【正文】 附件 3 核酸擴(kuò)增法檢測(cè)試劑 注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則 一、前言 本指導(dǎo)原則主要針對(duì)核酸擴(kuò)增類檢測(cè)試劑的主要原材料、生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系、產(chǎn)品質(zhì)量控制等環(huán)節(jié)提出指導(dǎo)性技術(shù)要求。 本指導(dǎo)原則是對(duì)申請(qǐng)人和審查人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊(cè)審批所涉及的行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料。 本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制訂的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善、科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，其相關(guān)內(nèi)容也將進(jìn)行適時(shí)的調(diào)整。 三、基本要求 （一）基本原則 《醫(yī)療器械生產(chǎn)許可證》。 2．試劑生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)具有與其技術(shù)要求相適應(yīng)的人員、廠房、設(shè)施和 — 23— 儀器設(shè)備以及適宜的生產(chǎn)環(huán)境，配備滿足核酸提取和擴(kuò)增檢測(cè)以及操作人員防護(hù)所需的設(shè)備。生產(chǎn)用于病原微生物核酸檢測(cè)的生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)建立符合生物安全要求的設(shè)施和措施。 ，擴(kuò)增體系應(yīng)設(shè)定合理的內(nèi)標(biāo)和外標(biāo)，試劑需設(shè)置抗污染的特定措施，擴(kuò)增產(chǎn)物須進(jìn)行確證研究。使用未列入上述標(biāo)準(zhǔn)的化學(xué)試劑，應(yīng)不低于分析純。若主要原材料為企業(yè)自己生產(chǎn)，其生產(chǎn)工藝必須相對(duì)穩(wěn)定；如主要原材料來自市 場(chǎng)（從其他單位購買），應(yīng)提供的資料包括：對(duì)物料供應(yīng)商審核的相關(guān)資料、購買合同、供貨方提供的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、出廠檢定報(bào)告，以及該原材料到貨后的質(zhì)量檢驗(yàn)資料。 核酸類檢測(cè)試劑的包裝材料和耗材應(yīng)無脫氧核糖核酸酶（ DNase）和核糖核酸酶（ RNase）污染。應(yīng)為高效液相色譜（ HPLC）純、 PCR 級(jí)，無 DNase 和 RNase污染。 — 24— 由一定數(shù)量的 dNTP 構(gòu)成的特定序列，通常采用脫氧核糖核酸（ DNA）合成儀人工合成，合成后經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳或其他適宜方法純化。純度應(yīng)達(dá)到電泳級(jí)（ PAGE）或 HPLC級(jí)，不含雜帶。 應(yīng)作 HPLC 分析和紫外光吸收分析。 20℃保存。通常采用 DNA 合成儀人工合成，合成后經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳或其他適宜方法純化，在 539。端 )進(jìn)行標(biāo)記，如熒光素報(bào)告基團(tuán)或其他發(fā)光標(biāo)記物，在 339。 凍干粉，純度應(yīng)達(dá)到 HPLC 純。應(yīng)以可見 — 紫外分光光度計(jì)進(jìn)行 200— 800nm 掃描，在 260nm 處應(yīng)有吸收峰。避光、 20℃保存。應(yīng)具有 DNA 聚合酶活性，無核酸內(nèi)切酶活性；具熱穩(wěn)定性， 94℃保溫 1小時(shí)后仍保持 50%活性。 （ UNG） 具有尿嘧啶糖基化酶活性，無核酸外切酶及核酸內(nèi)切酶活性，IUUNG — 25— 在 37℃處理 3分鐘后， 103拷貝以下含 U模板應(yīng)完全降解，不能產(chǎn)生擴(kuò)增產(chǎn)物。 具逆轉(zhuǎn)錄酶活性，無核酸內(nèi)切酶活性。 （三）生產(chǎn)工藝 核酸擴(kuò)增類檢測(cè)試劑的基本生產(chǎn)工藝通常包括：配制工作液、半成品檢定、分裝和包裝。 工藝研究的資料應(yīng)能對(duì)反應(yīng)體系涉及到的基本內(nèi)容，如樣本類型、樣本用量、試劑用量、反應(yīng)條件、校準(zhǔn)方法、質(zhì)控方法、臨界值的確定、穩(wěn)定性和有效期，提供確切的依據(jù)。 （ 2）以參考品 /對(duì)照品進(jìn)行半成品質(zhì)量控制。