【正文】 ggg原料重量離心管重量離心管重量）（油重量精油得率%100%200g ???????? 100%原料重量 離心管重量離心管重量）（ 油重量精油得率3 結(jié)果與討論 孜然精油提取的結(jié)果與討論 水蒸餾法精油得率計(jì)算： 亞臨界萃取法精油得率計(jì)算： 水蒸餾法是目前最常用的植物精油提取的方法之一。水蒸餾是指將植物原料與水按照一定的比例混合后，直接加熱蒸餾出精油和水，冷 卻以后，分離出植物精油。并且在實(shí)驗(yàn)中，將油水混合物分離時(shí)用乙醚萃取，萃取后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去溶劑，整個(gè)過(guò)程中存在萃取不充分，溶劑除不干凈等情況，導(dǎo)致最后精油得率變低。另外，由于原料與水蒸氣長(zhǎng)時(shí)間接觸，部分成分容易遭到破壞，且水溶性物質(zhì)不易蒸出 [20]。 兩種不同方法得出的孜然精油顏色為淡黃色，有香味。同時(shí)，該精油為揮發(fā)性物質(zhì)，易揮發(fā)，也減少了其精油量。 孜然精油化學(xué)成分的分析與討論 氣相色譜 質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（ GCMS）有高的靈敏度，好的選擇性和分析速度快等多個(gè)優(yōu)點(diǎn)，對(duì)于植物精油香料的分析，氣相色譜 質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)已成為首選。水蒸餾得到精油共檢測(cè)出 69 個(gè)成分，鑒定了占精油含量 %的 46 個(gè)成分（圖 31） 。各成分 鑒定結(jié)果見(jiàn)表 11， 12。亞臨界萃取得到的孜然精油主要成分為 苯基 1,2乙二醇 %， 二氯甲烷 %， γ松油烯 %， 枯茗醛 %， β蒎烯 %，鄰傘花烴 %等其他化合物。 且二者均含有二氯甲烷，可能是樣品進(jìn)樣前柱子未清洗干凈，造成一定的有機(jī)溶劑殘留。目前，國(guó)內(nèi)外研究者對(duì)孜然的研究主要集中在種子揮發(fā)油的提取方法和提取工藝上，對(duì)揮發(fā)油的化學(xué)組成、分子結(jié)構(gòu)和生物活性也進(jìn)行了初步的研究，其研究結(jié)果也呈現(xiàn)多種說(shuō)法；同時(shí)對(duì)孜然種子中非揮發(fā)性成分的提取、分離及純化的研究相對(duì)較少，需要深入研究。結(jié)果表明，兩種不同方法提取的孜然精油對(duì)黃曲霉生長(zhǎng)均有較強(qiáng)的抑制作用，水蒸餾法及亞臨界萃取法的抑制率分別達(dá) 到%， ％ .生長(zhǎng)直徑及抑制率見(jiàn)下表： 33 黃曲霉 生長(zhǎng)直徑隨時(shí)間的變化 表 34 黃曲霉 （ %） 時(shí)間 /天 對(duì)照組 /mm 水蒸餾 /mm 亞臨界 /mm 1 177。 177。 177。 3 177。 177。 177。 5 177。 177。這就 進(jìn)一步為生物防治黃曲霉奠定了一定的基礎(chǔ)。黃曲霉 熒光性與其產(chǎn)毒能力有關(guān)，產(chǎn)毒能力越強(qiáng)產(chǎn)生毒 素越多時(shí)熒光性就越強(qiáng)，反之產(chǎn)毒能力產(chǎn)生毒素少則熒光性較弱；通過(guò)實(shí)驗(yàn)可得，孜然精油對(duì)黃曲霉 產(chǎn)毒能力有一定的抑制作用，進(jìn)而影響其熒光性。相關(guān)的調(diào)控機(jī)理尚需進(jìn)一步研究 [21]。因此，本實(shí)驗(yàn)通過(guò) 顯微鏡數(shù)碼顯像系統(tǒng) 觀(guān)察了黃曲霉菌絲體的形態(tài)，并記錄圖像，分析兩種方法提取的孜然精油對(duì)黃曲霉菌絲體形態(tài)的影響。說(shuō)明孜然精油嚴(yán)重破壞了黃曲霉菌絲體細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)，使黃曲霉不能維持細(xì)胞固有的形態(tài)，阻止菌絲體的生長(zhǎng)。真菌細(xì)胞壁的主要成分是己糖或氨基己糖，細(xì)胞膜的主要成分是磷酯類(lèi)、鞘酯類(lèi)和固醇組成。 