【正文】 身密度相等的梯度層里，即達(dá)到等密度的位置而獲得分離。根據(jù)被分離物質(zhì)的浮力密度差別進(jìn)行分離，所用的介質(zhì)起始密度約等于被分離物質(zhì)的密度，介質(zhì)在離心過程中形成密度梯度，被分離物質(zhì)沉降或上浮到達(dá)與之密度相等的介質(zhì)區(qū)域中停留并形成區(qū)帶。這里的懸浮顆粒往往是指制成懸浮狀態(tài)的細(xì)胞、細(xì)胞器、病毒和生物大分子等。常用的離心機(jī)有多種類型，一般低速離心機(jī)的最高轉(zhuǎn)速不超過6000rpm，高速離心機(jī)在25000rpm以下，超速離心機(jī)的最高速度達(dá)30000rpm以上。通過逐步增加相對(duì)離心力，使一個(gè)非均相混合液內(nèi)形狀不同的大小顆粒分步沉淀。離心前，離心管內(nèi)先裝入分離介質(zhì)（如蔗糖、甘油等），使形成連續(xù)的或不連續(xù)的密度梯度介質(zhì)，然后加入樣品進(jìn)行離心，具體又可分為：1）速度區(qū)帶離心法。本法可分離各種細(xì)胞、病毒、染色體、脂蛋白、DNA和RNA等生物樣品。要求在離心前預(yù)先配制管底濃而管頂稀的密度梯度介質(zhì)，常用介質(zhì)有蔗糖、CsCl、Cs2SO4等，待分離樣品一般鋪在梯度液頂上，如需挾在梯度液中間或管底部，則需調(diào)節(jié)樣品液密度。3）自成梯度等密度離心法。需要離心分離的樣品可和梯度介質(zhì)先均勻混合，離心開始后，梯度介質(zhì)由于離心力的作用逐漸形成管底濃而管頂稀的密度梯度，與此同時(shí)，可以帶動(dòng)原來混合的樣品顆粒也發(fā)生重新分布，到達(dá)與其自身密度相等的梯度層里，即達(dá)到等密度的位置而獲得分離。根據(jù)被分離物質(zhì)的浮力密度差別進(jìn)行分離，所用的介質(zhì)起始密度約等于被分離物質(zhì)的密度，介質(zhì)在離心過程中形成密度梯度，被分離物質(zhì)沉降或上浮到達(dá)與之密度相等的介質(zhì)區(qū)域中停留并形成區(qū)帶。每抽血?dú)馇?，?ml注射器抽取肝素稀釋液2ml，完全濕潤(rùn)整個(gè)針管后棄去肝素液，殘留在針頭及針管頭部死腔內(nèi)的肝素液即可起到抗凝作用。二、采血方法的選擇成人：用肝素化的玻璃注射器或一次性注射器穿刺，采血部位首選橈動(dòng)脈，次選股動(dòng)脈小兒：首選用顳淺動(dòng)脈或頭皮小動(dòng)脈，嚴(yán)格消毒后，用肝素化的5號(hào)頭皮針連接2ml注射器，待動(dòng)脈血流至注射器乳頭時(shí)，立即用小止血鉗分別夾住頭皮針?biāo)芰宪浌苁孜矁啥耍ǎ?，然后拔出針頭立即混勻送檢。因技術(shù)條件限制，不能反復(fù)動(dòng)脈穿刺時(shí)，早產(chǎn)兒與小嬰兒可在足后跟用肝素化毛細(xì)管采取動(dòng)脈化毛細(xì)血管的血亦可。未充分動(dòng)脈化的毛細(xì)管血的PO2偏低，對(duì)PH、PCO2和HCO3—的測(cè)定結(jié)果影響不明顯。若不能立即測(cè)定，應(yīng)將血?dú)鈽?biāo)本保存在2～8℃容器內(nèi)，但即使這樣待測(cè)時(shí)間也不宜超過2小時(shí)。第一次遇到尿糖檢測(cè)失真是在1984年，叢玉隆還是醫(yī)院檢驗(yàn)科的檢驗(yàn)員。急診醫(yī)生一看檢驗(yàn)報(bào)告馬上產(chǎn)生疑問：怎么會(huì)是8毫克？人的正常血糖最低是80毫克，如果真是8毫克，那這個(gè)人早就死了。