分子生物學(xué)實驗指導(dǎo)-在線瀏覽
2025-05-22 23:13本頁面
【正文】 5N ，加dd water至1L，121176。C保存），TE buffer（10mmol/L Tris HCl ，1mmol/L EDTA ）；10mg /mL RNase A（RNA酶A溶于10mmol/L Tris HCl ，15mmol/L NaCl中）；搖菌試管洗凈并蓋上棉花塞、移液器吸頭裝入相應(yīng)的吸頭盒，一起高壓滅菌（121176。6．操作步驟（1）（2） 從超低溫冰箱中取出保存pMD18TF的菌種（操作完后迅速把菌種放回超低溫冰柜中，切不可將菌融化?。诔瑑艄ぷ髋_上用燒紅的接種環(huán)刮一下，再把接種環(huán)于無菌LB培養(yǎng)液（含100ug/ml氨芐青霉素）中攪拌一下，37176。（3）15000rpm離心1min，棄上清液（盡量棄干凈），留沉淀備用。（等待的同時，取一個塑料盒，裝上適量的冰塊備用。加入200ml 溶液II，蓋上蓋后上下顛倒幾次混勻，插入冰中，放置5min。（7）（8）15000rpm離心10 min，小心棄掉上清液，加入500ml 70% 乙醇，蓋上蓋后立即在渦旋混合器上混勻。15000rpm離心10 min，小心棄掉上清液，盡量倒置棄干凈（10）C培養(yǎng)箱中（或室溫）空氣干燥。（11）（12）清理桌面，清洗儀器，撰寫實驗報告7．思考（1）影響本實驗結(jié)果的因素有哪些？實驗二、 質(zhì)粒DNA的酶切1．目的學(xué)會用限制性內(nèi)切酶切割質(zhì)粒DNA。3．器材旋渦混合器，微量移液取樣器，移液器吸頭，雙面微量離心管架，水漂，恒溫水浴。儲存液），1000180。加樣緩沖液，（滅菌）、移液器吸頭裝入相應(yīng)的吸頭盒（滅菌）6．操作步驟（1）：pMD18TF DNA (或pUCmTF ) 6 μL10酶切緩沖液（用EcoRI的緩沖液） 2 μLdd water 30 μLEcoRI 1μLBamHI 1μL總體積 40μL（2）先準(zhǔn)備一個冰盒并放入一定量的冰塊。（3）用一只手的手指捏在盛放酶的微量離心管的上部（以免手指的給酶液加溫），另一只手持微量移液器，小心翼翼地吸取1 μL限制性內(nèi)切酶。再在離心機(jī)中1000rpm離心10秒。（5）酶切后取少量酶切產(chǎn)物與合適的已知分子量的DNA（如先前的PCR產(chǎn)物）對比電泳，以確認(rèn)切下的片斷是否為自己想要的片斷。（7）清理桌面垃圾，清洗實驗儀器。7．思考
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