植物細胞的獲取ppt課件-閱讀頁
2025-05-16 02:17本頁面
【正文】 體。 ? 1960年， Cocking首次應(yīng)用酶法制備番茄根原生質(zhì)體獲得成功。 ? 1985年， Fujimura 第一例禾谷類作物－水稻原生質(zhì)體培養(yǎng)再生植株。 一、 植物原生質(zhì)體的材料來源 幾乎能從植物的所有部位得到原生質(zhì)體 ， 其中以 葉片 為多 ，因為植物葉肉細胞的原生質(zhì)體有下面幾個優(yōu)點： ? ， 植株可來自盆栽和溫室栽培 ， 也可在試管中培育無菌苗 。 ? 。 ?花粉 經(jīng)特異酶處理也能得到原生質(zhì)體 ， 在單倍體遺傳育種中有特殊的用途 。 由于組織培養(yǎng)的嚴格條件 ， 使得材料的重復(fù)性好 ， 實驗材料可做到常年供應(yīng) 。 二 . 植物原生質(zhì)體的分離和純化 ? (一 ) 原生質(zhì)體的分離 ? 早在 1892年就有人用機械法分離原生質(zhì)體 。 ? 酶解法有下面幾個優(yōu)點： ? 能獲得大量的原生質(zhì)體； ? 條件溫和 ， 原生質(zhì)體完整性好； ? 原生質(zhì)體純凈度高； ? 下面以葉片和懸浮培養(yǎng)的細胞為材料介紹分離原生質(zhì)體的一般步驟 。 若采用懸浮培養(yǎng)的細胞 ， 則采用繼代3d的細胞最好 ， 經(jīng)離心收集細胞 ， 放入酶液中置低速轉(zhuǎn)床酶解812hr。 ? ， 低速離心使原生質(zhì)體沉于管底 ， 倒掉上清液 。 ? ， 使酶解液充分除去 ， 最后用原生質(zhì)體培養(yǎng)液洗滌一次 。 原生質(zhì)體培養(yǎng)基 分離時酶的溶劑為原生質(zhì)體培養(yǎng)基 甘露醇和蔗糖為滲透壓調(diào)節(jié)劑 在酶液中加入適量的氯化鈣和磷酸二氫鉀作為原生質(zhì)體穩(wěn)定劑，可增強質(zhì)膜的穩(wěn)定性 酶溶劑用原生質(zhì)體培養(yǎng)基或特殊配制 (三 ) 原生質(zhì)體的活力測定 ? 一是 目測法 ：憑借形態(tài)可識別原生質(zhì)體的存活性 。 活的原生質(zhì)體的酯酶能分解 FDA成為具有熒光的極性物質(zhì) ， 無活力的不產(chǎn)生熒光 。 不同細胞細胞壁組成和結(jié)構(gòu)有差異 ，故酶的種類和濃度也不相同 ， 如分離根尖細胞要有較多的果膠酶；花粉母細胞及四分體小孢子：蝸牛酶及胼胝質(zhì)酶聯(lián)合；成熟花粉細胞：果膠酶和纖維素酶 。 pH值低則分離速度較快 ， 而損壞的較多； pH值高則分離速度較慢 ，而完整性較好；故酶液的 pH值一般為 。 在酶液中加入適量的 CaCl2和 KH2PO4作為原生質(zhì)體穩(wěn)定劑 ， 可增強質(zhì)膜的穩(wěn)定性 。 四 . 培養(yǎng)原生質(zhì)體的幾種方法 ? 原生質(zhì)體經(jīng)分離和純化后 ， 需要進行活力測定和計數(shù) 。 計數(shù)可用血球計數(shù)板進行 。 ? 優(yōu)點：操作簡單，對原生質(zhì)體的操作小，且易于添加新鮮培養(yǎng)基和轉(zhuǎn)移培養(yǎng)物。此外，難以跟蹤觀察某一個細胞的發(fā)育情況。低融點的瓊脂糖可在 30℃ 左右融化與原生質(zhì)體混合而不影響原生質(zhì)體的生命活動。 ? 優(yōu)點：可以跟蹤觀察單個原生質(zhì)體的發(fā)育情況，易于統(tǒng)計原生質(zhì)體分裂頻率。 液體－固體雙層培養(yǎng) ? 即在培養(yǎng)皿的底部鋪一層瓊脂糖固體培養(yǎng)基，再將原生質(zhì)體懸浮液滴于固體培養(yǎng)基表面。 ? 缺點：不易觀察細胞的發(fā)育過程。培養(yǎng)過程中，通過調(diào)整液體培養(yǎng)基的滲透壓來調(diào)節(jié)培養(yǎng)物的滲透壓以利于其進一步的生長和發(fā)育。 第五節(jié) 通過花藥獲取花粉粒 ? 花粉的分離有二種方法，即花藥漂浮培養(yǎng)自然釋放法和機械分離法。 ? （ 2）機械分離方法 ? 分離： 把花藥放在玻璃容器中，加入一定量適當濃度的蔗糖溶液或適量液體培養(yǎng)基，用注射器內(nèi)徑輕輕擠壓花藥把花粉擠出來，或用磁力攪拌器把花藥攪裂使花粉散出來。一般孔徑應(yīng)比花粉直徑大 10um左右，將濾液離心，去上清液。最后一次用需用培養(yǎng)花粉的液體培養(yǎng)基進行，以保證培養(yǎng)基成分的穩(wěn)定性。 謝謝觀看
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