叢玉隆再仔細(xì)檢查后，發(fā)現(xiàn)在抽取病人血樣時(shí)，患者正輸著vc，結(jié)果終于弄明白了，原來是患者血樣中含有的大量vc還原了檢驗(yàn)試劑中的酶，干擾了病人的血糖檢驗(yàn)結(jié)果。一組人一天吃6片vc，第二天尿含vc90毫克。叢玉隆說，假如一個(gè)糖尿病人，沒吃vc以前的尿糖是2個(gè)加號(hào)，吃了9片vc后，就可能是1個(gè)加號(hào)，甚至?xí)霈F(xiàn)陰性結(jié)果。試驗(yàn)也證明5個(gè)小時(shí)以后，使用vc的病人每毫升尿含vc幾十毫克，已經(jīng)屬于正常值，不再干擾檢驗(yàn)結(jié)果。磷鉬酸法是血清中無機(jī)磷與鉬酸鹽結(jié)合形成磷鉬酸化合物，再用還原劑將其還原成鉬藍(lán)進(jìn)行比色測(cè)定。雖非常敏感，但影響因素多，顯色不穩(wěn)定，重復(fù)性也較差，不能用于常規(guī)檢驗(yàn)。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試生化檢驗(yàn)輔導(dǎo)：火焰分光光度法的儀器原始的火焰光度計(jì)由霧化器、火焰燃燒嘴、濾光片和光電池檢測(cè)器組成。反射鏡起聚光作用。不同的燃料氣體和助燃?xì)饨M分，及其配比，稱助/燃比，決定該化學(xué)火焰能達(dá)到的最高溫度和化學(xué)作用性質(zhì)（見表）。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試生化檢驗(yàn)輔導(dǎo)：火焰分光光度法的簡(jiǎn)史，就是火焰分光光度法的起源，用此法發(fā)現(xiàn)了許多新元素。由于當(dāng)時(shí)使用照相方法記錄譜線，致使準(zhǔn)確定量分析工作較為繁瑣。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試生化檢驗(yàn)輔導(dǎo)：火焰分光光度法的應(yīng)用火焰分光光度法主要用于堿金屬和堿土金屬元素的定量分析。此法不僅可作為一個(gè)光化學(xué)分析方法獨(dú)立使用，而且可作為一個(gè)有特色的光檢測(cè)器，與氣相色譜儀聯(lián)用，或作為一種試樣原子化裝置，用于原子吸收光譜法中。骨髓穿刺部位選擇一般要從以下幾個(gè)方面考慮：①骨髓腔中紅骨髓豐富；②穿刺部位應(yīng)淺表、易定位；③應(yīng)避開重要臟器。髂骨后上棘此處骨皮質(zhì)薄，骨髓腔大，進(jìn)針容易，骨髓液豐富，被血液稀釋的可能性小，故為臨床上首選的穿刺部位。（2）油鏡：選擇滿意的片膜段，觀察200～500個(gè)細(xì)胞，按細(xì)胞的種類、發(fā)育階段分別計(jì)算，并計(jì)算它們各自的百分率；仔細(xì)觀察各系統(tǒng)的增生程度和各階段細(xì)胞數(shù)量和質(zhì)量的變化。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試綜合知識(shí)輔導(dǎo)：均相酶免疫測(cè)定均相酶免疫測(cè)定：屬于競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合分析方法。②克隆酶供體免疫分析：DNA重組技術(shù)可分別合成某種功能酶（如βD半乳糖苷酶）分子的兩個(gè)片段，大片段稱為酶受體（EA），小分子稱作酶供體（ED），兩者單獨(dú)均無酶活性，一定條件下結(jié)合形成四聚體方具酶活性。①液相酶免疫測(cè)定：其測(cè)定靈敏度與放射免疫方法相近，近年有取代放射免疫方法的趨勢(shì)。