【正文】 WeilFelex反應(yīng)中 ， 血清與 OX，抗原發(fā)生凝集而不與 OX1 OX2發(fā)生凝集 。 (2)PCR： 可檢出 20ng恙蟲(chóng)病立克次體 DNA； 套式 PCR法可檢出 200pg， 是目前最為快速 、 特異 、 敏感的實(shí)驗(yàn)室診斷方法 ， 可用于急性期患者的早期診斷 。 (3)分離培養(yǎng) 接種小鼠分離病原 。 也可接種Vero細(xì)胞 、 L929細(xì)胞進(jìn)行立克次體分離培養(yǎng) 。 (4)抗體檢測(cè) ? 外斐試驗(yàn)：臨床血清學(xué)診斷方法 ， 血清抗體 OXk效價(jià)達(dá) l： 160以上有意義 ， 病程中雙份或多份血清試驗(yàn) ， 若效價(jià)有 4倍增高 ， 有診斷意義 。 ? 免疫熒光試驗(yàn)：快速敏感特異 ， 可分別檢測(cè)患者血清中的抗恙蟲(chóng)病立克次體 lgG、IgM抗體 ， 效價(jià)在 1： 80以上有診斷意義 。 四、貝納柯克斯體 ? 又稱 Q熱立克次體 ， 是引起 Q熱 (疑問(wèn)熱 ， 指最初不明病因的發(fā)熱 )的病原體 。 ? Q熱除有發(fā)熱 、 頭痛及肌肉痛外 ， 以出現(xiàn)肺炎和肝炎為其臨床特征 。 （一）微生物特性 個(gè)體較小 ， 多為短桿狀 ， 常排列成對(duì) ， Gimenez法染色呈紅色 ， 背景呈綠色 ，用 Giemsa法染色呈紫紅色 。 基因組分子量為大腸桿菌的 1／ 3；編碼代謝酶 、 表面抗原與毒力因子有關(guān)基因 。 3．培養(yǎng)特點(diǎn) 雞胚是培養(yǎng)的極好宿主 。 一般不引起明顯的細(xì)胞病 變 。 ? 1%福爾馬林作用 24小時(shí)也不能完全滅活。 (二 )微生物檢驗(yàn) (1)標(biāo)本直接抗原檢測(cè)：免疫熒光法進(jìn)行檢測(cè) 。 用貝納柯克斯休質(zhì)粒 DNA片段制備的探針 ，不僅能快速檢出病原體 ， 且能鑒別含 QpHI或 QpRS質(zhì)粒分離株 ， 與呼吸道感染病原體DNA無(wú)交叉反應(yīng) 。 3．分離培養(yǎng) ? 病原體分離只是在該地區(qū)尚未證明有 Q熱存在，病情特別嚴(yán)重有必要。 4．抗體檢測(cè) 用間接免疫熒光試驗(yàn) 、 ELISA和 CF試驗(yàn) 。 五、埃立克體 (一 )臨床意義為埃立克體病病原體 。 臨床表現(xiàn)為發(fā) 熱頭痛 、 淋巴細(xì)胞數(shù)增加 ， 并出現(xiàn)非典 型淋巴細(xì)胞 。 傳播媒介 為蜱 。 硬蜱是傳播媒介 。 （ 二）微生物特性 1． 為 G小球菌 ， 呈多形性 ， Romanows染 色呈蘭色和紫色 。 稱為桑 椹體 。 人粒細(xì)胞埃立 克體的外膜蛋白 44kDa蛋白被克隆 ， 可用 作探針 。 (三 )微生物檢驗(yàn) 采集病人的外周血制備血片 ， 經(jīng) Giemsa或 Wright染色 ， 在光鏡下發(fā)現(xiàn)粒細(xì)胞及單核細(xì)胞質(zhì)或血小板內(nèi)有圓形 、 深紫色的桑椹體 ， 可作為急性期埃立克體病的一種簡(jiǎn)便和有效的輔助診斷方法 。大約 80％ 87％ HME和 43％ 75％的 HGE患者的血標(biāo)本被 PCR檢測(cè)為陽(yáng)性?？捎?16SrRNA基因設(shè)計(jì)引物或做基因探針。 ? 查菲埃立克體可用犬巨噬細(xì)胞系 (DH82)， 腺熱埃立克體用小鼠的巨噬細(xì)胞系 (P388D1)，人粒細(xì)胞埃立克體則用人的粒細(xì)胞白血病細(xì)胞系 (HL60)作它們的體外培養(yǎng)的宿主細(xì)胞 。 從蜱體內(nèi)分離埃立克體讓蜱叮咬小鼠和吸血。觀察小鼠發(fā)病。 (1)間接免疫熒光 (1FA)： 將感染血清作倍比稀釋 ， 加入抗原孔內(nèi) ， 置濕盒 37℃ 孵育 lh； 玻片沖洗后 ， 用 Evans藍(lán)作背景染色 ， 然后每孔加一滴固 定液 ， 加蓋玻片 ， 在熒光顯微鏡下檢查感 染細(xì)胞內(nèi)的帶熒光的包涵體 ， 通常血清中 抗體滴度 1： 20為陽(yáng)性 。 (2)免疫印跡 采用免疫印跡檢測(cè)埃立克體病患者血清 中抗埃立克體主要抗原組分的抗體 ， 可 以改善血清學(xué)檢測(cè)的特異性 。 