20xx性別鑒定計-在線瀏覽
2025-01-17 00:46本頁面
【正文】 se Chain Reaction）又稱聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，它是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù)，它可看作是生物體外的特殊DNA復(fù)制，PCR的最大特點，是能將微量的DNA大幅增加。
鑒定性別方法有很多，巴氏小體觀察法、染色體分型技術(shù)都可以對人的性別進(jìn)行鑒定，但是染色體分型需要專門的技術(shù)和人才，巴氏小體鑒定人的性別準(zhǔn)確率低，而且無法鑒別XXY、X0核型的性別。由于Y染色體是區(qū)分性別的本質(zhì)，PCR可以很簡便地從基因組DNA中直接獲得Y染色體DNA進(jìn)行分析鑒定。
人類及哺乳動物的性別決定和分化是一個復(fù)雜的過程，涉及已知和未知的多個基因。該基因的突變將導(dǎo)致XY染色體女性化（特納氏綜合征）；而含有該基因的染色體片段如果易位到X染色體，則導(dǎo)致XX男性綜合征。
電泳是帶電物質(zhì)在電場中向著與其電荷相反的電極移動的現(xiàn)象。凝膠是支持電泳介質(zhì)，它具有分子篩效應(yīng)。利用移動速度差異，就可以區(qū)別各種大小不同的分子。
綜上，本實驗通過對人口腔黏膜細(xì)胞的DNA提取、基因組DNA制備、PCR擴增y染色體上特異性重復(fù)序列、PCR產(chǎn)物的電泳檢測的方法實現(xiàn)人的性別鑒定，取得了良好的效果。
（6）在等待過程中建立PCR反應(yīng)體系。另外要設(shè)置陰性對照和陽性對照。
（7）95℃金屬浴保溫除模版外PCR反應(yīng)體系10min。
（9（10）將樣品放入PCR儀中，按照表2的PCR反應(yīng)條件進(jìn)行目的片段DNA擴增。
（2）取80mL 1TAE至250mL干凈紅蓋瓶中，倒入瓶中，輕旋混勻。
（3）待溶液冷卻至60℃左右，加入40μL 1mg/mL的溴化乙錠（EB）溶液，輕旋混勻后緩緩倒入架好樣品梳的制膠槽中，冷卻凝固（冷卻凝固時間要在30min以上）。
（5）將凝膠中的梳子輕輕拔出，將凝膠連同制膠板一同放入電泳槽中，添加1TAE電泳緩沖液至高出膠面約1mm。
（7）開啟電泳儀電源 。
（9）將電泳槽電極與電泳儀連接。電泳槽黑色電極為負(fù)極，與電泳儀負(fù)極相連。
（11）電泳結(jié)束，關(guān)閉電源，取出凝膠,紫外燈下觀察電泳結(jié)果，攝片，保存，分析。
%的瓊脂糖凝膠電泳圖（1組至6組）
圖12 %的瓊脂糖凝膠電泳圖（7組至10組）
圖11的泳道泳道2圖12的泳道泳道16加的是DL2000 DNA marker，起指示DNA條帶的作用。由于點樣時間太長，圖11泳道1和圖12的泳道1的DL2000 DNA marker樣品彌散了，因此在圖中沒有顯示出來。
圖11的泳道12，圖12的泳道15是加入的樣品是陽性對照，在299bp處有條帶，能對男生的電泳結(jié)果起對照作用。條帶淺可能是因為：①上樣量相對較少；②所配總反映體系時沒有充分混勻，導(dǎo)致分裝過程中引物含量相對較少；③引物自身形成二聚體的量過少。所有的上樣孔在100bp附近都有條帶，是由于形成了引物多聚體。
男生的上樣孔為圖11的泳道
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