核移植技術(shù)與動物克隆(2)-在線瀏覽
2025-03-10 15:14本頁面
【正文】 原始生殖細(xì)胞經(jīng)過抑制分化培養(yǎng)后，細(xì)胞數(shù)量增多，單細(xì)胞卻不分化。從理論上講，可以比胚胎核移植產(chǎn)生更多的動物個體。目前僅有小鼠分離克隆出胚胎干細(xì)胞系并成功克隆出成體鼠。 從妊娠早期胎兒分離出胎兒成纖維 (fibroblast)細(xì)胞，采用細(xì)胞核移植方法克隆出胚胎，要移植受體后，妊娠產(chǎn)仔，克隆出動物個體。 1996年，英國的克隆羊 ”多莉 ”即用此法產(chǎn)生。細(xì)胞工程 細(xì)胞工程2） 注射促性腺激素 GN促使母羊（蘇格蘭黑面母綿羊 ） 排卵， 3）乳腺細(xì)胞注射 GN3436h后與無核卵放入同一培養(yǎng)皿可，在微電流 作用下乳腺細(xì)胞融入卵子，形成一個含有新遺傳物質(zhì)的卵母細(xì)胞。5）產(chǎn)下多莉即為 6歲母羊的復(fù)制品，也為白色。他們解快了 兩個重大的技術(shù)問題 ：一個是解快了 使核供體細(xì)胞與核受體細(xì)胞（去核卵母細(xì)胞）同步的方法 。 異種動物克隆在兩棲類和魚類上開展得比較深入，在哺乳類動物異種克隆的報道較少。細(xì)胞工程 細(xì)胞工程該細(xì)胞必須持有該動物完整的基因組。 目前的研究證明，核移植技術(shù)中核供體可以來源于不同的細(xì)胞，如胚胎細(xì)胞、胚胎干細(xì)胞、胎兒成纖維細(xì)胞及體細(xì)胞等。細(xì)胞工程 細(xì)胞工程 對于 早期胚胎細(xì)胞 ，先用 %鏈蛋白酶或 性臺氏液預(yù)處理，溶去胚胎透明帶，然后將除去透明帶的卵裂球放入 Ca2+、 Mg2+的培養(yǎng)液或含胰蛋白酶的培養(yǎng)液中短暫培養(yǎng)，使細(xì)胞間連接松散，再用吸管反復(fù)吹打即可得到單個卵裂球作為核供體， 消化透明帶的時間 是影響卵裂球質(zhì)量的重要因素。因此，分裂球應(yīng)在解剖鏡下監(jiān)視透明帶的消化過程，當(dāng)透明帶薄，膨脹適度時就應(yīng)移出，再用適當(dāng)口徑的吸管吹打，使之分離。從動物器官或組織分離出所需的組織團(tuán)塊，用動物組織培養(yǎng)的方法分離成細(xì)胞懸液，然后在含血清的培養(yǎng)液中培養(yǎng)，進(jìn)行正常的傳代，在傳代時，每隔幾代取一些細(xì)胞集落進(jìn)行染色體分析，檢查染色體是否為正常的整倍數(shù)，傳代達(dá)到一定次數(shù)，細(xì)胞形態(tài)穩(wěn)定，正常增殖，說明已建立了穩(wěn)定的細(xì)胞系。細(xì)胞在低營養(yǎng)培養(yǎng)液中可以被誘離生長周期，進(jìn)入 G0期。大量實(shí)驗(yàn)證明， MⅡ 期卵母細(xì)胞適用于所有的供體核，目前基本上采用去核的 MⅡ 期卵母細(xì)胞作為受體細(xì)胞質(zhì)。而且在去核時應(yīng)吸 去盡可能少的細(xì)胞質(zhì)和 MⅡ 期染色體。卵母細(xì)胞的去核方法主要有以下幾種：細(xì)胞工程 細(xì)胞工程1）盲吸法 用微細(xì)胞玻璃管在第一極體下盲吸，吸除第一極體及處于分裂中期的染色體和周圍的部分細(xì)胞質(zhì)。例如將卵母細(xì)胞經(jīng) Hoechst33342染色和短時紫外線照射，可使核失去功能。由于脫羧秋水仙堿的作用， 核染色質(zhì)沒有分開而全部進(jìn)入第二極體 ，這樣就可以完成去核。細(xì)胞工程 細(xì)胞工程受精過程模式圖（ 3）獲能精子與透明帶結(jié)合并發(fā)生頂體反應(yīng)，釋放水解酶溶解透明帶。