cr技術(shù)與應(yīng)用ppt課件-閱讀頁(yè)
2025-01-23 00:23本頁(yè)面
【正文】 ，用以直觀地檢測(cè)目的基因。它是利用完整的細(xì)胞作為一個(gè)微小的反應(yīng)體系來擴(kuò)增細(xì)胞內(nèi)的目的片段，在不破壞細(xì)胞的前提下，利用一些特定的檢測(cè)手段來檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的擴(kuò)增產(chǎn)物?？蛇M(jìn)行細(xì)胞內(nèi)定位。而標(biāo)準(zhǔn)的 PCR則可擴(kuò)增出細(xì)胞內(nèi)單拷貝的序列，敏感度很高，但卻未能與細(xì)胞形態(tài)學(xué)研究相結(jié)合。利用該法可檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)病毒感染、細(xì)胞內(nèi)基因重排、以及分析細(xì)胞內(nèi) RNA表達(dá)產(chǎn)物等方面發(fā)揮一定作用。 操作步驟 細(xì)胞或組織的固定 PCR擴(kuò)增細(xì)胞內(nèi)目的片段 原位雜交檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物 人類染色體端粒 DNA的熒光原位雜交照片 8）ＲＴ－ＰＣＲ 逆轉(zhuǎn)錄酶 ＤＮＡ聚合酶 mRNA cDNA 雜化雙鏈 PCR擴(kuò)增 基因 mRNA 蛋白質(zhì)多肽鏈 實(shí)時(shí) PCR技術(shù)原理 PCR技術(shù)的應(yīng)用 1) 基因克隆 重組 DNA 質(zhì)粒 DNA 基因片段 5’ 5’ Bam H I Bam H I Bam H I Bam H I GTCC GGAC CCTG CAGG GTCC GGAC CCTG CAGG CCTG GGAC GTCC CAGG 質(zhì)粒 DNA 目的基因 限制性核酸內(nèi)切酶 2)基因檢測(cè) A’ 內(nèi)源性病變基因 正常人 A 病 人 病原微生物基因 正常人 () 病 人 (+) 遺傳病的診斷 基因缺失、插入或置換等 地中海貧血 珠蛋白鏈合成不平衡 A 正常人 病 人 正常 病人 ASO探針法 A C T G ASO探針 正常 病人 探針雜交 NC膜 探針 正常人 突變純合子 突變雜合子 PCRRFLP法： 限制性內(nèi)切酶 惡性腫瘤（癌基因或抑癌基因） Ras基因 突變 限制性內(nèi)切酶 正常 突變 電泳 HLA系統(tǒng)基因分型 PCRRFLP法 PCRSSO法 PCRSSCP PCRSSP 3)基因配型 PCRSSP 1 2 3 4 5 6 7 8 PCR 1 2 3 4 5 6 7 8 引物特異性 4）基因 鑒定 女性 男性 Y引物 PCR 男性 女性 法醫(yī)學(xué)分析 個(gè)體識(shí)別、親緣鑒定 方法： PCRRFLP DNA遺傳指紋 PCRASO PCRVNTR多態(tài)性 PCRSSCP 線粒體 DNA測(cè)序 PCRVNTR多態(tài)性檢測(cè) PCR；電泳檢測(cè) 父 ’ 父 子 母 現(xiàn) 嫌 1 嫌 2 嫌 3
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