dna的復(fù)制與重組-閱讀頁(yè)
2025-01-18 02:12本頁(yè)面
【正文】 組DNA轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞核內(nèi) ,基因敲除的靶細(xì)胞目前最常用的是小鼠 ES細(xì)胞 （ 3）用選擇培養(yǎng)基篩選已擊中的細(xì)胞 ﹔ （ 4）轉(zhuǎn)入假孕母鼠使其生長(zhǎng)成為轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，對(duì)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物進(jìn)行形態(tài)觀察及分子生物學(xué)檢測(cè)。 轉(zhuǎn)化子（ transformant） ：經(jīng)轉(zhuǎn)化后出現(xiàn)了供體性狀的受體細(xì)胞稱(chēng)為轉(zhuǎn)化子 ， 即轉(zhuǎn)化成功的菌落。 （ 1） 轉(zhuǎn)化因子 本質(zhì)是離體的 DNA片斷或質(zhì)粒 DNA 。 在不同的微生物中 ， 轉(zhuǎn)化因子的形式不同 ， dsDNA,ssDNA. 但不管何種情況 ， 最易與細(xì)胞表面結(jié)合的仍是 dsDNA。 質(zhì)粒 DNA也是良好的轉(zhuǎn)化因子 ， 但它們通常并不能與核染色體組發(fā)生重組 。 （ 2）人工轉(zhuǎn)化 用 CaCl2處理細(xì)胞， PEG介導(dǎo)、電穿孔、基因槍法 等是常用的人工轉(zhuǎn)化手段（使細(xì)胞膜更易于透過(guò) DNA ）。 用多種不同的技術(shù)處理受體細(xì)胞，使其人為地處于一 種可以攝取外源 DNA的 “人工感受態(tài)”。任何來(lái)源的 DNA 將其連接到質(zhì)粒上都能進(jìn)入受體細(xì)胞） . 定義：噬菌體 DNA被感受態(tài)細(xì)胞攝取 并產(chǎn)生有活性的病毒顆粒。 特點(diǎn)： 2 轉(zhuǎn)導(dǎo)（ transduction） 轉(zhuǎn)導(dǎo)： 利用完全或部分缺陷噬菌體為媒介，把供體細(xì)胞的小片段 DNA攜帶到受體細(xì)胞中，通過(guò)交換與整合，使后者獲得前者部分遺傳性狀的現(xiàn)象。 細(xì)菌轉(zhuǎn)導(dǎo)的二種類(lèi)型： 普遍性轉(zhuǎn)導(dǎo) 局限性轉(zhuǎn)導(dǎo) （ 1）、普遍性轉(zhuǎn)導(dǎo)（ generalized transduction） 通過(guò)極少數(shù)完全缺陷噬菌體對(duì)供體菌基因組上任何小片段DNA進(jìn)行誤包，而將其遺傳性狀傳遞給受體菌的現(xiàn)象，稱(chēng)普遍性轉(zhuǎn)導(dǎo)。 媒介 ： 部分缺陷噬菌體 （丟失自身一部分基因，并被 同等長(zhǎng)度的宿主基因所取代） 只能轉(zhuǎn)導(dǎo)個(gè)別特定基因 大腸桿菌中 λ噬菌體的正常裂解及半乳糖基因轉(zhuǎn)導(dǎo)噬菌體的形成過(guò)程 接合 (conjugation) 通過(guò)細(xì)胞與細(xì)胞的直接接觸而產(chǎn)生的遺傳信息的轉(zhuǎn)移和重組過(guò)程 （ 1） .接合現(xiàn)象的發(fā)現(xiàn)和證實(shí) 1946年， Joshua Lederberg 和 Edward 細(xì)菌的多重營(yíng)養(yǎng)缺陷型雜交實(shí)驗(yàn) 中間平板上長(zhǎng)出的原養(yǎng)型菌落 是兩菌株之間發(fā)生了遺傳交換 和重組所致！ 為了減少所培養(yǎng)的結(jié)果是回復(fù)突變的機(jī)會(huì)，采用了雙重或三重營(yíng)養(yǎng)缺陷型。 證實(shí)接合過(guò)程需要細(xì)胞間的直接接觸的 “ U”型管實(shí)驗(yàn)（ Bernard Davis， 1950 ） 大腸桿菌的接合型與接合 F＋ 菌株 第三節(jié) 位點(diǎn)特異性重組 一、定義： 不依賴(lài)于 DNA順序的同源性，而依賴(lài)于能與某些酶相結(jié) 合的特異的 DNA序列的存在。 （ 2）只有轉(zhuǎn)座酶 基因 （ 3） 兩端有反向重復(fù)序列 。 （ 2）兩端有兩個(gè)相同或高度同源 IS序列 （ 3）含轉(zhuǎn)座酶基因 / 抗生素基因 Transposon makers Tn IS IS TnA （ TnA family） 特點(diǎn)： （ 1） 5~25kb。 （ 3）轉(zhuǎn)座酶基因 / 解離酶基因 / 抗生素基因 TnA Transposase Resolvase Ampr IR IR 四，跟據(jù)轉(zhuǎn)座子的移動(dòng)機(jī)制，可分為： ◆ 復(fù)制型轉(zhuǎn)座 （ replicative transposition） ◆ 非復(fù)制型轉(zhuǎn)座 （ nonreplicative transposition） 五 轉(zhuǎn)座引起的遺傳學(xué)效應(yīng) （ 1）引起插入突變 （ 2）產(chǎn)生新的基因 （ 3） 引起染色體畸變 （ 4）引起生物進(jìn)化 Replicative transposition Nonreplicative transposition 演講完畢，謝謝觀看！
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