【正文】 ，利用引物 ORF1/ORF2 進行 PCR 擴增目的基因 SIX1 的片段，經(jīng)測序及 BLAST 比 13 對共獲得 30 條有效序列。 （ 10）篩選了多株茄科與瓜類枯萎病生防菌，包括短短芽胞桿菌、枯草芽胞桿菌、哈 茨木霉、凝結(jié)芽胞桿菌，研究其微生物學特性及其（復(fù)合）微生物發(fā)酵技術(shù)，生產(chǎn)復(fù)合微生物制劑 生物肥藥 篩選出具有自主知識產(chǎn)權(quán)的、生防效果穩(wěn)定的枯萎病生防細菌芽胞桿菌（短短芽胞桿菌、枯草芽胞桿菌和凝結(jié)芽胞桿菌）和生防真菌哈茨木霉菌，研究其微生物學特性及其（復(fù)合）微生物發(fā)酵技術(shù)，生產(chǎn)復(fù)合微生物制劑 生物肥藥。 （ 11）將淡紫擬青霉應(yīng)用于甘薯莖線蟲的防治，建立了高毒力培養(yǎng)數(shù)學模型 對淡紫擬青霉的研究主要用于控制根結(jié)線蟲和胞囊線蟲。田間試驗效果表明，淡紫擬青霉 NHPL2020 菌劑防治甘薯莖線蟲效果顯著，持效期長，與常規(guī)化學農(nóng)藥比較，價格低，效果好，無藥害，無殘留，有良好的經(jīng)濟、生態(tài)、社會效益。本項目深入地研究了淡紫擬青霉 NHPL2020 的殺線機理，明確了菌株分泌幾丁質(zhì)酶是作物線蟲毒殺活性因子，首次克隆了淡紫擬青霉 NHPL2020 的幾丁質(zhì)酶基因，命名為 PLChi1，通過轉(zhuǎn)錄表達證實該基因功能是消解作物線蟲體表和卵殼的幾丁質(zhì)層主要因子。本項目證實淡紫擬青霉 NHPL2020 對枯萎病病原菌 尖孢鐮刀菌有著強烈的抑菌作用，明確了其抑菌機理是菌株產(chǎn)生 β葡萄糖苷酶消解病原菌細胞壁，產(chǎn)生多糖抑制尖孢鐮刀菌的生長繁殖。優(yōu)化了淡紫擬青霉 NHPL2020 產(chǎn)生 β葡萄糖苷酶和多糖的培養(yǎng)條件，提高了該菌株對尖孢鐮刀菌的抑菌能力。本項目首次發(fā)現(xiàn)淡紫擬青霉NHPL2020 對辛硫磷農(nóng)藥有顯著的降解效應(yīng)，在防治作物線蟲和枯萎病的同時可以降解 14 農(nóng)藥殘留，明確其機制包括兩個方面：一是淡紫擬青霉菌體釋放的降解酶對有機磷的分解；二是淡紫擬青霉菌絲球?qū)τ袡C磷的吸附作用，并優(yōu)化了淡紫擬青霉最佳有機磷降解效能的發(fā)酵條件。菌劑用于防治茄子、菜豆、煙草、柑橘根結(jié)線蟲以及甘薯莖線蟲，進行了規(guī)?；茝V示范，累計防治面積 25萬畝次，實現(xiàn)增收 億元，取得了顯著的經(jīng)濟、生態(tài)、社會效益，具有較強的市場競爭力和產(chǎn)業(yè)化前景 。 15 5．與當前國內(nèi)外同類研究、同類技術(shù)的綜合比較： （ 1）獲得多個具有自主知識產(chǎn)權(quán)的生防細菌和真菌菌株。 （ 2）獲得多功能性線蟲生防真菌。 （ 3）明確青枯病生防菌的致弱機理。 （ 4）獲得淡紫擬青霉殺線蟲功能基因和抑菌活性成分。 （ 5）建立具有自主知識產(chǎn)權(quán)的生防細菌菌劑中試規(guī)模的網(wǎng)絡(luò)監(jiān)控生物反應(yīng)系統(tǒng)。成功研制出生防菌的存活基質(zhì)，建立了菌劑生產(chǎn)工藝和保質(zhì)技術(shù)，獲得發(fā)明專利 3 項。 （ 6）突破了真菌深層發(fā)酵的技術(shù)難點。 （ 7）成果應(yīng)用廣泛，社會經(jīng)濟效益顯著。鑒定專家組一致認為，本項目總體上達到國際領(lǐng)先水平。 17 7．