【正文】 （6）在研磨提取葉綠素時為什么向研缽中加入少量石英砂和CaCO3？（7）在強光下提取葉綠素對測定結(jié)果會有什么樣的影響？為什么？ （8）在用分光光度計測定葉綠素提取液的光密度時，為什么要用80%丙酮將儀器的透光率調(diào)到100%？如果用蒸餾水調(diào)100%對測定數(shù)據(jù)會有什么影響？（9）為什么在測定時需要洗凈比色皿？洗凈的比色皿在倒入提取液時為什么還要用提取液洗23遍？（10）在使用分光光度計時，為什么每改變一次波長，就需要重新調(diào)零和調(diào)透光率100%？（11）什么是吸光系數(shù)？在本實驗中葉綠素的吸收系數(shù)的單位是什么？（12）為使不同時間測定的數(shù)據(jù)具有可比性，你認為需要控制什么環(huán)境條件？為什么？（12） 寫出實驗時間按排和操作流程圖。[實驗后思考題（挑戰(zhàn)題）]（1）葉片中的類胡蘿卜素和花色素是否影響葉綠素含量測定？為什么？（2）如果你不知道葉綠素的吸收系數(shù)，但有葉綠素的純品，如何測定樣品中的葉綠素含量？（3）根據(jù)你所掌握的知識，如何提純?nèi)~綠素？如何檢驗葉綠素的純度？（4）能否根據(jù)物品上的綠色殘跡分析出植物的種類？為什么？（5）如果實驗室中沒有我們通常用的厚度為1cm的比色杯，若用其測定葉綠素含量，在結(jié)果計算時需要用對計算公式做何種改變？（6）比較你用波長652nm、波長645nm以及663nm測定的葉綠素總量，是否有差異？若有差異分析其原因？Section 3（6h）三、植物組織水勢測定小液流法植物的水分代謝包括植物體從外界吸收水分、植物體內(nèi)水分運轉(zhuǎn)以及植物通過表面向外界散失水分。水勢是以壓力單位表示的水的化學(xué)勢，代表水的能量水平。因此水勢是研究植物與環(huán)境的水分關(guān)系的重要指標(biāo)。水勢的測定有多種方法，可分為氣態(tài)平衡法和液態(tài)平衡法。小液流法亦稱比重法或著色法，是水勢測定的最經(jīng)典方法之一。 [原理]水的流向是：是從高的勢流向低的勢（人往高處走水往低處流） 在恒溫恒壓下，由植物組織與外界溶液組成的體系的水勢包含有植物組織的水勢和溶液的滲透勢。同一種溶液濃度不同，比重亦不同。當(dāng)把浸過植物組織的溶液滴回到原濃度的溶液中時，液滴會發(fā)生下降、上升或基本不動幾種情況。浸泡液的滲透勢依據(jù)范特荷夫公式計算： Ψπ ＝一iCRT式中：Ψπ為滲透勢，單位為MPa；i為范特荷夫系數(shù)或等滲系數(shù)，；C為浸泡液的摩爾濃度；R是理想氣體常數(shù)，；T是絕對溫度。2．儀器：(1) 5ml試管8支；(2) 10ml刻度試管8支；(3) 細滴管8~10支；（4）移液管8支；(5) 試管架1個；(6) 打孔器( cm2左右)1個或刀片1個；(7) 鑷子、解剖針、濾紙。L1。2．配制不同濃度的蔗糖溶液：測定植物組織水勢時所用的溶液，一般最常用的是蔗糖溶液。為簡便，亦可用純CaCl2溶液。取潔凈干燥的10ml刻度試管8支編號（甲組），、按下表配制不同濃度的蔗糖溶液。蔗糖系列濃度溶液配制試管號123456781mol蔗糖加入量ml12345678加蒸餾水量ml98765432蔗糖濃度mol/L 3．準(zhǔn)備浸泡液：取潔凈干燥的5ml試管8支編號（乙組），~ mol的蔗糖溶液1ml，分別加入乙組的各個試管中，蓋上蓋防止蒸發(fā)，放到試管架上，做為浸泡液。