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基因工程與體外表達(dá)-在線瀏覽

2024-10-22 20:46本頁(yè)面
  

【正文】 和Charon系列等。這兩個(gè)載體都屬插入型載體,能克隆 7kb以下的外源 DNA。 16 (三 ) M13噬菌體 (M13 phage) 一種大腸桿菌雄性特異絲狀噬菌體 。 復(fù)制型M13可用作克隆載體 。 其克隆容量可達(dá) 40~ 50 kb。 多數(shù)病毒載體均已質(zhì)?;?, 病毒載體質(zhì)粒主要由病毒啟動(dòng)子 、 包裝元件 、 選擇性遺傳標(biāo)記 ,以及 pBR322的復(fù)制子組成 。 21 multiple cloning site 22 (二 ) 真核表達(dá)載體 含有原核復(fù)制起始位點(diǎn)、抗生素抗性基因 . 還含有真核表達(dá)元件 ,包括啟動(dòng)子、增強(qiáng)子、克隆位點(diǎn)、 轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)和 poly (A) 加尾信號(hào) . 23 第三節(jié) 基因克隆的基本過(guò)程 基因克隆主要步驟: ①制備目的基因和選擇相關(guān)載體 ②目的基因和有關(guān)載體進(jìn)行連接 ③重組的 DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞 ④ DNA重組體的篩選和鑒定 ⑤ DNA重組體的擴(kuò)增、表達(dá)和其他研究 24 (二)從 cDNA文庫(kù)中獲得 (三) PCR擴(kuò)增特定基因 (四)人工合成 一、 目的基因的獲得 (一)從基因組文庫(kù)中獲得 25 幾種常用克隆載體的比較 注: +表示可用; 表示不可用 比較內(nèi)容 質(zhì) 粒 λ噬菌體 黏性質(zhì)粒 M13噬菌體 克隆容量 10 kb 22 kb 40~ 50 kb 1 kb 基因組 DNA文庫(kù) + + cDNA文庫(kù) + + 亞克隆 +
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