主要技術(shù)文件目錄及來源： 1） 研究綜合報告 ： 由福建省農(nóng)業(yè)科學院 農(nóng)業(yè)生物資源研究所提供 2） 查新報告 ： 由教育部科技查新工作站 (N05)提供 3） 知識產(chǎn)權(quán)證明 （ 1）發(fā)明專利 ：由福建省農(nóng)業(yè)科學院農(nóng)業(yè)生物資源研究所提供 （ 2）農(nóng)藥登記證 ：由福建福農(nóng)生化有限公司、福建凱立生物制品有限公司、福建省詔安縣綠洲生化有限公司提供 （ 3）獲獎證書 ：由福建省農(nóng)業(yè)科學院農(nóng)業(yè)生物資源研究所提供 4） 應(yīng)用證明 廈門市郭山蔬菜專業(yè)合作社、莆田市大地農(nóng)業(yè)科技有限公司、漳州市農(nóng)優(yōu)科技開發(fā)公司、廈門市同安區(qū)洪塘鎮(zhèn)郭山村、邵武市農(nóng)資公司農(nóng)藥經(jīng)營部、邵武市振農(nóng)農(nóng)化經(jīng)營部、順昌縣龍得寶農(nóng)資有限公司、福建眾智 生物科技有限公司、宦溪鎮(zhèn)降虎村、福建省寧德市農(nóng)業(yè)科學研究所等 34家農(nóng)戶、公司或合作社。 與普通化學農(nóng)藥比較，所研發(fā)的生防菌劑價格低，效果好，不造成藥害，不污染環(huán)境，作物的農(nóng)藥殘留不超標，有良好的經(jīng)濟、生態(tài)、社會效益。 “十二五 ”期間，我國農(nóng)藥行業(yè)產(chǎn)業(yè)升級、兼并重組的腳步將會加快，農(nóng)藥生產(chǎn)將進一步向大型化、集約化方向發(fā)展，農(nóng)藥產(chǎn)品將朝著高效、安全、經(jīng)濟和環(huán)境友好的方向發(fā)展。 通過項目的實施，研 發(fā)的單一和復(fù)合微生物制劑具有安全、環(huán)保、穩(wěn)定性強、生產(chǎn)工藝明確、成本低等優(yōu)點，在成為替代化學農(nóng)藥的生防制劑方面具有廣闊的前景，具有開發(fā)新型生物農(nóng)藥的良好潛力，對于綠色無公害農(nóng)業(yè)的發(fā)展具有很大的促進 作用。如歐盟將從 2020 年起，對我國出口的茶葉的農(nóng)藥殘留檢測品種從原來的 2 種增加到 13 種。 2）茄科和瓜類蔬菜主要土傳病害 生防菌劑的研究是創(chuàng)匯農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)的基礎(chǔ) 設(shè)施蔬 菜番茄、茄子、辣椒、馬鈴薯、生姜等作物，具有廣泛的出口創(chuàng)匯前景，但是，這些作物的線蟲病發(fā)生十分嚴重，大量地使用化學農(nóng)藥，不但不能取得良好的防治效果，同時造成農(nóng)產(chǎn)品嚴重的農(nóng)藥殘留污染，限制了農(nóng)產(chǎn)品的出口。 3）茄科和瓜類蔬菜主要土傳病害 生防菌劑的研究將成為生物工程產(chǎn)業(yè)龍頭 我國是一個農(nóng)業(yè)大國，生物農(nóng)藥產(chǎn)業(yè)化的市場前景十分廣闊，生物農(nóng)藥僅從現(xiàn)在的%上升到 10%（國外為 60%），全國生物農(nóng)藥 的年需求量達 102020 噸 /年，年產(chǎn)值 50 億 /年左右。 4）茄科和瓜類蔬菜主要土傳病害 生防菌劑的應(yīng)用將帶動商業(yè)貿(mào)易的發(fā)展 應(yīng)用 生防菌劑 解決農(nóng)產(chǎn)品的農(nóng)藥殘留，生產(chǎn)綠色食品，將形成綠色消費熱潮，與之配套的商貿(mào)行 業(yè)將形成綠色觀點、綠色通道，形成消費的新的增長點，促進農(nóng)業(yè)生產(chǎn)、創(chuàng)匯農(nóng)業(yè)、農(nóng)產(chǎn)品貿(mào)易、商業(yè)貿(mào)易、運輸業(yè)的發(fā)展。 