膽汁淤積性肝硬化ALT活性較高可與黃疸平行，AST升高不及ALT顯著。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)基礎(chǔ)知識(shí)輔導(dǎo)：尿的方法學(xué)評(píng)價(jià)尿色和透明度判斷，受主觀因素影響。臨床應(yīng)用僅作參考2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)基礎(chǔ)知識(shí)輔導(dǎo)：尿的質(zhì)量控制，鹽類結(jié)晶析出、尿膽原轉(zhuǎn)變?yōu)槟蚰懰?、?xì)菌增殖和腐敗、尿素分解，均可使尿顏色加深、混濁度增高。（2）飲水及尿量：大量飲水、尿量多則尿色淡；尿色深見于尿量少、飲水少或運(yùn)動(dòng)、出汗、水分丟失。（4）鹽類結(jié)晶及酸堿度：生理性尿混濁的主要原因是含有較多的鹽類，常見有：①尿酸鹽結(jié)晶：在濃縮的酸性尿遇冷時(shí)，可有淡紅色結(jié)晶析出。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)免疫檢驗(yàn)考試輔導(dǎo)：腫瘤壞死因子的生物效應(yīng)腫瘤壞死因子的生物效應(yīng)：TNF對(duì)多種腫瘤細(xì)胞均有殺傷或抑制作用，敏感性因腫瘤細(xì)胞類型而異；TNF呈劑量依賴性地抑制病毒介導(dǎo)的細(xì)胞病變的發(fā)展，對(duì)RNA病毒和DNA病毒均有抑制作用；TNF能夠增強(qiáng)T細(xì)胞產(chǎn)生以IL2為主的淋巴因子，提高IL2R的表達(dá)水平，促進(jìn)T細(xì)胞增殖；還能促進(jìn)B細(xì)胞增殖、分化和產(chǎn)生抗體；TNF有中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞趨化作用，并使之活化和脫顆粒，釋放炎癥介質(zhì)；TNF可刺激成骨細(xì)胞內(nèi)的堿性磷酸酶活性，誘導(dǎo)成骨細(xì)胞吸收骨質(zhì)、使軟骨細(xì)胞進(jìn)行軟骨更新，抑制軟骨形成。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床經(jīng)驗(yàn)表明，TNF對(duì)某些腫瘤具有明顯的抑制作用，但副作用大，建立合理的用藥方案及治療措施，可望降低用量，減輕副作用，達(dá)到最佳治療效果。結(jié)果：陰性，無鐮變細(xì)胞。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)知識(shí)輔導(dǎo)：埃希菌屬的常規(guī)檢驗(yàn)項(xiàng)目CDC將大腸埃希氏菌O157：H7列為常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目EHEC的血清型》50種，最具代表性的是O157：，O157：H7占腸道分離病原菌的第二或第三位，是從血便中分離到的最常見的病原菌，分離率占血便的40%，8三個(gè)月O157：H7感染的發(fā)生率最高。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)知識(shí)輔導(dǎo)：埃希菌屬的腸道感染埃希菌屬的腸道感染：致病性大腸埃希菌有下列五個(gè)病原群。（2）腸致病型大腸埃希菌（EPEC）：主要引起嬰兒腹瀉。（4）腸出血型大腸埃希菌（EHEC）：又稱產(chǎn)志賀樣毒素（VT）大腸埃希菌（SLTEC或UTEC），其中O157：H7可引起出血性大腸炎和溶血性尿毒綜合征（HUS）。