所有葉片放在一起，分別放入浸泡試管（乙組）中，每個試管中的葉切段數(shù)量要一致，并且每個試管中來自每個葉片的切段數(shù)量相同，以保證各個試管中的樣品水勢盡可能的一致，將葉片切段全部浸沒在溶液中，蓋上蓋子。 6．平衡情況檢測：葉切段浸泡30min后，用解剖針分別放入少許甲烯藍粉末在乙組每個試管中，使溶液著色，但甲烯藍粉末不宜加過多。用細滴管吸取有色溶液少許，插入相應(yīng)濃度的甲組試管中，使滴管尖端位于溶液中部，然后輕輕擠出1小滴有色溶液，小心抽出滴管(注意勿攪動溶液)，放回相應(yīng)的浸泡試管中。如果有色液滴下降，則說明葉片組織吸水，葉片組織的水勢小于該濃度溶液的滲透勢；如果有色液滴上升，表示浸過組織的溶液濃度變小(即植物組織中有水分排出)，說明葉片組織的水勢大于該濃度溶液的滲透勢；如果有色液滴靜止不動，說明葉片組織與外液的水分交換達到動態(tài)平衡，葉片組織的水勢等于該濃度溶液的滲透勢；如果在前一濃度中下降，而在后一濃度中上升，則植物組織的水勢取兩種濃度溶液滲透勢的平均值。[實驗結(jié)果記錄]1．實驗材料：植物名稱：種植地點：發(fā)育時期：試驗處理：植物的生長狀況：取樣時間：取樣部位及數(shù)量：2．測定地點：3．測定時間： 年 月 日 時 分 至 時 分4．測定條件記錄 5．實驗數(shù)據(jù)記錄有色浸泡液小滴在原濃度溶液中的運動情況記載液滴表現(xiàn)蔗糖濃度 mol/L樣品水勢MPa鹽處理對照液滴表現(xiàn)為上升、靜止不動或下降，用“↑”“―”“↓”表示。(4) 從理論上講，浸泡液的濃度變化還可以用何種方法檢測？請說明原理。在植物營養(yǎng)和環(huán)境生理研究中常需測定根系活力。 [原理] 根據(jù)沙比寧等的理論，認為植物根系對溶質(zhì)吸收最初具有吸附的特點，并假定此時被吸附物質(zhì)是以單分子層形式均勻地覆蓋在根系表面，因此可以根據(jù)根系對某種物質(zhì)的吸附量來測定根的吸收面積。據(jù)此可求出根系的總吸收面積。從后一個吸收量求出活躍吸收面積，可作為根系活力的指標(biāo)。 2．儀器：(1) 分光光度計；(2) 小燒杯6個；(3) 吸水紙；(4) 10或25ml量筒1個(依根系大小而定)；(5) 移液管lml和10ml各1支；(6) 10ml試管16支；（7）試管架1個。[方法] 1．繪制甲烯藍溶液的標(biāo)準(zhǔn)曲線：取7支試管，編號，按下表配制標(biāo)準(zhǔn)溶液。然后，以甲烯藍系列濃度為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。3．測定根系活力：（1）取3個小燒杯編號，（每杯中溶液量約10倍于根系的體積），分別加入到3個10ml試管中，稀釋15倍，混勻，在660nm下測定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線中查出對應(yīng)的濃度。（2）從量筒中取出根系，用濾紙把水吸干，勿傷根系。 （3）從上述浸過根系的3個小燒杯中，分別取出甲烯藍溶液lml，分別放入三支試管中，稀釋10倍，搖勻，用分光光度計在660nm波長下讀取吸光度。 4．結(jié)果計算：測定數(shù)據(jù)填入表3—6，并按下列公式求出根的吸收面積。寒冷、干旱、高溫、鹽堿等是常見的自然災(zāi)害，隨著現(xiàn)代工業(yè)的發(fā)展，又出現(xiàn)了大氣、土壤和水體污染等災(zāi)害。這些不良的環(huán)境條件統(tǒng)稱為逆境，它對植物的生理過程和生長發(fā)育可造成各種危害，輕則生長發(fā)育不良，重則絕產(chǎn)或死亡。