質(zhì)粒提取及瓊脂糖凝膠電泳-閱讀頁(yè)
2025-05-15 12:03本頁(yè)面
【正文】 式中 f—— 阻力，牛頓； r—— 粒子半徑，米； η —— 介質(zhì)粘度，牛頓 tVldlvtdEm??????d 為帶電顆粒泳動(dòng)的距離 (cm)； l 為支持物的有效長(zhǎng)度 (cm)； t為通電時(shí)間 (秒 )； V為加在支持物兩端的實(shí)際電壓 (V) 單位是 cm2V 1 實(shí)驗(yàn)步驟 加 EP管， 12022rpm 30S 重復(fù)一次，最后一次 將 EP管放在吸水紙上扣干 除去上清，加入冰的 100 181。l 溶液 II， 溫和 顛倒數(shù)次，室溫放置 3min 加入 150181。l ） 加入等體積 氯仿 ，溫和混勻， 12022rpm 2min 上層水相轉(zhuǎn)移到新 EP管（ 統(tǒng)一吸 300 181。l TE 溶解 DNA 瓊脂糖凝膠板的制備 （封板、 制備 1%凝膠 、 倒膠 、插梳、 凝固后拔梳 ） 倒緩沖液， 加樣 （ 取質(zhì)粒 DNA樣品液 10μl + 2μl上樣緩沖液 ，輕輕混勻， 避免氣泡 ） 電泳（ 100V ， 5V/cm） 檢測(cè) （ 紫外燈下檢測(cè) ） 主要試劑及作用 Ⅰ ： ① 蔗糖 ：增加溶液的粘度 ,減少抽提過(guò)程中的機(jī)械剪切作用 ,防止破壞質(zhì)粒 . (保護(hù)作用 ) ② EDTA ：絡(luò)合掉鎂等二價(jià)金屬離子 , 防止 DNA酶對(duì)質(zhì)粒分子的降解作用。 ② KAC會(huì)與 SDS形成溶解度很低的鹽，并與蛋白質(zhì)形成沉淀而除去；溶液中的染色體 DNA也會(huì)與蛋白質(zhì) SDS復(fù)合物纏繞成大分子而與小分子質(zhì)粒 DNA分離。 ② 溴酚藍(lán) ：
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