嚴(yán)重者可發(fā)展為急性腎衰竭。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)臨床檢驗(yàn)技師考試綜合輔導(dǎo)資料：埃希菌屬的概念埃希菌屬包括5個(gè)種，即大腸埃希菌、蟑螂埃希菌、弗格森埃希菌、赫爾曼埃希菌和傷口埃希菌。大腸埃希菌俗稱大腸桿菌，大多數(shù)菌株是人類和動(dòng)物腸道正常菌群。將選擇培養(yǎng)基或鑒別培養(yǎng)基上的可疑菌落分別接種克氏雙糖鐵瓊脂（KIA）和尿素靛基質(zhì)動(dòng)力（MIU）復(fù)合培養(yǎng)基管中，并根據(jù)其六項(xiàng)反應(yīng)結(jié)果，將細(xì)菌初步定屬。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)免疫檢驗(yàn)考試輔導(dǎo)：細(xì)胞因子的類型細(xì)胞因子分類按其作用大致可分為免疫調(diào)節(jié)因子和免疫調(diào)控因子兩大類。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)免疫檢驗(yàn)考試輔導(dǎo)：細(xì)胞因子共同特性（1）化學(xué)性質(zhì)大都為糖蛋白。（3）一種細(xì)胞可產(chǎn)生多種細(xì)胞因子，不同類型的細(xì)胞可產(chǎn)生一種或幾種相同的細(xì)胞因子。輕度貧血時(shí)紅細(xì)胞形態(tài)無明顯異常，中度以上貧血時(shí)紅細(xì)胞體積減小，中心淡染區(qū)擴(kuò)大，嚴(yán)重時(shí)紅細(xì)胞可呈環(huán)狀，并有嗜多色性紅細(xì)胞及點(diǎn)彩紅細(xì)胞增多。白細(xì)胞計(jì)數(shù)及分類一般正常。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)免疫檢驗(yàn)考試輔導(dǎo)：?jiǎn)蜗驍U(kuò)散試驗(yàn)單向擴(kuò)散試驗(yàn)：瓊脂內(nèi)混入抗體，待測(cè)抗原從局部向瓊脂內(nèi)自由擴(kuò)散，如抗原和相應(yīng)抗體結(jié)合，則形成沉淀環(huán)。平板法：%瓊脂糖內(nèi)，未凝固前傾注成平板，然后在上打孔，將抗原加入孔中，放37℃讓其自由擴(kuò)散，24～48h后可見孔周圍出現(xiàn)沉淀環(huán)，測(cè)定環(huán)的直徑或面積計(jì)算標(biāo)本中待測(cè)抗原的濃度。（2）每次測(cè)定都必須作標(biāo)準(zhǔn)曲線。（4）注意雙環(huán)現(xiàn)象（出現(xiàn)了兩種抗原性相同成分）。雙向擴(kuò)散試驗(yàn)也分為試管法和平板法。平板法：是在瓊脂板上相距3～5mm打一對(duì)孔，或者梅花孔、雙排孔、三角孔等。根據(jù)沉淀線的位置可作如下分析：①抗原、抗體是否存在及其相對(duì)含量。②抗原、抗體相對(duì)分子量的分析；抗原或抗體在瓊脂內(nèi)自由擴(kuò)散，其速度受分子量影響。由于慢者擴(kuò)散圈小，局部濃度較大，形成沉淀線彎向分子量大的一方。③抗原性質(zhì)的分析，受檢的抗原性質(zhì)可能完全相同、部分相同、完全不同，沉淀弧可分別出現(xiàn)完全融合、部分融合、不融合三種情況；④抗體效價(jià)的滴定。