1）茄科和瓜類蔬菜主要土傳 病害生防菌劑的研究為解決 “餐桌污染 ”提供技術(shù)保障 為提高農(nóng)作物產(chǎn)量和減少害蟲的危害，人們大量地使用化學農(nóng)藥，由于病蟲空間分布的稀疏性， 90%的化學農(nóng)藥殘留在農(nóng)田生態(tài)系中，出現(xiàn)了嚴重的 “3R”問題，即農(nóng)藥殘留、害蟲抗藥性和害蟲的再增猖獗，化學農(nóng)藥的使用濃度越來越高，引起了防治成本上升，造成農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留嚴重超標，大量殺死天敵，破壞生態(tài)平衡，污染了人類居住的環(huán)境，形成了公害。說明化學農(nóng)藥已對人類的健 康構(gòu)成越來越大的威脅。 2）茄科和瓜類蔬菜主要土傳病害生防菌劑的研究與綠色食品產(chǎn)業(yè)息息相關(guān) . 現(xiàn)代高新農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)綜合開發(fā)，必須構(gòu)建從農(nóng)業(yè)生產(chǎn)資料供應(yīng)、綠色農(nóng)產(chǎn)品基地建設(shè)，到綠色農(nóng)產(chǎn)品深加工、倉儲、運輸、銷售的綠色產(chǎn)業(yè)鏈。 3）茄 科和瓜類蔬菜主要土傳病害生防菌劑的研究與環(huán)境保護產(chǎn)業(yè)緊密相聯(lián) 現(xiàn)代工業(yè)文明，為我國農(nóng)民帶來了豐收的喜悅，然而它似一面雙刃劍，帶來了系列不能不引起我們重視的負面效應(yīng)。研究表明，環(huán)境污染中農(nóng)業(yè)環(huán)境污染是其主要來源，國家每年須花費大量的財力進行污染治理。 21 、前景和措施 隨著許多經(jīng)濟發(fā)達國家推行的生態(tài)農(nóng)業(yè)計劃，微生物 農(nóng)藥的研究與應(yīng)用成為支持該計劃的核心內(nèi)容。 同時，通過本項目研究，明確了生防菌的抑菌、殺線機理、主要活性成分等，克服了目前生物農(nóng)藥基礎(chǔ)研究薄弱，新產(chǎn)品開發(fā)的后勁不足的問題。自行設(shè)計并完成了生防細菌菌劑中試規(guī)模的網(wǎng)絡(luò)監(jiān)控生物反應(yīng)系統(tǒng)，建立了菌劑生物測定的標準化方法。 解決了目前生物農(nóng)藥面臨的生產(chǎn)工藝落后，產(chǎn)品制劑化困難，質(zhì)量穩(wěn)定性差的瓶問題。 在相應(yīng)農(nóng)業(yè)部加大綠色農(nóng)業(yè)發(fā)展的號召下， 我們一方面加大生防菌及的示范推廣力度， 通過 編印通俗易懂的培訓(xùn)材料，舉辦培訓(xùn)班、實地考察和技術(shù)人員現(xiàn)場指導(dǎo)相結(jié)合的方式，培訓(xùn)技術(shù)人員， 在蔬菜主產(chǎn)區(qū) 進行主要土傳病害生物防治技術(shù)的推廣應(yīng)用，提供生防菌劑，優(yōu)化施用方法，在不同蔬菜品種上進行大規(guī)模示范應(yīng)用，帶動農(nóng)戶實施生物防治技術(shù)推廣。 22 12. 