方法 16 批準(zhǔn)： 綠膿桿菌的測定 1 目的 為了更好地統(tǒng)一公司的檢測方法 ，確保公司質(zhì)量控制和產(chǎn)品檢測的準(zhǔn)確性。 2 職責(zé) 品管部負(fù)責(zé)檢測方法的收集、編寫、審核，確保產(chǎn)品和環(huán)境衛(wèi)生。確實(shí)做好產(chǎn)品檢測的準(zhǔn)確性，并做問題反饋 3 適用范圍 本方法適于綠膿桿菌的測定。 4 儀器與試劑 10ml25 25 試管， 1ml 15 15 試管， 9cm平皿， 10ml 移液管， 1ml 移液管， ％生理鹽水， 250ml 三角瓶， 溫箱： 36177。 1℃ ， 天平，顯微鏡 ， 均質(zhì)器 ，載玻片，酒精燈，試管架， SCDLP 和葡萄糖肉湯培養(yǎng)基 (綠膿菌素培養(yǎng)基 )， 血平板和十六烷三甲基溴化銨 ,磷酸鹽緩沖 稀釋液，生理鹽水，革蘭氏染色液 5 定義 綠膿桿菌 ： 綠膿桿菌在自然界中分布廣泛，空氣、水、土壤中均有存在。常引起人體皮膚化膿感染，特別是燒傷、燙傷及眼部疾病患者感染綠膿桿菌后，常使病情惡化，嚴(yán)重者可引發(fā)敗血癥。綠膿桿菌為條件致病菌，是革蘭氏陰性桿菌感染中最常見的細(xì)菌，通常造成繼發(fā)性感染，如燒傷病人的傷面感染、手術(shù)創(chuàng)口和傷口感染、泌尿道感染、菌群失調(diào)引起的感染、嬰幼兒和年老體弱者及患有慢性消耗性疾病病人的感染。 6 操作步驟 檢樣稀釋 以無菌操作將檢樣 25mL(或 g)放于含有 225mL 滅菌生理鹽水 的 滅菌均質(zhì)器，以 8 000～ 10000r/min 的速度處理 1min，做成 1∶ 10 的均勻稀釋液。 用 1mL 滅菌 移液管 吸取 1∶ 10 稀釋液 1mL，注入含有 9mL 滅菌生理鹽水的試管內(nèi)，振搖試管混勻，做成 1∶ 100 的稀釋液。 另取 1mL 滅菌吸管，按上條操作依次做 10 倍遞增稀釋液，每遞增稀釋一次，換用 1 支 1mL 滅菌吸管。 根據(jù) 衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)要求或?qū)z樣污染情況的估計(jì)，選擇三個(gè)稀釋度，每個(gè)稀釋度接種 3 管。 SCDLP 和葡萄糖肉湯 增菌 培養(yǎng) 將待檢 樣品接種于 SCDLP 和葡萄糖肉湯 發(fā)酵管內(nèi)，每一稀釋度接種 3 管，置 36177。 1℃溫箱內(nèi)，培養(yǎng) 24177。 2h，如所有 SCDLP 和葡萄糖肉 湯 培養(yǎng)基增菌培養(yǎng)后均呈黃綠色混濁， 第 22 頁 共 29 頁 表面有菌膜。 則進(jìn)行下一培養(yǎng) . 分離培養(yǎng) 挑取菌膜下培養(yǎng)物劃線接種血平板和十六烷三甲基溴化銨平板進(jìn)行分離培養(yǎng) 。 如果 ，血平板上生長菌落扁平無定型、表面濕潤且向周邊蔓延。 再進(jìn)行 革蘭氏染色 ， 顯微鏡檢查后判定 結(jié)果為革蘭氏陰性桿菌。 如， 十六烷三甲基溴化銨平板上生長的菌落呈灰白色扁平無定型、略有蔓延。染色鏡檢 判定 結(jié)果為革蘭氏 陽 性桿菌。 生化試驗(yàn) 如果再次進(jìn)行 十六烷三甲基溴化銨平板 培養(yǎng)后所 生長的菌落 用 氧化酶試驗(yàn) ，結(jié)果顯 陽性，再 在 42℃ 生長，綠膿菌素、硝酸鹽還原產(chǎn)氣及明膠液化試驗(yàn)均為陽性。證實(shí) 樣品內(nèi)含有 綠膿桿菌。 7 結(jié)果報(bào)告 第 23 頁 共 29 頁 嬰氏（福建）紙業(yè)有限公司 YINGSHI（ FUJIAN） PAPER CO.,LTD. SAP 吸收生理鹽水的吸收速度 編制：許金釵 審核： YSQ 檢測方法 17 批準(zhǔn)： 生理鹽水吸 收 速度 1 目的 為了更好地統(tǒng)一公司的檢測方法，對(duì)公司原材料進(jìn)行規(guī)范把關(guān)。 2 職責(zé) 公司品管部負(fù)責(zé)檢測方法的收集、編寫，確保入庫原材料合格，衛(wèi)生，好壞。 3 適用范圍 本實(shí)驗(yàn)方法適用于沒定 SAP 吸收生理鹽水的吸水速度。 4 裝置及器具 （ 1） 100ml 燒杯 （ 2）磁力攪拌器 （ 3）秒表 （ 4）分析天平 5 試劑 0． 9%的生理鹽水 6 定義 SAP 具有被適度鏈接成的三維空間網(wǎng)眼構(gòu)造的水溶性高分子。 雖然可以吸收數(shù)百倍 ~千倍的水，但是本身并不溶于水。 一量吸水后，即使對(duì)其施加一定的壓力也不 會(huì)脫水。 7 測定方法 （ 1）用 100ml 燒杯稱量 50 克溫度調(diào)整在 25177。 2℃的生理鹽水。 （ 2）向上述燒杯中加入磁力棒，放在磁力攪拌器上以 60rpm的回轉(zhuǎn)數(shù)進(jìn)行攪拌。 （ 3）精確稱量 2。 00 克試樣，一次性全部倒入旋渦中。投入后，開始計(jì)時(shí)。