動物分子遺傳育種學(xué)第4章-在線瀏覽
2025-07-16 17:15本頁面
【正文】 第二節(jié) 轉(zhuǎn)基因動物的研究方法 轉(zhuǎn)基因動物的常用方法： （ 1）顯微注射法 （ 2）逆轉(zhuǎn)錄病毒法 （ 3）胚胎干細胞法 （ 4）精子載體法 顯微注射法： 外源基因構(gòu)建 準備受精卵 顯微注射 胚胎移植 轉(zhuǎn)基因檢測 優(yōu)點： （ 1）安全（無病毒基因組序列） （ 2）轉(zhuǎn)移率高（整合率達 30%） （ 3）相對較短周期內(nèi)可得到純合體 缺點： （ 1）設(shè)備昂貴，所需技術(shù)性很強。 該方法就是將外源基因重新組合在逆轉(zhuǎn)錄病毒載上，然后在去感染著床前或著床后的胚胎，將外源基因?qū)雱游锛毎麅?nèi)，是目前開展動物轉(zhuǎn)基因研究中最有效的方法一。 （ 2）單位點、單拷貝。 缺點 :（ 1） 逆轉(zhuǎn)錄病毒容量小，轉(zhuǎn)移片段一般 小于 10kb，故被轉(zhuǎn)入基因通常無調(diào) 空序列。 逆轉(zhuǎn)錄病毒法： 胚胎干細胞法 通過 顯微注射法 或 逆轉(zhuǎn)錄病毒法 將外源基因引入到ES細胞內(nèi)，使外源基因整合到 ES基因組內(nèi)某一非必需基因位點上 ,再對 ES細胞進行篩選鑒定和培養(yǎng)擴增 , 用于生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因動物 . 優(yōu)點 :(1)外源基因整合與表達可以在干細 胞中檢 測 . (2)可以對 外源基因進行定點整合 . 缺點 : 需要經(jīng)過多代的選育 ,才能得到純合 的轉(zhuǎn)基因動物 ,這對牛、羊等產(chǎn)仔數(shù) 少，世代間隔長的大動物來講是很困 難的。 實際上很早以前，人們就已發(fā)現(xiàn)， 通過受精過程，精子可以將外源基因帶入卵細胞。不過這并不影響精子載體法在轉(zhuǎn)基因動物研究中的應(yīng)用。 （ 2）精子的頭前區(qū)域。 該種結(jié)合一般不出現(xiàn)在精子的尾部。 （ 2）精子頭部的特異性蛋白質(zhì)（有促進） （ 3）清洗精子（有促進） 外源基因的存在方式： （ 1）整合到受體細胞的染色體上。
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