存在的問題及改進思路與方法 本項目研發(fā)的茄科和瓜類蔬菜主要土傳病害生防菌的推廣應(yīng)用需要大量的人力、財力和物力，僅靠項目組來進行維持困難重重，建議上級主管部門進一步扶持和資助，同時結(jié)合更多生防菌劑的研發(fā)，擴大應(yīng)用范圍，以便于長期有效進行茄科、瓜類及其它蔬菜的生物防治，促進綠色 農(nóng)業(yè)的發(fā)展。 1．本項目獲得 省、自治區(qū)、直轄市政府和國務(wù)院有關(guān)部委常設(shè)的科技獎勵情況； 2．經(jīng)科技部批準的其他社會力量設(shè)立的科學技術(shù)獎勵情況； 3．省、自治區(qū)、直轄市批準的社會力量設(shè)立的科學技術(shù)獎 勵情況。 3 朱育菁 女 研究員 博士 福建省農(nóng)業(yè)科學院農(nóng)業(yè)生物資源研究所 建立青枯病生防菌 ANTI8098A 組培苗回接、 致弱盤 檢測、盆 栽苗接菌、田間小區(qū)藥效測定、大田防效試驗的生物測定體系，以及 生防菌致弱機理的研究。 25 5 史 懷 男 助理研究員 碩士 福建省農(nóng)業(yè)科學院農(nóng)業(yè)生物資源研究所 主 要進行淡紫擬青霉作用機理研究，分離純化抗菌多糖，并進行 多糖的物質(zhì)結(jié)構(gòu)、理化特性、生物活性等分析。 7 黃素芳 女 副研究員 學士 福建省農(nóng)業(yè)科學院農(nóng)業(yè)生物資源研究所 主要進行了淡紫擬青霉生物學特性以及發(fā)酵工藝的研究，以及淡紫擬青霉對辛硫磷的降解效應(yīng)研究。 9 林營志 男 副研究員 博士 福建省農(nóng)業(yè)科學院農(nóng)業(yè)生物資源研究所 設(shè)計了網(wǎng)絡(luò)監(jiān)控生物反應(yīng)器，對生防菌發(fā)酵過程進行了模擬和建模，完成了生防菌的工業(yè)化生產(chǎn)的中試，實現(xiàn)了生防菌發(fā)酵過程的遠程控制。 26 12 張海峰 男 研究員 博士生 福建省農(nóng)業(yè)科學院 參加 茄瓜類蔬菜土傳病害生物殺菌劑制劑 發(fā)酵生產(chǎn)及 在田間進行推廣應(yīng)用 13 朱昌雄 男 研究員 博士 中國農(nóng)業(yè)科學院農(nóng)業(yè)環(huán)境與可持續(xù)發(fā)展研究所 主要對淡紫擬青霉的殺線機理進行了研究。 15 藍江林 女 副研究員 博士 福建省農(nóng)業(yè)科學院農(nóng)業(yè)生物資源研究所 參加枯萎病生防菌 的 篩選、 培養(yǎng)基優(yōu)化和抑菌機理的研究 。 17 李 芳 女 教授 博士 福建農(nóng)林 大學 主要進行了淡紫擬青霉生物學特性以及發(fā)酵工藝的研究，以及淡紫擬青霉對枯萎病的抑制機理研究。 27 19 趙立平 男 工程師 博士 福建凱立生物制品有限公司 進行淡紫擬青霉農(nóng)藥登記證的相關(guān)申報工作，淡紫擬青霉田間使用技術(shù)研究及推廣應(yīng)用。 21 劉明輝 女 高級工程師 本科 開創(chuàng)陽光環(huán)?？萍及l(fā)展（北京）有限公司 主要進行了淡紫擬青霉的田間試驗和應(yīng)用推廣工作。 17． 軟科學類成果 應(yīng) 提交以下技術(shù)資料： ⑴ 研究報告； ⑵ 發(fā)表的論文或出版的著作； ⑶ 論文（論著）被收錄和被他人論文（論著）正面引用證明； ⑷ 實際應(yīng)用或采納單位出具的證明； ⑸ 中國農(nóng)學會認為評價所必需的其他技術(shù)資料。 注：科技成果評價委托方和成果完成者應(yīng)當提供真實有效的技術(shù)資料，因提供虛假數(shù)據(jù)和資料而產(chǎn)生的相關(guān)法律責任由數(shù)據(jù)和資料提供