日本沼蝦卵巢表達(dá)序列標(biāo)簽分析及生殖相關(guān)基因的克隆與表達(dá)-在線瀏覽
2024-09-14 16:58本頁(yè)面
【正文】 分離獲得了7個(gè)與卵母細(xì)胞形成、成熟有關(guān)的基因,并對(duì)其序列特征和時(shí)空表達(dá)進(jìn)行了系統(tǒng)地分析。隨機(jī)挑取文庫(kù)中3294個(gè)克隆進(jìn)行5’3’端測(cè)序,獲得了3256條高質(zhì)量的表達(dá)序列標(biāo)簽(ESTs),拼接后得到了1514條單基因簇,%。此外,在構(gòu)建的文庫(kù)中還發(fā)現(xiàn)了與皮質(zhì)棒形成密切相關(guān)的圍食膜因子,預(yù)測(cè)在成熟卵缺少皮質(zhì)棒結(jié)構(gòu)的沼蝦屬種類中,這種基因同樣存在。日本沼蝦DExDbox家族基因的分子克隆、特征分析及時(shí)空表達(dá)根據(jù)ESTs提供的信息,結(jié)合同源克隆策略,采用RACE技術(shù)成功克隆了以vasa為代表的DExDbox家族4個(gè)基因的全長(zhǎng)cDNA序列。其中PL10基因的RNA存在選擇性剪接,得到MnPL10A、MnPL10B兩種轉(zhuǎn)錄本,兩者cDNA全長(zhǎng)分別為2277和2649bp,開(kāi)放閱讀框分別編碼485和709個(gè)氨基酸的蛋白,前者比后者在N端缺少224個(gè)氨基酸。RTPCR的研究結(jié)果表明,Mnvasa基因僅在日本沼蝦性腺中表達(dá),并且在卵巢發(fā)育的增殖期表達(dá)量最高,此后隨著發(fā)育進(jìn)程逐漸下降,至消退期下調(diào)至最低。它們?cè)诼殉舶l(fā)育中的表達(dá)模式基本相似,都表現(xiàn)為消退期降至最低、次級(jí)卵黃發(fā)生期上調(diào)至最高。Mnvasa、MnPLMnp68和PutativeMnDDX39基因在結(jié)構(gòu)上高度保守,這些保守結(jié)構(gòu)的存在保證了其功能的實(shí)施。日本沼蝦成熟促進(jìn)因子(MPF)組成亞基基因的分子克隆、特征分析及時(shí)空表達(dá)成熟促進(jìn)因子(MPF)由調(diào)節(jié)亞基周期蛋白B(cyclinB)和催化亞基細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶(p34~(cdc2))構(gòu)成。MncyclinB具有989bp偏長(zhǎng)的3’UTR,其中集中了包括2個(gè)多聚腺苷酸加尾信號(hào)、5個(gè)胞質(zhì)聚腺苷化元件(CPEs)、1個(gè)翻譯調(diào)控元件(TCE)和1個(gè)Kbox在內(nèi)的多種調(diào)節(jié)元件。進(jìn)一步的多序列比對(duì)和同源性分析表明日本沼蝦MncyclinB和斑節(jié)對(duì)蝦、日本囊對(duì)蝦、鋸緣青蟹、中華絨螯蟹cyclinB的同源性分別為69%、68%、60%和60%,系統(tǒng)進(jìn)化分析證明MncyclinB基因在進(jìn)化上
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