（ 1）獲能精子接近卵冠丘復(fù)合體（ 5）卵母細(xì)胞發(fā)生皮質(zhì)反應(yīng)。（ 4）精子進(jìn)入卵周腔與卵母細(xì)胞融合，精子細(xì)胞核和部分細(xì)胞器進(jìn)入卵母細(xì)胞。m）將細(xì)胞核直接注入卵質(zhì)內(nèi)， 一般去核時留下的口進(jìn)入。細(xì)胞工程 細(xì)胞工程 正常受精卵的發(fā)育啟動和早期卵裂主要由卵母細(xì)胞胞質(zhì)中母源信息所控制，成熟的卵母細(xì)胞質(zhì)能使移人的細(xì)胞核在形態(tài)上和功能上發(fā)生改變。重組胚的發(fā)育需要迸一步激活，卵母細(xì)胞的激活涉及的因素很多，無論是受精卵引起的卵母細(xì)胞激活還是人工的激活，都引起卵母細(xì)胞發(fā)生一系列的反應(yīng)， 這些反應(yīng)是胚胎發(fā)育所必需的，可以采用電激活和化學(xué)激活方法。細(xì)胞工程 細(xì)胞工程 重構(gòu)胚需要在體外培養(yǎng)一段時間以觀察其發(fā)育能力，方可移植到受體，兔和豬重構(gòu)胚在體外培養(yǎng)24h以內(nèi)即可，而羊和牛重構(gòu)胚所需培養(yǎng)時間較長，一般發(fā)育到囊胚或桑椹胚時移植。輸卵管移植一般適用于～ 8細(xì)胞期胚胎。細(xì)胞工程 細(xì)胞工程里程碑式的突破里程碑式的突破? 19961997年首只體細(xì)胞克隆動物年首只體細(xì)胞克隆動物 “多莉多莉 ”羊的成羊的成功證明了功證明了 成熟的體細(xì)胞成熟的體細(xì)胞 也具有全能性。 細(xì)胞工程 細(xì)胞工程多莉培育者之一多莉培育者之一———— 伊斯維姆伊斯維姆 .穆特穆特細(xì)胞工程 細(xì)胞工程細(xì)胞工程 細(xì)胞工程世界首例兔體細(xì)胞克隆實(shí)驗(yàn)在 2022年 2月 12日在我國獲得成功 中國農(nóng)科學(xué)院北京畜牧研究國家畜禽分子遺傳育種中心博士后李善剛，日前成功獲得來自胎兒成纖給細(xì)胞的克隆兔。 家兔的克隆是一個世界難題。李善剛等2022年獲得來自成年公兔組織的克隆兔。細(xì)胞工程 細(xì)胞工程克隆先鋒成果驚為韓國上下尊為國寶。2022年培育出克隆豬。2022年 5月，成功利用患者體細(xì)胞提取了干細(xì)胞。細(xì)胞工程 細(xì)胞工程黃禹錫首次克隆出狗斯納皮細(xì)胞工程 細(xì)胞工程克隆狗 Snuppy（中）和提供成熟細(xì)胞的阿富汗獵犬（左）與黃色的代孕狗拉布拉多獵狗（右）細(xì)胞工程 細(xì)胞工程bona韓國成功克隆出 “斯納皮 ”的女朋友細(xì)胞工程 細(xì)胞工程中國首例體細(xì)胞克隆豬誕生細(xì)胞工程 細(xì)胞工程2022年 10月 14日，美國俄勒岡州國家靈長類動物研究中心的科學(xué)家米塔利波夫，宣布成功得到了恒河猴的克隆胚胎，他運(yùn)用傳統(tǒng)的體細(xì)胞核轉(zhuǎn)移技術(shù)，將恒河猴的皮膚細(xì)胞移植入卵細(xì)胞中，并將這個細(xì)胞培育成逐漸形成胚胎，從中提取出胚胎干細(xì)胞。通過細(xì)胞。代。當(dāng)然，如果一對夫婦愿意的話，也可以克隆女性。細(xì)胞階段。由于這由于這 證明證明 人體單個細(xì)胞的遺傳物質(zhì)能被誘導(dǎo)發(fā)育成人體單個細(xì)胞的遺傳物質(zhì)能被誘導(dǎo)發(fā)育成為為 幼胚胎幼胚胎 ，因此這項(xiàng)研究被認(rèn)為是向著，因此這項(xiàng)研究被認(rèn)為是向著 克隆人的方向克隆人的方向邁出了關(guān)鍵一步邁出了關(guān)鍵一步 。
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