如果產(chǎn)品不具有國家標(biāo)準(zhǔn)品或參考品，應(yīng)根據(jù)規(guī)定制備相應(yīng)的企業(yè)參考品，企業(yè)參考品的制備應(yīng)有規(guī)范的質(zhì)量控制程序，以保證產(chǎn)品的安全性、有效性及質(zhì)量可控，其質(zhì)量應(yīng)不低于國家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品的質(zhì)量。檢測(cè)結(jié)果應(yīng)符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的要求。 2.成品質(zhì)量控制 （ 1）每一批核酸擴(kuò)增法檢測(cè)試劑的試生產(chǎn)量應(yīng)滿足工藝研究、分析性能驗(yàn)證、 穩(wěn)定性研究、臨床試驗(yàn)、自測(cè)及注冊(cè)檢驗(yàn)等各階段所需樣品量的要求。（ 3）以參考品 /對(duì)照品進(jìn)行成品質(zhì)量檢驗(yàn)。（ 4）成品檢驗(yàn)的內(nèi)容應(yīng)包括：陰 /陽性參考品符合率、靈敏度、特異性、精密度、線性范圍（定量產(chǎn)品）和穩(wěn)定性。穩(wěn)定性試驗(yàn)可采用加速破壞試驗(yàn)。核酸擴(kuò)增法檢測(cè)試劑是基于核酸擴(kuò)增檢測(cè)技術(shù)的體外診斷試劑，目前已經(jīng)用于病原體檢測(cè)、特定疾病的早期診斷和體內(nèi)物質(zhì)的型別鑒定等不同領(lǐng)域。 本指導(dǎo)原則是對(duì)抗人球蛋白檢測(cè)試劑的一般要求，申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。 本指導(dǎo)原則是對(duì)申請(qǐng)人和審查人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊(cè)審批所涉及的行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制 執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但需要提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料，相關(guān)人員應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。 一、范圍 抗人球蛋白檢測(cè)試劑可進(jìn)行直接抗人球蛋白試驗(yàn)和間接抗人球蛋白試驗(yàn)，主要用于不規(guī)則抗體篩查、交叉配血、抗體致敏紅細(xì)胞的檢測(cè)等。 本指導(dǎo)原則僅包括對(duì)抗人球蛋白檢測(cè)試劑注冊(cè)申報(bào)資料中部分項(xiàng)目的要求，適用于進(jìn)行產(chǎn)品注冊(cè)和相關(guān)許可事項(xiàng)變更的產(chǎn)品。 二、注冊(cè)申報(bào)資料要求 （一）綜述資料 綜述資料的撰寫應(yīng)符合《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告 2021年第 44 號(hào)）（以下簡稱“ 44 號(hào)公告”）的相關(guān)要求。 （二）主要原材料研究資料 主要原材料研究資料應(yīng)包括主 要組成成分（抗體、凝膠、玻璃珠等）的選擇、制備及其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究資料。提供抗體靈敏度、特異性、效價(jià)等基本性能的驗(yàn)證資料。 靈敏度：已知抗體效價(jià)的臨床有意義的血型系統(tǒng)至少 7 種血型抗體（ IgG）的最高稀釋倍數(shù)的凝集強(qiáng)度不小于 1+。 與不規(guī)則抗體陰性樣本檢測(cè)結(jié)果應(yīng)為陰性。 2. 填充物的選擇：說明填充物如凝膠、玻璃珠的特性，如組成、粒徑及其質(zhì)量控制要求。 ：應(yīng)說明組成成分，并對(duì)外觀、性狀、 pH 值等物理指標(biāo)及功能性進(jìn)行研究驗(yàn)證。 （三）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料 ，可用流程圖方式表示，并簡要說明主要生產(chǎn)工藝的確定依據(jù)。 、每一步生產(chǎn)工藝的確認(rèn)資料及試驗(yàn)數(shù)據(jù)。 、每一步反應(yīng)體系的確認(rèn)資料及試驗(yàn)數(shù)據(jù)。如紅細(xì)胞懸液制備要求及紅細(xì)胞濃度的確定、用量的要求、孵育時(shí)間等；應(yīng)提交離心條件的研究資料，建議以離心力或固定離心機(jī)型號(hào)固定轉(zhuǎn)數(shù)和時(shí)間的方式設(shè)置離心條件。有關(guān)分析性能驗(yàn)證的背景信息也應(yīng)在申報(bào)資料中有所體現(xiàn) ，包括實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)（實(shí)驗(yàn)室）、適用儀器、試劑規(guī)格、批號(hào)、臨床樣本來源等。 產(chǎn)品性能研究所采用的各種儀器、試劑或其他物品如可能均應(yīng)采用境內(nèi)或境外已批準(zhǔn)上市的產(chǎn)品，如抗體篩查紅細(xì)胞、血型抗體等。所有試驗(yàn)方法應(yīng)符合配合使用的血型試劑的具體操作要求。 