瓊脂糖凝膠電泳準(zhǔn)備手冊-閱讀頁
2024-08-23 22:50本頁面
【正文】 加密度，使樣品沉入孑L底；指示樣品的遷移過程，上樣緩沖液中一般加了兩種指示劑，溴酚蘭和二甲苯青(值得注意的是指示劑并非染色劑，DNA染色劑是溴化乙錠，而且要在紫外光的激發(fā)下才能看見桔紅色熒光)。使用時上樣緩沖液應(yīng)稀釋到一倍濃度。 3 電泳將電泳儀的正極與電泳槽的正極相連，負(fù)極與負(fù)極相連，核酸帶負(fù)電荷，從負(fù)極向正極移動。電泳時凝膠上所加電壓一般不超過5 v／cm(指的是正負(fù)電極之間的距離，而不是凝膠的長度)，電泳時間一般為3O～60 min，根據(jù)實驗需要也可作適當(dāng)調(diào)整，電壓增高，電泳時間縮短，核酸條帶相對來說不夠整齊，不夠清晰；相反，電壓降低，電泳時間較長，核酸條帶整齊清晰。4 結(jié)果分析較成功的電泳結(jié)果是分子量標(biāo)準(zhǔn)條帶整齊清晰，樣品條帶也整齊清晰，如果條帶模糊暗淡，單從瓊脂糖凝膠電泳角度來說，可能的原因：溴化乙錠的質(zhì)和量怎樣?溴化乙錠見光易分解，母液配制時間過長或保存不當(dāng)(一般4℃ 避光保存一年內(nèi)有效)，或者終濃度沒達到0．5 vg／ml；電泳槽中緩沖液使用次數(shù)過多，緩沖能力下降。實際工作中經(jīng)常發(fā)現(xiàn)DNA 分子量標(biāo)準(zhǔn)小片段模糊不清，那足因為瓊脂糖凝膠濃度一般不會超過2 0％ ，較小的核酸片段在它的分辨范圍之內(nèi)，并且EB帶正電荷，電泳時會向負(fù)傲移動，如果將凝膠置含EB(0．5g／m1)的水溶液中30 min，較小的片段則可重新染色：另外，溴化乙錠(EB)是一種中等強度誘變劑，操作過程中要戴手套，并將加有EB的染色液作好標(biāo)記、妥善保存.
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