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)血液檢驗(yàn)復(fù)習(xí)指導(dǎo)：酸化甘油溶血試驗(yàn)（1）原理：當(dāng)甘油存在于低滲溶液氯化鈉磷酸緩沖液時(shí)，可阻止其中的水快速進(jìn)入紅細(xì)胞內(nèi)，使溶血過程緩慢。當(dāng)紅細(xì)胞膜蛋白及膜脂質(zhì)有缺陷時(shí)，導(dǎo)致紅細(xì)胞懸液的吸光度降至50%的時(shí)間（AGLT50）明顯縮短。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)血液檢驗(yàn)復(fù)習(xí)指導(dǎo)：紅細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)與功能：紅細(xì)胞膜含脂類40%，蛋白質(zhì)50%，碳水化合物10%.膜的主要蛋白有主體蛋白和外周蛋白。膜的主要脂類為磷脂和膽固醇，起屏障和保持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定性作用。：紅細(xì)胞能量代謝紊亂；紅細(xì)胞膜有遺傳性缺陷；酶缺陷。血紅蛋白病多為遺傳性，如：因控制遺傳的珠蛋白基因發(fā)生突變所致的結(jié)構(gòu)性血紅蛋白?。灰蛑笇?dǎo)珠蛋白合成速率的遺傳基因缺陷所致的珠蛋白生成障礙性貧血或稱海洋性貧血。通常是由接觸或誤服化學(xué)藥物所致。常見的珠蛋白生成障礙性貧血為α或β珠蛋白生成障礙性貧血。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)臨床檢驗(yàn)技師輔導(dǎo)：溶血空斑形成試驗(yàn)溶血空斑形成試驗(yàn)：經(jīng)典的溶血斑試驗(yàn)用于檢測(cè)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物抗體形成細(xì)胞的功能，其原理是將綿羊紅細(xì)胞（SRBC）免疫小鼠，4天后取出脾細(xì)胞，加入SRBC及補(bǔ)體，混合在溫?zé)岬沫傊芤褐?，澆在平皿?nèi)或玻片上，使成一蒲層，置37℃溫育。每一個(gè)空斑表示一個(gè)抗體形成細(xì)胞，空斑大小表示抗體生成細(xì)胞產(chǎn)生抗體的多少。但是上述直接和間接空斑形成試驗(yàn)都只能檢測(cè)抗紅細(xì)胞抗體的產(chǎn)生細(xì)胞，而且需要事先免疫，難以檢測(cè)人類的抗體產(chǎn)生情況?，F(xiàn)在常用的為SPASRBC溶血空斑試驗(yàn)。在該測(cè)試系統(tǒng)中，加入抗人Ig抗體，可與受檢細(xì)胞產(chǎn)生的免疫球蛋白結(jié)合形成復(fù)合物，復(fù)合物上的Fc段可與連接在SRBC上的SPA結(jié)合，同時(shí)激活補(bǔ)體，使SRBC溶解形成空斑。用抗IgA、IgG或IgM抗體包被SRBC，可測(cè)定相應(yīng)免疫球蛋白的產(chǎn)生細(xì)胞，這種試驗(yàn)稱為反相空斑形成試驗(yàn)。主要的方法有：①粘附貼壁法；②吸附柱過濾法；③磁鐵吸引法。根據(jù)細(xì)胞的特性和標(biāo)志選擇純化所需細(xì)胞的方法是陽性選擇法，而選擇性去除不要的細(xì)胞，僅留下所需的細(xì)胞為陰性選擇。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)生化檢驗(yàn)輔導(dǎo)：鋅的生理功能（1）鋅可以作為多種酶的功能成分或激活劑；（2）促進(jìn)生長(zhǎng)發(fā)育，促進(jìn)核酸及蛋白質(zhì)的生物合成；（3）增強(qiáng)免疫及吞噬細(xì)胞的功能；（4）有抗氧化、抗衰老、抗癌的作用。