【正文】 為 卵子 （egg）。 （ 2）利用一微針頭將停滯在第二次減數(shù)分裂中期的卵細(xì)胞的胞漿 5%轉(zhuǎn)移到另一個(gè)處于 G2停滯期的 卵母細(xì)胞 ，促進(jìn)這個(gè) 卵母細(xì)胞 發(fā)育成熟。MPF: 卵細(xì)胞促成熟因子 (maturationpromoting factor), 分離純化出 MPF：? 直到 1988年， Maller實(shí)驗(yàn)室的 Lohka等人才以 非洲爪蟾 為材料，分離得到了微克級(jí)的純化的 MPF。二者結(jié)合后表現(xiàn)出蛋白激酶活性，可以使多種蛋白質(zhì)底物磷酸化。Ⅱ p34cdc2激酶的發(fā)現(xiàn)及其與 MPF的關(guān)系：? 另一批生物學(xué)家以 酵母 為材料，從另一個(gè)側(cè)面對(duì)細(xì)胞周期調(diào)控進(jìn)行著深入研究 .? 如： ；? 如： 以裂殖酵母為實(shí)驗(yàn)材料。其表達(dá)產(chǎn)物是一種相對(duì)分子量為 34103的蛋白，被稱為 p34cdc2。 ? 芽殖酵母 中發(fā)現(xiàn)的 cdc28基因是第二個(gè)被分離出的 cdc基因，其表達(dá)產(chǎn)物也是一種相對(duì)分子量為34103的蛋白，被稱為 p34cdc28。? 這些與細(xì)胞分裂和周期調(diào)控有關(guān)的基因被稱為 (cell division cycle) cdc基因，根據(jù)被發(fā)現(xiàn)的先后順序被命名。? p34cdc2與 p34cdc28是同源物。 ）? 進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)： p34cdc2或 p34cdc28本身并不具有激酶活性，只有當(dāng)其與有關(guān)蛋白結(jié)合后，其激酶活性才能夠表現(xiàn)出來(lái)。? 在研究酵母的同時(shí)，以 Tim Hunt為代表的另一批科學(xué)家正在以海膽卵為材料，對(duì)細(xì)胞周期調(diào)控進(jìn)行著深入研究。 因此稱這兩種蛋白為細(xì)胞周期蛋白 (cyclin)。? Maller＋ Hunt合作證明： MPF中的另一種成分是 周期蛋白 B。周期蛋白 B: Cyclin BCyclin B的性質(zhì)? P468實(shí)驗(yàn)：卵提取物影響精子染色質(zhì)的周期改變。（ 3）當(dāng) RNA酶處理卵提取物 + 野生型 cyclinB mRNA，精子染色質(zhì)的周期重現(xiàn)。但有絲分裂晚期事件染色體去致密化和核膜形成都不發(fā)生。卵提取物中 Cyclin? Cyclin B的降解：Cyclin B的 N端含有 destruction box， C端有 Lys殘基。泛素： E1 泛素激活酶： uniquitinactivating enzyme E2泛素結(jié)合酶 : ubiquitinconjugating enzyme E3泛素連接酶： ubiquitin ligase細(xì)胞分裂后期促進(jìn)復(fù)合物 （ anaphase promoting plex, APC）MPF (CDC2+ cyclinB ) 活性在分裂中期達(dá)到高峰。Cyclin B在細(xì)胞周期中連續(xù)合成，但是在有絲分裂的間期活性升高，在有絲分裂晚期 突然下降 。Hartwell、英國(guó)人 PaulHunt因?qū)?xì)胞周期調(diào)控機(jī)理的研究而榮獲諾貝爾生理醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)MPF = p34cdc2 + cyclinB細(xì)胞周期調(diào)控的主要分子機(jī)制? 細(xì)胞周期的內(nèi)源性調(diào)控主要是通過(guò) “CyclinsCDKsCKIs”這一調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。–CDKs周期蛋白 cyclins：? 自 1983年首次發(fā)現(xiàn)周期蛋白后，許多科學(xué)家紛紛開展周期蛋白研究，短短 10年就從各種生物中克隆分離了數(shù)十種周期蛋白，如酵母的 Cln ClnCln Clb1Clb6，高等動(dòng)物的周期蛋白 A1 B1 C、 D1 E1 F、 G、 H 等等。 部分周期蛋白分子 結(jié) 構(gòu)特征 圖中除 Cln3外，均為人的周期蛋白分子。? 周期蛋白 (A, B)分子的 N端含有破壞框。box細(xì)胞周期蛋白的 破壞框 與降解途徑Cyclin D， C， E等含有： PEST序列 (一個(gè)富含脯氨酸（ P）、谷氨酸（ E）、天冬氨酸（ S）、絲氨酸和蘇氨酸（ T）殘基的 PEST序列， 與泛素結(jié)合而降解。 G1早期， cyclin D表達(dá)并與 CDK4或 CDK6結(jié)合，成為始動(dòng)細(xì)胞周期的啟動(dòng)子； G1晚期、進(jìn)入 S早期后 cyclin E表達(dá)，并與 CDK2結(jié)合，推動(dòng)細(xì)胞進(jìn)入 S期； 進(jìn)入 S期后， cyclin A表達(dá)，并與 CDK2結(jié)合，cyclin D、 cyclin E降解； S晚期、 G2早期， cyclin A表達(dá)， cyclin B表達(dá)，并與 cdc2結(jié)合，促進(jìn)細(xì)胞進(jìn)入 M期。CyclinACDK2CDK2CDK1G1 G2cdc2Cyclin? CDKs（ cyclindependent kinase，細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶）是調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的核心。