但不能用于埃立克體病的早期診斷 。 常在免疫缺陷病毒 (HIV)感染者發(fā)生 ， 也感染有免疫潛能的人群 ， 與接觸貓有關(guān) 。 ? 貓抓病有與貓接觸史 ， 抓咬部位形成丘疹膿皰 ， 繼而出現(xiàn)淋巴結(jié)腫大 ， 約 10％病例有肉芽腫性結(jié)膜炎 、 骨質(zhì)溶解 、 肺炎及中樞神經(jīng)系統(tǒng)損害等 。 與貓抓傷咬傷有關(guān) ，主要表現(xiàn)為皮膚損害和內(nèi)臟發(fā)生紫癜 。 開(kāi)始皮膚出現(xiàn)紅丘疹 ， 偶有潰瘍 。 ? 桿菌性血管瘤可發(fā)生在任何實(shí)質(zhì)性器官 ，很難與分枝桿菌和真菌感染或惡性腫瘤鑒別 。 2． 培養(yǎng)特性 營(yíng)養(yǎng)要求苛刻的需氧桿菌 ， 用 含新鮮血的瓊脂或腦心浸液于 35℃ 5％ C02環(huán)境下培養(yǎng) 2— 5周才長(zhǎng)出灰色凸起 并嵌入瓊脂內(nèi)的菌落 。 已經(jīng)測(cè)序的基因 有 16SrRNA和 glt A基因序列包括 1293 核苷酸 ， 始于 ATG起始密碼子 ， 終于 兩 TAA終止密碼子 。 2. 核酸檢測(cè) 依 16S rRNA或 gltA基因設(shè)計(jì)引物，對(duì)臨床標(biāo) 本作 PCR， 其擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)序列測(cè)定或用特異 性 DNA探針鑒定，可直接作出病原診斷。于培養(yǎng) 1周仍不見(jiàn)生 長(zhǎng)，應(yīng)繼續(xù)培養(yǎng)至 4周。 (2)ELISA： 用 17KD重組體抗原作 ELISA檢測(cè) 人血清抗體 IgG， 有助于診斷 。 第二節(jié) 衣 原 體 ? 是一類專性細(xì)胞內(nèi)寄生、有獨(dú)特發(fā)育周期、能通過(guò)細(xì)菌濾器的原核細(xì)胞型微生物。 ? 衣原體科包括沙眼衣原體、肺炎衣原體、鸚鵡熱衣原體和家畜衣原體等四種。 ? 近年沙眼衣原體的感染率和危害性已超過(guò)淋球菌而居性傳播疾病之首，因而日益受到醫(yī)學(xué)界的重視。 1．沙眼亞種 (1)沙眼： 通過(guò)眼 手 眼途徑直接或間接密切接觸傳 播 。 結(jié)膜引 起局部炎癥 。 后期出現(xiàn)瘢痕 及角膜血管翳 ， 影響視力 。 嬰兒通過(guò) 產(chǎn)道感染 ， 引起濾泡性結(jié)膜炎 ， 不出現(xiàn)角 膜血管翳 。在性接觸傳播引起的 非淋菌性泌尿生殖道感染（ 50％ — 60％）。 ，由 L血清型引起性病淋巴肉芽腫。 ，不侵犯人，與鼠肺炎有關(guān)。①原體是細(xì)胞外存在形式，卵圓形，有胞壁和擬核 , 是發(fā)育成熟的衣原體，具有高度感染性，能吸附于易感細(xì)胞特異受體，增大形成網(wǎng)狀體；②網(wǎng)狀體或稱始體，圓形，二分裂增殖為繁殖型，無(wú)感染性。 抗原結(jié)構(gòu) 復(fù)雜 ， 有屬 、 種 、 型等特異性抗原 。 (2)種特異性抗原：位于主要外膜蛋白 （ MOMP） 上 ， 可用補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)和中和 試驗(yàn)檢測(cè) 。 培養(yǎng)特性 ? 沙眼衣原體專性活細(xì)胞內(nèi)寄生，用 6— 8d齡雞胚卵黃囊及各種傳代細(xì)肋培養(yǎng)。 ? 近年多采用細(xì)胞培養(yǎng)衣原體 ， 常用的細(xì)胞株為 Hela299和 McCoy。 70℃可保存數(shù)年，冷凍干燥可保存 30年以上仍有活性。 ? 紅霉素、四環(huán)素、強(qiáng)力霉素或青霉素對(duì)衣原體有抑制作用。 性病淋巴肉芽腫：采淋巴結(jié)膿汁 ， 也可取直腸拭子或活檢材料送檢 。 免疫學(xué)方法 1)免疫熒光檢查：用熒光抗體檢測(cè)上皮細(xì)胞內(nèi)衣原體抗原 。 可在 1h內(nèi)即作出診斷并可分型 。 核酸檢測(cè) 1)核酸雜交：用 125I標(biāo)記的衣原體 rDNA探針檢測(cè)宮頸標(biāo)本的敏感性和特異性 ， 與培養(yǎng)相比分別為 ％ 和 ％ 。一般按沙眼衣原體 7． 5kb質(zhì)粒、 MOMP序