【正文】 大小的相對(duì)數(shù)量求得 。 計(jì)算方法： MN= Ni— 長(zhǎng)度 i分子的分子量 。 Σ M iN iiΣ N iiiΣ M iN iiΣ M i2 N i(1) 測(cè)分子量樣品要求 A. 多糖溶于適當(dāng)溶劑 。 C. 與溶劑不發(fā)生反應(yīng) 。 例： 被溶物質(zhì) 溶劑 纖維素 銅銨及乙二胺溶液 淀粉 乙二胺溶液加適量堿 在上述溶劑中仍難免降解 ， 為免降解可用多糖的衍生物醋酸酯或硝酸酯 。 測(cè) MN(分子量 104~106)； 粘度法 ： 高分子化合物的分子大 ， 其溶液的粘度高 ， 隨分子量的增大 ， 粘度增高的程度大 。 若溶質(zhì)分子小 ， 則散射是對(duì)稱(chēng)的 ， 若溶質(zhì)分子大過(guò)射入光線(xiàn)波長(zhǎng)約 1/20或 1/15， 則散射是不對(duì)稱(chēng)的 ， 向前方向的散射光最強(qiáng) ， 向后的散射光最弱 ， 測(cè)定散射光的不對(duì)稱(chēng)程度 ， 可測(cè)定容質(zhì)的分子量大小 。 四 、 多糖化學(xué)結(jié)構(gòu)研究 (1) 步驟 ① 先將多糖完全水解成單糖 。 ③ 部分水解成低聚糖并確定低聚糖種類(lèi) 、 組成 ， 以此確定是否為雜多糖 ， 進(jìn)一步確定糖苷鍵的形式 。 (2) 方法 ① 化學(xué)方法 ： 通過(guò)水解 ， 甲基化 ， 高碘酸氧化等方法來(lái)確定單糖的種類(lèi) 、 結(jié)構(gòu) ， 糖苷鍵位置 ， 非還原端基的比例 ， 鏈平均長(zhǎng)度等 。 測(cè)定多糖分子量 ：滲透壓法 ， 粘度法 ， 超速離心沉降法 ， 光散射法 。 8 cm1 中強(qiáng) β糖苷鍵 891177。 多糖用無(wú)機(jī)酸在適當(dāng)條件下能完全水解 ， 定量地轉(zhuǎn)變成單糖 ， 分離和分析單糖種類(lèi)能確定多糖是由何種單糖組成 。 (1) 完全水解的難易規(guī)律 ① 五元環(huán)糖苷鍵比六元環(huán)易水解 。 ③ 多聚六元環(huán)戊糖比多聚六元環(huán)己糖易水解 ， 速度相差10~1000倍 。 復(fù)雜多糖具有水解難易不同的糖苷鍵則用分級(jí)水解 。 但具支鏈的α1,6糖苷鍵難切割 ， 據(jù)此可確定有多少支鏈 。 (2) 水解條件 ① 多聚六環(huán)己糖用 1NHCl煮沸 。 ③ 多聚阿拉伯糖，多聚果糖用 ， 85℃ 左右水解 15~25小時(shí)。 (3) 水解產(chǎn)物的檢測(cè) 紙色譜 ： 50~500mg多糖樣品水解 ， 靈敏度 1~5μg。 氣相色譜 ：樣品量更少 ， 更靈敏 。 ) 電泳紙色譜 ：用 H3BO3緩沖液 pH=10， H3BO3與糖形成絡(luò)合物 。 高壓液相色譜 ：樣品量少，靈敏，適用面廣。 單 、 二 、 三 、 四聚糖 可用活性炭 :硅藻土 (1:1)混合柱分離 ， 水解液中和后上柱 ， 水洗脫 ， 先得單糖 ， 再用乙醇水溶液洗脫 ， 并逐步提高乙醇濃度 (40%， 60~65%)， 二 、三 、 四聚糖相繼被洗脫 ， 分離開(kāi)來(lái) 。 根據(jù)低聚糖的結(jié)構(gòu)可以了解多糖分子中糖苷鍵的種類(lèi)和構(gòu)型 —— 此法稱(chēng)為“鍵分析” 。 多糖經(jīng)甲基化得到甲基取代多糖 ， 再經(jīng)水解得甲基單糖 ， 用色譜法分離 ， 分析所得甲基糖的種類(lèi)和數(shù)量 ，能了解原來(lái)多糖分子中糖苷鍵的種類(lèi) 、 支叉結(jié)構(gòu)和計(jì)算鏈平均長(zhǎng)度 。 b. 甲基碘和 Ag2O， 此為完全甲基化方法 。 ③分離 ：色譜柱法或薄層色譜法等。 ② 計(jì)算支鏈多糖支叉的程度 。 缺點(diǎn) ： ① 交叉鏈種類(lèi)不清楚 。 ③ 需二種以上分離方法結(jié)合使用。 糖苷鍵不受影響 。 加乙醇沉淀 ， 干燥得粉末 。 （ 因順式氧化速度大于反式 ） ④ 了解糖苷鍵的種類(lèi) ， 尾端基 ， 鏈長(zhǎng)度和支叉程度 。 (2) 反應(yīng)條件與結(jié)構(gòu)推測(cè) ① 低溫 (5℃ )、 避光 。 ③ 多糖濃度 1%以下 。 結(jié)構(gòu)推測(cè)： 雙醛化合物 不穩(wěn)定 ， 需氧化成羧基或還原成醇基再研究產(chǎn)物結(jié)構(gòu)： ① 溴水使醛基氧化成羧基 。 非還原尾端單糖單位 : 有三個(gè)羥基 ， 即二對(duì)相鄰的羥基 ，耗用二分子高碘酸鹽 ， 產(chǎn)生一分子甲酸； 還原尾端的還原單糖單位 : 耗用三分子高碘酸鹽 ， 產(chǎn)生二分子甲酸和一分子甲醛； 支叉位置的單糖單位 : 因 C2的羥基被取代 ， 無(wú)相鄰羥基不被氧化 ， 仍保持原來(lái)結(jié)構(gòu)； 其余各單糖單位 : 都具有一對(duì)相鄰羥基 ， 各耗用一分子高碘酸鹽 ， 但不產(chǎn)生甲酸和甲醛 。 * 用 Pb(OAc)4可代替 HIO4。 1,3鍵產(chǎn)生間糖精酸 ， 1,4鍵產(chǎn)生異糖精酸 。 例 D葡萄糖轉(zhuǎn)化為： D葡萄糖 (%)+ D果糖 (% ) + D甘露糖 (% ) + 其它非糖物 (%) 各糖苷鍵堿性水解難易： ① 1,3糖苷鍵易水解 (pH=9)。 ② 1,4(1,6)糖苷鍵也可水解 (pH=11)， 但比 1,3糖苷鍵慢10~100倍 。 可在不同 pH值條件下水解，然后打譜確定結(jié)構(gòu)，以此區(qū)別糖苷鍵。 例 α淀粉酶只能水解淀粉 、 糖原中的 α糖苷鍵 ， 對(duì)于纖維素中的 β1,4糖苷鍵無(wú)作用 。 否則產(chǎn)生新的低聚糖 。 找合適酶的途徑： ， 則可在這種生物體中找到合適的酶 。 五 、 多糖的生理作用 糖參與了多細(xì)胞生命的全部時(shí)間和空間過(guò)程，如受精、著床、分化、發(fā)育、免疫、感染、癌變、衰老等等，糖與疾病的發(fā)生和發(fā)展有密切的關(guān)系。 另一方面， 在很多疾病過(guò)程中，往往伴隨著糖鏈的異常，如腫瘤的發(fā)生往往伴隨細(xì)胞表面糖鏈的異常高表達(dá)，并且這些糖鏈的變化與腫瘤的惡化、轉(zhuǎn)移等密切相關(guān)。顯然，調(diào)控糖基參與的這些病變過(guò)程就有可能控制疾病。由于活性多糖的生理作用，作為糖類(lèi)藥物它的應(yīng)用是多方面的。 經(jīng)藥理活性試驗(yàn)表現(xiàn)出能刺激或提高機(jī)體免疫功能 、 有激活或提高巨噬細(xì)胞的吞噬能力的活性多糖主要有：人參多糖 、 黃芪多糖 、 香菇多糖 、當(dāng)歸多糖 、 猴頭菌多糖 、 黨參多糖 、 刺五加多糖 、 靈芝多糖 、 銀耳多糖等 。 (2) 抗腫瘤功能 活性多糖主要的抗癌作用是通過(guò)增強(qiáng)宿主免疫功能或?qū)δ[瘤細(xì)胞呈細(xì)胞毒作用 ， 以抑制捉瘤生長(zhǎng) ， 它最大的優(yōu)點(diǎn)是毒副作用少 ， 對(duì)正常細(xì)胞影響很小 ， 并且活性多糖與化療藥物有協(xié)同作用 。 另外銀耳多糖 、 靈芝多糖 、 冬蟲(chóng)夏草多糖 、 海帶多糖 、 中華獼猴桃多糖等都有一定的抗腫瘤活性 。多糖通過(guò)類(lèi)似的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制增強(qiáng)宿主免疫能力，以抵抗病原體的侵襲。 (4) 抗感染功能 活性多糖主要通過(guò)提高宿主免疫功能和直接殺菌 、 抗病毒協(xié)同作用 ， 達(dá)到抗感染目的 。 例黃芪多糖能顯著抑制結(jié)核桿菌 ， 中華獼猴桃多糖對(duì)大腸桿菌有抑制作用 ， 紅藻多糖對(duì)治療感冒有良好作用 。角叉菜膠是治療胃和十二指腸潰瘍的良藥，人參果膠、糊精、紅藻類(lèi)多糖等都有較好的抗消化性潰瘍作用。 從知母中提取的四種多糖 ， 給正常小鼠注射后 ， 動(dòng)物血隨劑量加大而明顯下降 。 (7) 降血脂和凝血功能 化學(xué)結(jié)構(gòu)與肝素類(lèi)似的活性多糖，能促進(jìn)脂蛋白脂肪酸釋放，使血液中大分子的脂質(zhì)分解成小分子，因而對(duì)血脂過(guò)多引起的血清渾濁有澄清作用，也能降低血膽固醇含量。肝素有抗凝血、抗血栓、抗動(dòng)脈