因此，研究植物在逆境條件下的生理反應(yīng)及其忍耐或抵抗能力，采取有效措施提高植物的抗逆性，對于進一步發(fā)展農(nóng)業(yè)生產(chǎn)，具有十分重要的意義。其中一些已在理論研究和生產(chǎn)實踐中得到了普遍的承認和廣泛的應(yīng)用。[原理] 細胞膜不僅是分隔細胞質(zhì)和胞外環(huán)境的屏障，而且也是細胞與環(huán)境發(fā)生物質(zhì)交換的主要通道，又是細胞感受環(huán)境變化刺激的部位。各種逆境傷害都會造成質(zhì)膜選擇透性的改變或喪失，例如低溫、冰凍、干旱脫水等導(dǎo)致的細胞膜機械損傷以及逆境和衰老過程中的膜脂過氧化作用，都可以增大細胞膜通透性。當(dāng)質(zhì)膜的選擇透性因逆境傷害而明顯改變或喪失時，細胞內(nèi)的物質(zhì)(尤其是電解質(zhì))大量外滲，從而引起組織浸泡液的電導(dǎo)率發(fā)生變化，通過測定外滲液電導(dǎo)率的變化，就可反映出質(zhì)膜的傷害程度和所測材料抗逆性的大小。 [材料、儀器、藥品]1．材料：菠菜或其他植物葉片。 ， 3．藥品：(1) 洗液；(2) 去污粉；(3) 無離子水。玻璃用具和打孔器先用去污粉(或洗液)清洗，再分別用自來水、無離子水沖洗數(shù)遍，然后放入(或倒置在)洗凈且墊有潔凈濾紙的瓷盤中，并用蓋子或潔凈紗布蓋好。先用自來水沖洗除去表面的污物，再用無離子水清洗葉片，然后用潔凈濾紙將葉表面的水分輕輕吸干。3．材料的環(huán)境脅迫處理：取15枚綠葉和15枚黃葉各分為3 組，即3 次重復(fù)，放入洗凈且墊有潔凈濾紙的瓷盤中，加蓋，置于35℃ 進行高溫處理。剩余的15枚綠葉和15枚黃葉也各分為3 組，即3 次重復(fù)，放入洗凈且墊有潔凈濾紙的瓷盤中，加蓋，置于室溫下，作為對照。打取20個小圓片，分別放入不同的試管中。(為測無離子水的本底，可先在小燒杯中加水測定電導(dǎo)率后再加入葉片)。自然浸泡需要2~4h以上，為防止葉片表面氣泡的影響和縮短浸泡時間，可在振蕩器上浸泡1—2小時，也可將樣品放人真空干燥器中，反復(fù)抽氣放氣2—4次后，真空()滲入1020分鐘min，再浸泡30min。期間要不斷搖動。（2）電導(dǎo)率測定：在測定前先將各個試管中的浸泡液上下攪拌或搖勻再測定電導(dǎo)率值。記錄電導(dǎo)率。 5．結(jié)果計算：目前電解質(zhì)的外滲量有多種方法表示。 浸泡液電導(dǎo)率值煮沸后電導(dǎo)率值電解質(zhì)滲出率（%）= 100浸泡液電導(dǎo)率值—本底電導(dǎo)率值煮沸后電導(dǎo)率值—本底電導(dǎo)率值電解質(zhì)滲出率（%）= 100處理電導(dǎo)率值—對照電導(dǎo)率值處理煮沸后電導(dǎo)率值—對照電導(dǎo)率值傷害率（%）= 100 [實驗結(jié)果記錄]1．實驗材料：植物名稱：種植地點：發(fā)育時期：試驗處理：植物的生長狀況：取樣時間：取樣部位及數(shù)量：2．測定地點：3．測定時間： 年 月 日 時 分 至 時 分4．測定條件記錄：5．實驗數(shù)據(jù)記錄及結(jié)果記載：見表16．其他問題記載：[實驗前思考題]（1）通過植物外滲電導(dǎo)率測定你能夠解決什么理論和實踐問題？（2）說明植物抗逆性的生理意義以及抗逆性鑒定的重要性？（3）請簡述各種植物抗逆性鑒定方法的基本原理？比較各種方法的優(yōu)缺點？（4）在測定電導(dǎo)率時為什么用無離子水浸泡樣品？（5）在測定植物電導(dǎo)率時為什么需要洗凈所有用具（燒杯、刀片等）？