CDK? 人們對(duì) CDK的認(rèn)識(shí)，最初是通過(guò)研究培養(yǎng)細(xì)胞和酵母細(xì)胞而得到的。? 是一類重要的絲氨酸 /蘇氨酸蛋白激酶，主要生物學(xué)作用是 促進(jìn)細(xì)胞周期時(shí)相轉(zhuǎn)變、推進(jìn)細(xì)胞周期運(yùn)行 ， CDK和其調(diào)節(jié)因子又被稱作 細(xì)胞周期引擎。? CDK的分子量一般為 35～ 40kD，不同 CDK的氨基酸組成有 40%以上的同源性。 ? CDK含有一段保守氨基酸序列 PSTAIRE，與周期蛋白 cyclins的結(jié)合有關(guān)。? 在激活因素中，目前認(rèn)為 CDK與 周期素的結(jié)合 以及保守的 蘇氨酸殘基的磷酸化 是較為重要的兩種調(diào)節(jié)因素? 而在抑制因素中， CDK的 N端氨基酸殘基的 抑制性磷酸化 以及 抑制蛋白的結(jié)合 是主要的調(diào)節(jié)因素。 周期素的激活作用：周期素中的 “周期素盒 ”結(jié)構(gòu)域直接和 CDK的結(jié)合，并與 CDK的激活相關(guān)，周期素是 CDK的正性調(diào)節(jié)劑。Activation of CDK216。催化 CDK1和 CDK2磷酸化的酶是 CAK， 該酶是一種寡聚體，其催化亞基為 CDK7，調(diào)節(jié)亞基為 周期素 H。 磷酸化修飾的抑制作用：在人的 CDK1和 CDK2中， Thr14和 Tyr15殘基的磷酸化可抑制 CDK的催化活性。Inhibition of CDK? 催化 Thr14和 Tyr15磷酸化的是兩種不同的蛋白激酶，使 Thr14磷酸化的為蛋白激酶 Wee1，使 Tyr15磷酸化的是蛋白激酶 Myt1。? 因此，蛋白激酶 Wee1和 Myt1及蛋白磷酸酶CDC25的相對(duì)活性，決定 CDK1和 CDK2的活性高低。抑制蛋白的抑制作用：? 近年來(lái)，已分離并鑒定了若干能夠與周期素 CDK復(fù)合物特異性結(jié)合并抑制其活性的蛋白因子，這些蛋白因子被稱為 周期素依賴性蛋白激酶抑制蛋白（ CKI） 。? 在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中，目前已經(jīng)確定的 CKI主要有： P21WAF1/CIP P27KIP P16INK4和 P15INK4B，可分別抑制各型 CDK的活性。進(jìn)入 S期 后， Cyclin E降解， CDK2轉(zhuǎn)而與 Cyclin A結(jié)合，推進(jìn)細(xì)胞進(jìn)入 G2期；在 G2/M期， Cyclin B合成并與 CDK1結(jié)合，導(dǎo)致染色體凝縮，核膜解體等 , 促進(jìn)細(xì)胞進(jìn)入 M期。DEAB 第二部分3. CyclinsCDKsCKIs調(diào)控網(wǎng)絡(luò) CyclinsCDKs 相互配合 Cyclins 不同時(shí)相而出現(xiàn) CDKs 不同時(shí)相而出現(xiàn)4. G1—S 期轉(zhuǎn)折5. G2—M 期轉(zhuǎn)折6. CKIs4. G1期到 S期的轉(zhuǎn)折， DNA的復(fù)制。G1期胞周期蛋白（ ① cyclin： D1 cyclin② cyclin③ cyclin： cyclin1， cyclin2A? cyclin D首先在酵母菌中被發(fā)現(xiàn)，它能激活 CDK6，它有 3個(gè)亞型，包括 D D D3，具組織特異性。 ? cyclin D1在 G1中期合成達(dá)到高峰。? Cyclin D2峰值在 G1晚期， 給 G1期細(xì)胞微量注射 cyclin D2抗體，可使表達(dá) cyclin D2的淋巴細(xì)胞停滯在 G1期。? 不同亞型周期素D在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)模式不同，但主要是在 G1期處于較高的表達(dá)水平。? cyclin E基因及其產(chǎn)物的表達(dá)在細(xì)胞周期的 G1中期上升，至 G1晚期或 S早期達(dá)高峰， 在 G1晚期發(fā)揮正調(diào)控細(xì)胞周期的作用。 cyclin A是 G1期向 S期轉(zhuǎn)移的限速因素 。D表達(dá)，并與CDK CDK6結(jié)合，使下游的蛋白質(zhì)如 Rb磷酸化， Rb釋放出轉(zhuǎn)錄因子 E2F，促進(jìn)許多基因的轉(zhuǎn)錄，如編碼 cyclinE、 A和 CDK cMyc、 PCNA、H2A的基因。共同激活 cyclinE表達(dá)。CyclinE激活 CDK2，促進(jìn)細(xì)胞進(jìn)入 S期。進(jìn)入 S期后， cyclin? 在 G1晚期， cyclinRb蛋白與 E2F轉(zhuǎn)錄因子Rb基因? Rb是 CDK 4/6Cyclin D， CDK2Cyclin E的底物。它能與轉(zhuǎn)錄因子 E2F結(jié)合并阻止相應(yīng)基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)，從而抑制細(xì)胞生長(zhǎng)。細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子（ E2F? 在 E2F基因活化轉(zhuǎn)錄功能區(qū)內(nèi)有一段 18個(gè)氨基酸的序列可與 Rb結(jié)合， Rb通過(guò)與 E2F功能區(qū)的結(jié)合遮蓋 E2F功能區(qū)，抑制 E2F轉(zhuǎn)錄功能，抑制 DNA合成。? Cyclin