從糞便、尿、汗、頭發(fā)、及乳汁排泄。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)生化檢驗(yàn)輔導(dǎo)：鋅的含量分布鋅是體內(nèi)含量?jī)H次于鐵的微量元素。血鋅：80%存在于紅細(xì)胞，約18%的鋅分布于血漿。獻(xiàn)血者有EB病毒感染，黑熱病、絲蟲病、回歸熱感染時(shí)，均有可能通過輸血傳播。在由輸血引起的疾病中，以肝炎和艾滋病危害性最大。高熱（有休克）、充血性心力衰竭、理化性溶血、空氣栓塞、出血傾向、枸櫞酸鈉中毒、鉀中毒、血液酸化、高血氨、含鐵血黃素沉著癥、血栓性靜脈炎、疾病傳播（乙肝、丙肝、艾滋病、梅毒、瘧疾，巨細(xì)胞病毒感染等）。如單純性淋病、盆腔炎、淋菌型結(jié)膜炎。在膿汁標(biāo)本中，此菌通常位于中性粒細(xì)胞內(nèi)，而在慢性淋病時(shí)常位于細(xì)胞外。無芽胞和鞭毛。國(guó)內(nèi)常用血液瓊脂、巧克力瓊脂、EPV瓊脂等培養(yǎng)基。2條件下才能生長(zhǎng)。氧化酶和觸酶試驗(yàn)均陽性。對(duì)外界抵抗力極低。短期保存可置于4℃保存。：最簡(jiǎn)便常用的為臺(tái)盼藍(lán)染色法。2012年臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技師生化檢驗(yàn)輔導(dǎo)：治療藥物監(jiān)測(cè)治療藥物監(jiān)測(cè)（TDM）是指應(yīng)用一定的分析技術(shù)測(cè)定體液中藥物的濃度，以藥代動(dòng)力學(xué)理論為基礎(chǔ)和電子計(jì)算機(jī)為計(jì)算工具，研究藥物在體內(nèi)的過程，使臨床給藥個(gè)體化，科學(xué)化、合理化。當(dāng)藥物在體內(nèi)達(dá)到分布平衡后，雖然血液和靶位的藥物濃度往往并不相等，但血藥濃度與藥物效應(yīng)間存在相關(guān)性。一、等滲性缺水又稱急性缺水或混合性缺水，是外科病人最易發(fā)生的。（—）病因：常見的有：①消化液的急性喪失如大量嘔吐和腸瘺等；②體液?jiǎn)适г诟腥緟^(qū)或軟組織內(nèi)如腹腔內(nèi)或腹膜后感染、腸梗阻和燒傷等。當(dāng)喪失體液達(dá)體重的5%（相當(dāng)于喪失細(xì)胞外液20%）時(shí)，出現(xiàn)血容量不足癥狀；當(dāng)喪失體液達(dá)體重的6%～7%時(shí)，可出現(xiàn)嚴(yán)重休克，當(dāng)體液的喪失主要是胃液時(shí)，可伴發(fā)代謝性堿中毒征象。實(shí)驗(yàn)室檢查有血液濃縮表現(xiàn)，尿比重增高，但血Na+和Cl濃度仍在正常范圍內(nèi)?？筛鶕?jù)臨床表現(xiàn)估計(jì)補(bǔ)液量，也可根據(jù)血細(xì)胞比容（hct，正常值：，）來計(jì)箅。（二）臨床表現(xiàn)：常見癥狀若頭暈、視光模糊、軟弱無力、脈納速，甚至神志不清，肌痙攣性疼痛、腱反射減弱、昏迷等。中度缺鈉：除上述癥狀外，尚有惡心、嘔吐、脈細(xì)速、血壓不穩(wěn)或下降、淺靜脈萎陷。常發(fā)生休克。（四）治療：①積極處理病因；②采用含鹽溶液或高滲鹽水靜脈輸注。（二）臨床表現(xiàn)輕度缺水 除口渴外，無其他癥狀，缺水量為體重的2%～4%.中度缺水 極度口渴、乏力、尿少、尿比重高；唇干舌燥、皮膚彈性差、眼窩下陷，常出現(xiàn)煩躁。缺水量超過體重的6%.（三）診斷：①依據(jù)病史及表現(xiàn)；②尿比重增高；③血清鈉在150mmol/l以上；