常用植物香料提取液對(duì)黃曲霉抑制效果的研究 21 孜然精油對(duì)黃曲霉孢子 萌發(fā)的影響結(jié)果與討論 之前固體培養(yǎng)研究結(jié)果表明，在培養(yǎng)初期，孜然精油對(duì)黃曲霉 生長(zhǎng)的抑制效果明顯，猜測(cè)其可能對(duì)黃曲霉孢子的萌發(fā)有抑制效果。具體圖像如下： 圖 37 黃曲霉 孢子萌發(fā)過(guò)程中的形態(tài)變化， AC：培養(yǎng)于 PDB； DF：培養(yǎng)于含有孜然精油的 PDB；其中， A 與 D 培養(yǎng) 2h (400)， B 與 E 培養(yǎng) 6h (400） ， C 與 F 培養(yǎng) 10h (1000) 從上圖中可以看出，對(duì)照組中隨著 時(shí)間推移， 10 h 后，發(fā)芽管延伸，部分形成菌絲體。 有研究初步揭示對(duì)孢子萌發(fā)力抑制作用的機(jī)制在于核 DNA 的致死損傷。發(fā)現(xiàn)首先是通過(guò)改變膜的選擇性通透性而損傷質(zhì)膜進(jìn)入細(xì)胞，進(jìn)入細(xì)胞后，又與 DNA 相互作用，使核 DNA 產(chǎn)生不可逆損傷，使有關(guān)基因 不能表達(dá) (待專(zhuān)文報(bào)道 ） ，從而失去對(duì)代謝的調(diào)節(jié)控制以及自我復(fù)制的正常進(jìn)行，最后導(dǎo)致孢子失去萌發(fā)力。 A B C D E F 陜西科技大學(xué)畢業(yè)論文 22 4 結(jié)論與展望 結(jié)論 （ 1） 本次實(shí)驗(yàn)中，采用的傳統(tǒng)水蒸餾法和亞臨界萃取法提取孜然種子中的精油，得率分別為 %， %，總體來(lái)說(shuō)，得率不高。 總體抑制效果較為明顯。 （ 4） 孜然精油對(duì)黃曲霉菌絲體形態(tài)影響的實(shí)驗(yàn)中，對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組菌絲體形態(tài)差別明顯， 使黃曲霉菌絲體發(fā)生扭曲，收縮變形，嚴(yán)重破壞細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)，阻止菌絲體的生長(zhǎng)。對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組差別明顯，實(shí)驗(yàn)組孢子數(shù)較少， 能顯著抑制黃曲霉孢子的萌發(fā)，引起孢子收縮、塌陷，降低孢子表面的粗糙 度，破壞細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致細(xì)胞死亡。在亞臨界萃取中，可選用不同的萃取劑，適當(dāng)改變實(shí)驗(yàn)條件這幾方面進(jìn)行進(jìn)一步的研究，來(lái)提高其得率。 （ 2）本研究發(fā)現(xiàn)了孜然精油能有效抑制黃曲霉 生長(zhǎng)，但未研究其 最小抑菌濃度（ MIC）和最 小殺菌濃度（ MFC），應(yīng)進(jìn)一步在好的結(jié)果基礎(chǔ)上進(jìn)行深入的研究 [18]，可采用微孔板培養(yǎng)法。 （ 4）本研究還可以從細(xì)胞膜完整率測(cè)定以及黃曲霉蛋白表達(dá)的抑制等不同方面來(lái)進(jìn)行更深的研究。 本論文是在 徐丹老師的悉心指導(dǎo)下完成的。從寒假開(kāi)始，老師就提前督促我們完成實(shí)驗(yàn)前期方案的設(shè)計(jì)，外文文獻(xiàn)的翻譯等工作。用知識(shí)來(lái)武裝自己。在此也要特別感謝石偉力學(xué)姐在實(shí)驗(yàn)中的幫助，實(shí)驗(yàn)原料儀器方面的購(gòu)買(mǎi)都提供了很大的幫助。 很慶幸能有你們的幫助， 很榮幸能在這樣一個(gè)團(tuán)結(jié)奮進(jìn)、充滿(mǎn)朝氣和活力的學(xué)術(shù)團(tuán)體中完成我的論文實(shí)驗(yàn)工作 !感謝室友在四年的學(xué)習(xí)生活中與我互相鼓勵(lì)，共同奮斗！ 感謝我的親人和朋友，你們永遠(yuǎn)是我最大的依靠，是 我的力量之源，我會(huì)繼續(xù)努力奮斗，堅(jiān)持不懈！ 高迎利 2022 年 6 月 16 日 陜西科技大學(xué)畢業(yè)論文 24 參考文獻(xiàn) [1] Davis ND, IyerSK, Diener UL. 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