靈敏度 與已知抗體效價(jià)的血型抗體的最高稀釋倍數(shù)的凝集強(qiáng)度不小于 1+，并且抗體效價(jià)不低于試管間接抗人球蛋白法測(cè)定結(jié)果。 特異性 與已知抗體類型的血型抗體對(duì)應(yīng)的 O 型相應(yīng)抗原陽性紅細(xì)胞的反應(yīng)為陽性。 與 C3d陽性或陰性樣本反應(yīng)為陽性或陰性。 批內(nèi)重復(fù)性采用同一批次檢測(cè)卡重復(fù)進(jìn)行檢測(cè)，重復(fù)次數(shù)不少于10 次。 批間重復(fù)性采用至少三批檢測(cè)卡進(jìn)行重復(fù)檢測(cè)。 采用陰性結(jié)果的血清重復(fù) 10次檢測(cè)，均應(yīng)出現(xiàn)陰性反應(yīng)。 血清、血漿比對(duì)的評(píng)估資料。 采用部分臨床樣本進(jìn)行檢測(cè)靈敏度和特異性的評(píng)價(jià)，應(yīng)考慮涵蓋腫瘤、血液病、自身免疫病和貧血患者、老人及兒童等病例來源，應(yīng)包括陽性和陰性病例。 使用被不規(guī)則抗體和 /或 C3d致敏的紅細(xì)胞進(jìn)行反應(yīng)，評(píng)價(jià)產(chǎn)品性能，適用的性能評(píng)價(jià)內(nèi)容可以參照間接抗人球蛋白試驗(yàn)。 （六）穩(wěn)定性研究資料 穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容，申報(bào)試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。 穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實(shí)施方案、詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。 應(yīng)對(duì)樣本穩(wěn)定性進(jìn)行研究，主要包括室溫保存、冷藏和冷凍條件下的有效期驗(yàn)證，可以在合理的溫度范圍內(nèi)選擇溫度點(diǎn)（溫度范圍），每間隔一定的時(shí)間段對(duì)儲(chǔ)存樣本進(jìn)行全性能的分析驗(yàn)證，從而確認(rèn)不同類型樣本的穩(wěn)定性。 試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內(nèi)容的研究結(jié)果應(yīng)分別在說明書【儲(chǔ)存條件及有效期】和【樣本要求】兩項(xiàng)中進(jìn)行詳細(xì)說明。 該類試劑已有同類產(chǎn)品上市，按照法規(guī)要求應(yīng)選擇境內(nèi)已批準(zhǔn)上市、臨床普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的同類產(chǎn)品作為對(duì)比試劑，采用試驗(yàn)用體外診斷試劑（以下稱考核試劑）與之進(jìn)行比較研究試驗(yàn)，證明本品與已上市產(chǎn)品等效。 臨床總病例數(shù)應(yīng)不少于 3000例。應(yīng)包括對(duì)檢測(cè)易產(chǎn)生干擾的病例，盡量選擇多種疾病患者樣本（如腫瘤患者 、自身免疫病患者、血液病患者）、老人、兒童（不同年齡段）等。 在進(jìn)行間接抗人球蛋白檢測(cè)試劑臨床試驗(yàn)的過程中除與對(duì)比試劑進(jìn)行比較外，陽性結(jié)果應(yīng)給出不規(guī)則抗體的具體鑒定結(jié)果。抗體致敏紅細(xì)胞檢測(cè)應(yīng)根據(jù)疾病的種類，分別進(jìn)行臨床試驗(yàn)。 同時(shí)應(yīng)明確配合使用的試劑產(chǎn)品。 對(duì)于 兩種試劑檢測(cè)結(jié)果不一致 [考核試劑與對(duì)比試劑檢測(cè)結(jié)果不一致、與對(duì)比試劑凝集強(qiáng)度差異較大（差異 2 個(gè)凝集強(qiáng)度及以上） ]的樣本，應(yīng)采用臨床上公認(rèn)較好的第三種同類試劑進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn)，同時(shí)應(yīng)給出最終的抗體鑒定結(jié)果。臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)記錄表應(yīng)列明所有病例的具體臨床診斷信息、凝集強(qiáng)度和抗體鑒定結(jié)果，如有不符樣本應(yīng)列明第三方確認(rèn)的結(jié)果。風(fēng)險(xiǎn)分析中應(yīng)充分 考慮到各種可能影響檢測(cè)結(jié)果的因素，如某些樣本（如腫瘤患者、自身免疫病患者、血液病患者等）在進(jìn)行抗人球蛋白檢測(cè)時(shí)可能存在一定的干擾、實(shí)驗(yàn)過程不規(guī)范、有些抗體較弱導(dǎo)致的檢測(cè)結(jié)果不穩(wěn)定等，申請(qǐng)人應(yīng)根據(jù)這些不確定的因素分析產(chǎn)品應(yīng)用可能存在的風(fēng)險(xiǎn)。產(chǎn)品技術(shù) 要求應(yīng)符合《辦法》和“ 44號(hào)公告”的相關(guān)規(guī)定。 產(chǎn)品技術(shù)要求的性能指標(biāo)應(yīng)至少包括靈敏度、特異性、重復(fù)性等。