（6）為什么要用無離子水洗凈植物材料并用潔凈吸水紙吸干?（7）為什么電極在每次測定之后都要有無離子水洗凈并吸干？（8）將樣品浸入無離子水中測電導(dǎo)率前為什么要抽真空？ （9）在煮沸樣品時什么要加蓋？（10）煮沸的樣品為什么要降到室溫后才能測定電導(dǎo)率？（11）測定電導(dǎo)率時為什么先將是量程放在最大然后才逐漸降低測定范圍？（12）在使用電導(dǎo)率儀時為什么高周和低周互換時需要重新調(diào)滿度？（13）為使不同時間測定的數(shù)據(jù)具有可比性，你認為需要控制什么環(huán)境條件？為什么？（15）寫出實驗時間按排和操作流程圖[實驗后思考題（挑戰(zhàn)題）]（1）在測定植物組織外滲電導(dǎo)率時，有時會發(fā)現(xiàn)處理電導(dǎo)率比對照低的現(xiàn)象，試解釋之？（2）利用外滲電導(dǎo)率測定方法還可以測定什么生理指標(biāo)？為什么？1 外滲電導(dǎo)率記錄樣品處理重復(fù)浸泡液本底電導(dǎo)率值浸泡液電導(dǎo)率值煮后電導(dǎo)率值相對電導(dǎo)率%傷害率%綠葉高溫處理123平均標(biāo)準(zhǔn)差室溫對照123平均標(biāo)準(zhǔn)差黃葉高溫處理123平均標(biāo)準(zhǔn)差室溫對照123平均標(biāo)準(zhǔn)差六、植物組織丙二醛含量測定植物葉片在衰老過程中發(fā)生一系列生理生化變化，如核酸和蛋白質(zhì)含量下降、葉綠素降解、光合作用降低及內(nèi)源激素平衡失調(diào)等。近來大量研究表明，植物在逆境脅迫或衰老過程中，細胞內(nèi)活性氧代謝的平衡被破壞而有利于活性氧的積累?；钚匝醢ê踝杂苫?。生物體內(nèi)產(chǎn)生的活性氧主要有超氧自由基(O2)、羥自由基(OH)、烷氧自由基(RO植物對活性氧產(chǎn)生有酶促和非酶促兩類防御系統(tǒng)，超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)、過氧化物酶POD和抗壞血酸過氧化物酶(ASA—POD)等是酶促防御系統(tǒng)的重要保護酶，抗壞血酸(ASA)和還原型谷胱甘肽(GSH)等是非酶促防御系統(tǒng)中的重要抗氧化劑。因此，丙二醛產(chǎn)生數(shù)量的多少能夠代表膜脂過氧化的程度，也可間接反映植物組織的抗氧化能力的強弱。 [原理] 植物組織中的丙二醛(MDA) 在酸性條件下加熱可與硫代巴比妥酸(TBA) 產(chǎn)生顯色反應(yīng)，反應(yīng)產(chǎn)物為粉紅色的3，5，5一三甲基惡唑2，4一二酮(Trimet—nine)。由于硫代巴比妥酸也可與其他物質(zhì)反應(yīng)，并在該波長處有吸收，為消除硫代巴比妥酸與其他物質(zhì)反應(yīng)的影響，在丙二醛含量測定時，同時測定600nm下的吸光度，利用539nm與600nm下的吸光度的差值計算丙二醛的含量。 2．儀器：(1) 分光光度計；(2) 離心機；（3）水浴鍋：(4) 天平；(5) 研缽；(6) 剪刀；(7) 5ml刻度離心管；(9) 刻度試管(10ml)；(10) 鑷子；(11) 移液管(5ml、2ml、1ml)；（12）冰箱。 [方法] 1．丙二醛的提?。?，加入少量石英砂，在經(jīng)過冰浴的研缽內(nèi)研磨成勻漿，轉(zhuǎn)移到5ml刻度離心試管，將研缽用緩沖液洗凈，清洗也移入離心管中，最后用緩沖液定容至5ml。上清液即為丙二醛提取液。于4500轉(zhuǎn)/min離心10min。 3．結(jié)果計算：(A532—A600)