【正文】 如圖： 單色器 ：選擇激發(fā)光波長的第一單色器和選擇發(fā)射光 (測量 )波長的第二單色器； 光源 ：燈和高壓汞燈 ， 染料激光器 (可見與紫外區(qū) ) 檢測器 ：光電倍增管 。 在選定的 l em 下測定熒光強(qiáng)度，定量分析 井岡山大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院 28 樣品池 ? 盛放測定溶液，通常是石英材料的方形池，四面都透光，只能用手拿棱或最上邊 ：與紫外 可見分光光度計的吸收池一樣 2. 吸收池的形狀：紫外 可見分光光度計的吸收池兩面透光 熒光分光光度計的樣品池四面透光 波長范圍 3. 使用注意事項 容易破碎 問題： 紫外 可見分光光度計的吸收池與熒光分光光度計的樣品池有什么區(qū)別？ 沾污問題 井岡山大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院 29 檢測器 ? 把光信號轉(zhuǎn)化成電信號 , 放大 , 直接轉(zhuǎn)成熒光強(qiáng)度 ? 熒光的強(qiáng)度一般較弱，要求檢測器有較高的靈敏度，熒光光度計采用光電倍增管 ? 熒光分析比吸收光度法具有高得多的靈敏度，是因為熒光強(qiáng)度與激發(fā)光強(qiáng)度成正比，提高激發(fā)光強(qiáng)度可 大大提高熒光強(qiáng)度 讀出裝置 ? 記錄儀記錄或打印機(jī)打印出結(jié)果，掃描激發(fā)光譜和發(fā)射光譜 井岡山大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院 30 儀 器 光 路 圖 井岡山大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院 31 同步掃描技術(shù) 根據(jù)激發(fā)和發(fā)射單色器在掃描過程中彼此間所保持的關(guān)系 ， 同步掃描可分為固定波長差 (?l)和固定能量差及可變波長三種； 同步掃描技術(shù)可簡化光譜 ， 譜帶變窄 ， 減少光譜重疊 ， 提高分辨率； 如圖 。 井岡山大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院 32 可獲得三維光譜圖的儀器 可獲得激發(fā)光譜與發(fā)射光譜同時變化時的熒 (磷 )光光譜圖 井岡山大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院 33 激發(fā)光譜和熒光、磷光光譜 ? 熒光和磷光均為光致發(fā)光，合適的激發(fā)光波長需根據(jù)激發(fā)光譜確定 —— 激發(fā)光譜是在固定熒光波長下，測量熒光體的熒光強(qiáng)度隨激發(fā)波長變化的光譜 I l ex 固定 lem 熒光波長 獲得方法：先把第二單色器的波長固定，使測定的 lem不變，改變第一單色器波長，從 200~700 nm 掃描，讓不同波長的光照在熒光物質(zhì)上，測定它的熒光強(qiáng)度，以 I 為縱坐標(biāo)， lex為橫坐標(biāo)得左圖，即熒光物質(zhì)的激發(fā)光譜 從曲線上找出 lex，實際上選波長較長的高波長峰 井岡山大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院 34 I l em 固定 l ex 激發(fā)光波長 獲得方法：先把第一單色器的波長固定，使激發(fā)的 lex不變，改變第二單色器波長，讓不同波長的光掃描，測定它的發(fā)光強(qiáng)度，以 I 為縱坐標(biāo)， lem為橫坐標(biāo)得左圖，即熒光物質(zhì)的發(fā)射光譜 從曲線上找出最大的 lem 井岡山大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院 35 ?從圖中看出 ?l磷 ＞ l熒 ＞ l激 圖 吸收峰 熒光峰 磷光峰 井岡山大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院 36 A. 激發(fā)光譜 200 250 300 350 400 450 500 550 600 650 700 750 800 850 90004008001200160020212400280032003600400044004800 IFl固定 lem=620nm(MAX) lex =290nm (MAX) 固定發(fā)射波長 掃描激發(fā)波長 熒光激發(fā)光譜與紫外 可見吸收光譜類似 井岡山大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院 37 200 250 300 350 400 450 500 550 600 650 700 750 800 850 90004008001200160020212400280032003600400044004800 IFllex =290nm (MAX) 固定 lem=620nm(MAX) 固定 lex=290nm (MAX) lem= 620nm(MAX) B. 發(fā)射光譜 (熒光光譜 ) 固定激發(fā)波長 掃描發(fā)射波長 C. 激發(fā)光譜與發(fā)射光譜的鏡像關(guān)系 S0 4 3 2 1 S1 4 3 2 1 發(fā)射光譜的形狀與激發(fā)波長無關(guān)： 分子的激發(fā)光譜可能含有幾個激發(fā)帶，但發(fā)射光譜只含一個發(fā)射帶；即使分子被激發(fā)到高于 S1的電子態(tài)，由于經(jīng)過極快的內(nèi)轉(zhuǎn)換和振動弛豫降到 S1電子態(tài)的最低振動、轉(zhuǎn)動能級，然后以輻射形式釋放能量回到基態(tài)。 在有熒光發(fā)射的同時測量磷光 。 （ 2） 采用脈沖光源和可控檢測及時間分辨技術(shù) 。 井岡山大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院 45 二、熒光分析方法與應(yīng)用 特點 （ 1） 靈敏度高 分子發(fā)光分析法比吸收光度法高 2～ 4個數(shù)量級 檢測下限： ～ ?g/cm3 相對靈敏度： 。 井岡山大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院 46 方法 ? 熒光衍生法 ? 熒光猝滅法 ? 敏化熒光法 井岡山大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院 47 定量依據(jù)與方法 (1)定量依據(jù) 熒光強(qiáng)度 If正比于 吸收的光量 Ia和熒光量子效率 ? ： If = ? Ia 由朗伯 比耳定律： Ia = I0(110? l c ) If = ? I0(110? l c ) = ? I0(? l c ) 濃度很低時 ， 將括號項近似處理后： If = ? I0 ? l c = Kc 井岡山大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院 48 （ 2）定量方法 標(biāo)準(zhǔn)曲線法： 配制一系列標(biāo)準(zhǔn)濃度試樣測定熒光強(qiáng)度 ， 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線 ， 再在相同條件下測量未知試樣的熒光強(qiáng)度 ， 在標(biāo)準(zhǔn)曲線上求出濃度； 比較法： 在線性范圍內(nèi) ， 測定標(biāo)樣和試樣的熒光強(qiáng)度 ， 比較； 井岡山大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院 49 熒光分析法的應(yīng)用 (1)無機(jī)化合物的分析 與有機(jī)試劑配合物后測量；可測量約 60多種元素 。 三、磷光分析法的應(yīng)用 井岡山大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院 53 低溫磷光分析常用試劑 溶劑及組成 混合比例（ V/V） 使用溫度 乙醇＋異戊醇＋乙醚