雙水相萃取詳細(xì)資料-閱讀頁(yè)
2025-01-09 21:43本頁(yè)面
【正文】 實(shí)際上 最困難的是 如何在保證碎片分配在下相的同時(shí)，把蛋白質(zhì)產(chǎn)物盡可能完全地分配在上相。單位質(zhì)量相系統(tǒng)中勻漿液的加入量：經(jīng)濟(jì)上考慮希望越多越好，但若勻漿液太多會(huì)影響原來(lái)成相聚合物的相系統(tǒng)，改變相比或者使分配系數(shù)降低。PEG系統(tǒng)中細(xì)胞碎片分配到下相中較容易分配在上相中的蛋白質(zhì)可通過(guò)加入適量的鹽（有時(shí)也可加入適量的 PEG），盡興第二次雙水相萃取，以除去多糖和核酸，它們的親水相較強(qiáng)因而容易分配在鹽相中，而蛋白質(zhì)就留在了 PEG相中；在第三步萃取中，應(yīng)該使蛋白質(zhì)分配在鹽相中（例如：調(diào)節(jié) pH），以使和主體PEG分離。主體PEG可循環(huán)使用，而鹽相蛋白質(zhì)則可用超濾方法去除殘余的 PEG以提高產(chǎn)品的純度。1990年科研人員發(fā)現(xiàn)在 PEG/磷酸鹽系統(tǒng)中，某些氨基酸和青霉素的分配是不均勻的，例如：賴氨酸的分配系數(shù)為 ，而類黑素的分配系數(shù)為 ，從而可將二者分離。分離純化小分子同樣的也利用的是 PEG/鹽系統(tǒng)雙水相萃取技術(shù)的進(jìn)展廉價(jià)雙水相體系的開發(fā) ：兩種雙水相體系的比較體 系 優(yōu) 點(diǎn) 缺 點(diǎn)高聚物 /高聚物 鹽濃 度低，活性損 失小 ，可用離子交換層析純化成本高 ，粘度大，分相困 難高聚物 /鹽成本低，粘度小 ，比較適合工業(yè)規(guī)模的應(yīng)用鹽濃 度高， 非鹽水的處理比較困難， 活性 損 失大 ,界面吸附多雙水相萃取技術(shù)同其他分離技術(shù)相結(jié)合A、 雙水相體系同生物轉(zhuǎn)化相結(jié)合：B、 雙水相萃取同膜分離技術(shù)相結(jié)合：C、 雙水相萃取同親和層析相結(jié)合 —— 親和萃?。ㄓH和分配）：蛋白質(zhì)在兩水相系統(tǒng)中的分配系數(shù)一般不是很大，為了提高分配系數(shù)和萃取效率，可將親和層析與兩水相萃取結(jié)合起來(lái)，成為親和萃取或親和分配，即把一種配基與一種成相聚合物以共價(jià)相結(jié)合，使該配基隨成相聚合物分配在某一相中。通常選擇在 PEG上接上配基，當(dāng)配基 —PEG 的濃度增加時(shí)，蛋白質(zhì)的分配系數(shù)也增加。原理：在雙水相系統(tǒng)中進(jìn)行轉(zhuǎn)化反應(yīng)，如酶促反應(yīng)，可以把產(chǎn)物一如另一相中，消除產(chǎn)物抑制，因而可提高效率。如果發(fā)生的是一種發(fā)酵過(guò)程，也可成為萃取發(fā)酵。優(yōu)點(diǎn)： ，不需載體，不存在多孔載體中的擴(kuò)散阻力，故反應(yīng)速度快，生產(chǎn)能力較高； 相系統(tǒng)中教穩(wěn)定； ，輕微攪拌即能形成高度分散的系統(tǒng)，分散相液滴在 10μm一下，有很大的表面積，有利于底物和產(chǎn)物
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