主要原材料應(yīng)明確抗體來源、克隆號(hào)、純度、效價(jià)、特異性以及功能性驗(yàn)證要求，應(yīng)明確填充物來源及主要特征、質(zhì)量控制要求，緩沖液應(yīng)明確組成、 pH 值等特性及質(zhì)控要求。半成品檢定應(yīng)明確半成品的檢驗(yàn)要求及方法。 （十一）產(chǎn)品說明書 說明書承載了產(chǎn)品預(yù)期用途、檢驗(yàn)原理、試驗(yàn)方法、檢測(cè)結(jié)果解釋以及注意事項(xiàng)等重要信息，是指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果給出合理醫(yī)學(xué)解釋的重要依據(jù)，因此，產(chǎn)品說明書是體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)最重要的文件之一。產(chǎn)品說明書的所有內(nèi)容均應(yīng)與申請(qǐng)人提交的注冊(cè)申報(bào)資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持 一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻(xiàn)，則應(yīng)以規(guī)范格式對(duì)此內(nèi)容進(jìn)行標(biāo)注，并單獨(dú)列明參考文獻(xiàn)的相關(guān)信息。 1.【預(yù)期用途】 /或間接抗人球蛋白試驗(yàn)，主要用于不規(guī)則抗體篩查、交叉配血、抗體致敏紅細(xì)胞的檢測(cè)（明確疾病類型）等，同時(shí)明確不用于血源篩查，僅用于臨床檢驗(yàn)。 2.【儲(chǔ)存條件及有效期】 說明試劑的儲(chǔ)存條件及有效期、加速穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性等。 4.【樣本要求】 明確溶血、脂血、黃疸樣本是否可以使用，或提供使用此類樣本的最低要求。 明確適用的抗凝劑的要求。 明確紅細(xì)胞配制使用的 LISS液的生產(chǎn)廠家、規(guī)格、貨號(hào)等內(nèi)容。 6.【檢驗(yàn)方法】 明確配合使用的抗體篩查用紅細(xì)胞的生產(chǎn)廠家、規(guī)格、貨號(hào)等內(nèi)容。如配合其他試劑進(jìn)行試驗(yàn)，需注明試驗(yàn)方法應(yīng)完全符合配合試劑的試驗(yàn)操作要求。 8.【注意事項(xiàng)】 上腔部分或封口處有氣泡或液滴的卡，必須在使用前離心。 在不規(guī)則抗體篩查、交叉配血試驗(yàn)中 LISS 液可以增強(qiáng)抗原抗體的反應(yīng)，應(yīng)嚴(yán)格按產(chǎn)品說明書規(guī)范使用低離子液。 第五篇：孕酮檢測(cè)試劑注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則 附件 3 孕酮檢測(cè)試劑注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊(cè)申請(qǐng)人對(duì)孕酮檢測(cè)試劑注冊(cè)申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時(shí)也為技術(shù)審評(píng)部門審評(píng)注冊(cè)申報(bào)資料提供參考。 本指導(dǎo)原則是供申請(qǐng)人和審查人員使用的指導(dǎo)文件，不涉及注冊(cè)審批等行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如有能夠滿足法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但應(yīng)提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料。 本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo) 原則相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。依據(jù)《體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第 5 號(hào)）、《體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法修正案》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第 30 號(hào)）和《食品藥品監(jiān)管總局關(guān)于印發(fā)體外診斷試劑分類子目錄的通知》（食藥監(jiān)械管〔 2021〕 242 號(hào)），孕酮檢測(cè)試劑管理類別為Ⅱ類醫(yī)療器械，分類編碼 為 6840。 （二）化學(xué)發(fā)光免疫分析法原理之外的其他孕酮檢測(cè)試劑。正常男性和女性卵泡期產(chǎn)生的孕酮水平很低，分泌入血后主要結(jié)合于白蛋白和性激素結(jié)合蛋白在體內(nèi)進(jìn)行循環(huán)。 孕酮的主要功能是使子宮為受精卵的著床做好準(zhǔn) 備，并維持妊娠。排卵之后，由黃體產(chǎn)生的孕酮迅速升高，并在排卵后 5— 7 天達(dá)到濃度最大值 10ng/mL— 20ng/mL，使子宮內(nèi)膜從增生狀態(tài)轉(zhuǎn)為分泌狀