體外受精與動物克隆技術(shù)-在線瀏覽
2025-03-10 14:22本頁面
【正文】 顯微受精技術(shù) 為了提高體外受精的成功率，借助顯微操作儀將精子直接注入卵母細(xì)胞質(zhì)或透明帶下，完成受精過程。 4. 受精卵的體外培養(yǎng) 受精卵需要在培養(yǎng)液或輸卵管中發(fā)育到桑葚胚或囊胚階段，移植到受體后才能獲得較高的妊娠率。不同動物體外發(fā)育阻滯出現(xiàn)的時期不同，小鼠為 2細(xì)胞期，大鼠為 8細(xì)胞期，牛和綿羊為 8~16細(xì)胞，豬為 4細(xì)胞期。 5 . 體外受精的意義 家畜體外受精技術(shù)經(jīng)過近 20年的發(fā)展，已取得很大進(jìn)步，為實(shí)現(xiàn)動物胚胎的工廠化生產(chǎn)提供了可能，對充分發(fā)揮良種母畜的繁殖潛力，加快家畜品種改良和優(yōu)良品種遺傳資源的開發(fā)與利用 ,加速畜牧業(yè)的發(fā)展具有重要的科學(xué)意義和實(shí)用價值。 1．供體、受體的選擇 胚胎移植的供體一般是選擇需要加速繁殖的有較大生產(chǎn)應(yīng)用價值的健康的優(yōu)良畜種，受體則是繁殖能力較強(qiáng)的健康本地品種。 3．同步發(fā)情 同期發(fā)情又稱同步發(fā)情，就是利用某些激素制劑人為地控制并調(diào)整一群母畜發(fā)情周期的進(jìn)程，使之在預(yù)定時間內(nèi)集中發(fā)情。 5．胚胎采集 （ 1）手術(shù)法 （ 2）非手術(shù)法 6．胚胎的檢查與鑒定 1）檢卵 將收集的沖卵液于 37℃ 溫箱內(nèi)靜置 10一 15分鐘。取底部少量液體移至平皿內(nèi)，靜置后，在實(shí)體顯微鏡下先在低倍 (10一 20倍 )下檢查胚胎數(shù)量，然后在較大倍數(shù) (50— 100倍 )下觀察胚胎質(zhì)量。吸卵可用 1毫升的注射器裝上特別的吸頭進(jìn)行，也可使用自制的吸卵管。無卵裂現(xiàn)象 (未受精 )和異常卵 (外膜破裂、卵裂球破裂等 )都不能用于移植。已配種母牛，在右肋部切口，找到非排卵側(cè)子宮角，再把吸有胚胎的注射器或移卵管刺入子宮角前端，注人胚胎；未配母牛在每側(cè)子宮角各注入一個胚胎；然后將子宮復(fù)位，縫合切口。在非手術(shù)移植中采用胚胎移植槍和 0． 25毫升細(xì)管移植的效果較好。將裝有胚胎的吸管裝入移植槍內(nèi)，通過子宮頸插入子宮角深部，注入胚胎。 8 ．胚胎移植的意義 ①發(fā)揮優(yōu)良母畜的繁殖力，迅速擴(kuò)大優(yōu)良畜種數(shù)量，加速優(yōu)良畜種的推廣應(yīng)用；②縮短世代間隔、增加選擇強(qiáng)度，促進(jìn)家畜改良速度；③長期保存冷凍胚胎，便于優(yōu)良品種的種質(zhì)運(yùn)輸和保存；④是胚胎分割、胚胎嵌合、性別鑒定和核移植等其它胚胎生物技術(shù)的基礎(chǔ)，也是基礎(chǔ)生命科學(xué)研究的重要手段。 （ 1）顯微針分割法 該法適用于卵裂球階段的胚胎。該方法具有較高的同卵雙生率，但操作程序復(fù)雜。在顯微操作儀下固定胚胎，用特制顯微刀片將胚胎均勻一分為二，分別裝入空透明帶中，進(jìn)行移植。 （ 4）酶消化去透明帶后分割法 用 %～ %的鏈霉蛋白酶去掉胚胎透明帶 , 然后用顯微玻璃針或微手術(shù)刀將裸胚一分為二。在立體顯微鏡下，用止血鉗夾住切割刀片，將透明帶切開一部分，再用直徑略小于胚胎的毛細(xì)管吹吸幾次，胚胎從透明帶中脫出。這種方法多用于分割桑椹胚和囊胚。 盡管胚胎分割技術(shù)已在多種動物包括人類取得成功，但是仍然存在很多問題須作深入研究。這可能與早期胚胎細(xì)胞的分化和定位有關(guān)，但發(fā)育機(jī)理還有待深入研究。人們發(fā)現(xiàn) 6~7日齡牛胚胎分割后，同卵雙生犢牛的毛色和斑紋并不完全相同，而在 2細(xì)胞階段分割，卻表現(xiàn)出遺傳一致性。迄今，最好的結(jié)果是由一枚牛胚胎獲得 3個牛犢，這說明孿生胚胎的發(fā)育潛力很有限。 2. 胚胎分割目前存在的問題和發(fā)展前景 第二節(jié) 核移植與動物克隆 一、什么是動物克隆？ 動物克隆是一種通過核移植過程進(jìn)行無性繁殖的 技術(shù)。這種胚胎被移植到生殖周期相近的母體之中， 可以發(fā)育成為正常動物個體。 這種不 經(jīng)過有性生殖過程，而是通過核移植生產(chǎn)遺傳結(jié)構(gòu) 與細(xì)胞核供體相同動物個體的技術(shù)，就叫做動物克 隆。 胚 胎 克 隆： 使用的核供體細(xì)胞如果來自多細(xì)胞階段 的胚胎，叫做 胚胎克隆 。 二、兩棲類細(xì)胞核移植 ? 1938年 Spemann最先提出將多細(xì)胞胚胎的每一個細(xì)胞核移植到去掉核的卵母細(xì)胞中，使它們重新發(fā)育成胚胎的設(shè)想。 三、魚類的核移植 從 1961年開始，童第周等以金魚和鳑鮍魚為材料，進(jìn)行魚類不同亞科間的細(xì)胞核移植獲得成功，用以研究雜交細(xì)胞核與純種細(xì)胞核在發(fā)育功能上的差異，以及細(xì)胞質(zhì)對細(xì)胞核的影響． 1979年，中國科學(xué)院武漢水生物研究所利用鯽魚做移核試驗。到 1980年 4月，他們成功地培育了兩尾無性繁殖的幼魚，其中一條發(fā)育正常。 四、哺乳類的細(xì)胞核移植 1977年，美國緬因州巴爾港的杰克遜實(shí)驗室用“亞無性繁殖”的方式，培育出 7只單親小鼠。 ?經(jīng)此番處理的卵細(xì)胞的染色體復(fù)制后出現(xiàn)了兩個核，將此雙核細(xì)胞放入正常培養(yǎng)液中培養(yǎng)。 ?將此種胚胎移入母鼠子宮培育。 1981年，瑞士日內(nèi)瓦大學(xué)和美國杰克遜實(shí)驗室合作，首次
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