實驗一植物原生質(zhì)體的分離和培養(yǎng)一．教學(xué)目標(biāo)：了解植物原生質(zhì)-在線瀏覽
2025-06-04 00:34本頁面
【正文】 dNeubauer) 計數(shù)板在中央橫溝的兩邊各有一計數(shù)室，兩計數(shù)室結(jié)構(gòu)完全相同。在低倍顯微鏡下可見計數(shù)室被雙線劃分成９個邊長為１毫米的大方格。中央大方格被劃分為２５個中方格，每一中方格又劃分成１６個小方格(圖8－2稱２５１６=400小方格，也有的計數(shù)板為１６２５=400格的，小方格面積一致)。細(xì)胞計數(shù)先用試管稀釋法制備禽類血細(xì)胞懸液：將禽類紅細(xì)胞稀釋液Ⅰ、Ⅱ分別置水浴鍋中預(yù)熱到４１～４２℃，?、褚海眒L于試管中，用吸血管加入新鮮雞血(或肝素抗凝血)２０霯，再加入Ⅱ液１mL混勻，置該水浴鍋中保溫５０s左右，置室溫，即為待檢的血細(xì)胞懸液。取干潔的計數(shù)板，置于水平的顯微鏡載物臺上，蓋上蓋玻片，使兩側(cè)各空出少許。靜置２min后計數(shù)，先用低倍鏡觀察，不均勻則拋棄。采用“由上至下，由左至右，順序如弓”的順序，對壓邊線細(xì)胞采取“數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右”的原則(圖8～4)。注意事項1．計數(shù)板、蓋玻片和測定管用清水沖洗，再用綢布或細(xì)布沾干。、蓋玻片、吸血管及測定管等用過后必須立即按要求洗滌干凈。 實 驗 原 理 將紅細(xì)胞放入數(shù)種等滲溶液中，由于紅細(xì)胞對各種溶質(zhì)的透性不同，有的溶質(zhì)可以滲入，有的不能滲入，滲入的溶質(zhì)能夠提高紅細(xì)胞的滲透壓，所以促使水分進入細(xì)胞，引起溶血，由于溶質(zhì)透入速度互不相同，因此溶血時間也不相同。 二、材料 羊血。 實 驗 方 法 一、羊血細(xì)胞懸液取50ml小燒杯一個，形成一種不透明的紅色液體，此即稀釋的羊血。三、羊紅細(xì)胞的滲透性取試管一支，再加入1ml稀釋羊血，輕輕搖動，注意觀察溶液顏色有無變化？有無溶血現(xiàn)象？為什么？取試管一支，再加入1ml稀釋羊血，輕輕搖動，注意觀察溶液顏色有無變化？有無溶血現(xiàn)象？為什么？分別在另外8種等滲溶液中進行同樣實驗。實 驗 結(jié) 果并對實驗結(jié)果進行比較和分析。 二、實驗原理植物細(xì)胞用適當(dāng)濃度的TritonX—100處理 后，可破壞細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)，但細(xì)胞骨架系統(tǒng)的蛋 白質(zhì)卻保護完好。三、材料洋蔥鱗葉四、試劑1)2％考馬斯亮藍(lán)R250染色液：稱考馬 斯亮藍(lán)R2501g，溶于250ml無水乙醇中，加 . (2)磷酸緩沖液(pH 6．8)：6．0mmol／L 磷酸緩沖液， (3)M緩沖液(pH 7．2)50mmol／L咪唑， 50mmol/L)氯化鉀、0．5mmol／L氯化鎂、 1mmol/L 乙二醇(a氨基乙基)醚四乙酸； 1mmol／L巰基乙醇，調(diào)至pH 7．2。 (5)3%戊二醛：用磷酸緩沖液配制； (6)中性樹膠。玻璃滴管，載玻片 五、實驗步驟 約1cm2大小若干片)，置于50mL燒杯中，加 ，使其下沉； ，用1％Triton X—100 處理20min。 ％戊二醛固定30min。%考馬斯亮藍(lán)R250染色10min。 ，則可依次用50％乙 醇、70%乙醇,95％乙醇、正丁醇、二甲苯處理 樣品,各5min,然后將樣品平展于載玻片上，加 一滴中性樹膠，蓋上蓋玻片封片，制成永久切片。實驗四、線粒體和液泡系的超活染色與觀察活體染色是能使生活有機體的細(xì)胞或組織特異性著色但對活樣品又沒有毒害作用的一種活體染色方法，其目的是顯示生活細(xì)胞內(nèi)的某些結(jié)構(gòu)，而不影響細(xì)胞的生命活動和產(chǎn)生任何物理、化學(xué)變化以致引起細(xì)胞的死亡。 通常把活體染色分為體內(nèi)活體染色與體外活體染色兩類?；铙w染料之所以能固定、堆積在細(xì)胞內(nèi)某些特殊的部分，主要是靠染料的“電化學(xué)”特性。但并非任何染料均可用于活體染色，理論上應(yīng)選
教學(xué)教案相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1