動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體的制備-閱讀頁(yè)
2025-06-01 09:14本頁(yè)面
【正文】 細(xì)胞 骨髓瘤細(xì)胞 細(xì)胞融合 漿 篩選 瘤細(xì)胞 雜交 細(xì)胞培養(yǎng) 選出能產(chǎn)生特定抗體的細(xì)胞群繼續(xù)培養(yǎng) 體外培養(yǎng) 體內(nèi)培養(yǎng) 從培養(yǎng)液或小鼠腹水中取出 單克隆抗體 通過(guò)細(xì)胞融合技術(shù)獲得的雜交瘤細(xì)胞群 產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體。這里的 單克隆 確有 單個(gè)細(xì)胞克隆的含義，只不過(guò) 克隆的 不是 B淋巴細(xì)胞，而是雜交瘤細(xì)胞 。 思考與探究 什么不同？ 植物體細(xì)胞雜交技術(shù)與動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)基本相同， 不同的是植物體細(xì)胞融合前需去掉細(xì)胞壁，然后再融合；動(dòng)物細(xì)胞融合是兩個(gè)體細(xì)胞直接融合。 ，為什么要選用 B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合形成雜交瘤細(xì)胞？ 哺乳動(dòng)物感染抗原后，其體內(nèi)會(huì)形成相應(yīng)的 B淋巴細(xì)胞， B淋巴細(xì)胞能分泌相應(yīng)的抗體凝聚或殺死這些抗原。 B淋巴細(xì)胞具有產(chǎn)生單一抗體的能力，但不能在體外增殖；骨髓瘤細(xì)胞是一種癌細(xì)胞，它能在體外培養(yǎng)條件下無(wú)限增殖，但不能產(chǎn)生抗體。 知識(shí)拓展 間的融合？ 就目前常用的細(xì)胞融合方法來(lái)看，不管是用物理的、化學(xué)的方法，還是生物的方法，其融合率都不可能是 100%。更重要的是，即使兩個(gè)細(xì)胞已發(fā)生融合，但并不一定是研究者期望得到的細(xì)胞類(lèi)型。我們以制備單克隆抗體為例來(lái)說(shuō)明這一問(wèn)題。 知識(shí)拓展 ？ 融合后的細(xì)胞經(jīng)選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)后，能存活的細(xì)胞就是雜交瘤細(xì)胞。將雜交瘤細(xì)胞稀釋?zhuān)枚嗫准?xì)胞培養(yǎng)板培養(yǎng)，使每孔細(xì)胞不超過(guò)一個(gè)，通過(guò)培養(yǎng)讓其增殖。陽(yáng)性孔中的細(xì)胞還不能保證是來(lái)自單個(gè)細(xì)胞，挑選陽(yáng)性孔的細(xì)胞繼續(xù)進(jìn)行有限稀釋?zhuān)话阈柽M(jìn)行 3～ 4次，直至確信每個(gè)孔中增殖的細(xì)胞為單克隆細(xì)胞。 知識(shí)拓展 單倍體（ haploid）是指具有配子染色體數(shù)目的個(gè)體。動(dòng)物中（除蜜蜂、白蟻等外）的單倍體，由于生理上不正常，在胚胎發(fā)育時(shí)期就會(huì)死亡。 除了自發(fā)產(chǎn)生單倍體外，人工誘導(dǎo)產(chǎn)生單倍體的方法有： （ 1）種間和屬間雜交。花粉經(jīng)射線照射或化學(xué)藥品處理失去受精能力，但仍可以刺激卵細(xì)胞發(fā)育成胚； （ 3）雙生苗篩選。單倍體具有很好的應(yīng)用價(jià)值：在植物育種上，單倍體經(jīng)過(guò)加倍可以使后代迅速純合，縮短育種年限；由于單倍體經(jīng)加倍后，在理論上各基因位點(diǎn)應(yīng)處于純合狀態(tài)，對(duì)后代進(jìn)行選擇時(shí)，選擇到的個(gè)體代表著真實(shí)的變異，避免了雜交育種中雜交優(yōu)勢(shì)對(duì)選擇個(gè)體的干擾，提高了選擇效率；用單倍體作為轉(zhuǎn)基因的受體，獲得的轉(zhuǎn)基因材料經(jīng)加倍后基因即可純合，避免了體細(xì)胞作為受體，會(huì)由于后代分離需要多代選擇的麻煩。
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