【正文】 藻類計數(shù)（1）計數(shù)方法（水和廢水監(jiān)測分析方法長條計數(shù)法）在顯微鏡下，選取兩相鄰刻度從計數(shù)框的左邊一直計數(shù)到計數(shù)框的右邊稱為一個長條。圖41 浮游生物計數(shù)框 藻類鑒定在1040顯微鏡下，將藻類鑒定至屬或種級分類水平。 定量樣品（沉降計數(shù)法） 藻類預(yù)處理選用合適的器皿，盡量減少樣品轉(zhuǎn)移的次數(shù)，將著生藻類樣品濃縮、沉淀后，定容至20～50mL（根據(jù)不同樣品中生物個體的密度調(diào)整定容的體積）。推薦鑒定使用的文獻(xiàn)和工具書見參考文獻(xiàn)。方法二：Naphrax膠封片用甲苯浸泡Naphrax膠，使其粘稠度達(dá)到合適的程度；將載玻片和蓋玻片洗凈、擦干，放到一旁保持干燥；搖晃裝有干凈標(biāo)本的微型離心管，使標(biāo)本的沉淀與酒精均勻混合成懸濁液；用移液槍取10～20μl的懸濁液，滴在蓋玻片上涂勻，放在熱平板上干燥；在載玻片中間滴一滴泡好的Naphrax膠，將蓋玻片涂有標(biāo)本的一面向下蓋在膠上，使膠慢慢散開，接近或完全擴(kuò)散到整張蓋片上；將蓋好蓋玻片的載玻片用試管夾夾好，置于酒精燈上烤，待膠沸騰冒泡時停止加熱；用記號筆在載玻片做好標(biāo)記，防止混亂，待封片冷卻干燥后即可觀察；待一次樣品封片全部制作完畢后統(tǒng)一制作、粘貼標(biāo)簽。由于酒精具有揮發(fā)性，需要每隔一段時間再次加入酒精。（樣品中一般含有強(qiáng)腐蝕性的溶液，需使用玻璃離心管，離心時需注意防止液體飛濺以及離心管破裂造成的傷害）。（2）處理后的樣品洗滌及保存方法將預(yù)處理后的樣品配平離心，以3000r/min的速度離心5min；用膠頭滴管棄去上清液，保留沉淀物，加入蒸餾水反復(fù)沖洗吹吸，再次離心。在樣品中加入等體積的濃鹽酸混合，靜置24h；沸水浴加熱3～4h后靜置24h；棄去上清液，保留沉淀；加入2倍體積的濃硝酸沸水浴加熱5～6h，直至產(chǎn)生白色絮狀沉淀為止；靜置24h，棄去上清液，保留沉淀。方法一：三酸法取15～20mL樣品置于玻璃試管中，離心5min；棄去上清液，保留沉淀；（以下步驟需在通風(fēng)櫥中進(jìn)行）用試管夾將試管夾好在酒精燈上加熱，是標(biāo)本中的液體全部蒸發(fā)；加入3～4滴濃鹽酸繼續(xù)加熱，直至顏色變深，液體大部分蒸發(fā)；加入2～4滴濃硫酸加熱，試管中的液體逐漸變黑，并產(chǎn)生大量氣泡；加熱直至試管中的液體變?yōu)樘亢谏?，不再產(chǎn)生氣泡并伴有白色氣體冒出；加入2～3滴濃硝酸，此時反應(yīng)劇烈并伴有響聲，有大量棕紅色氣體冒出；繼續(xù)加熱直至沉淀物變?yōu)榈S色活無色，氣體變?yōu)榘咨?硅藻樣品（1）預(yù)處理由于硅藻種類的形態(tài)學(xué)鑒別主要依據(jù)其細(xì)胞壁上硅質(zhì)花紋的形態(tài)以及數(shù)量，因此在鑒定之前，首先對樣品進(jìn)行預(yù)處理，以去除藻體中的原生質(zhì)，只保留硅藻主要由二氧化硅組成的硅質(zhì)外殼。（2）種類鑒定將樣品裝片置于1040倍顯微鏡下觀察鑒定至屬或種。方法二：甘油制片法甘油封片法：①配置甘油封片試劑：按照甲醛:甘油:蒸餾水的體積比為4:10:86配置甘油封片試劑；②按照一份（滴）樣品加兩份（滴）甘油封片試劑的比例置于載玻片上；③待蒸餾水揮發(fā)后（根據(jù)室溫、濕度條件不同有一定的差異，一般為24h）補(bǔ)充加封片試劑一次（兩份/兩滴）；④待蒸餾水再次揮發(fā)后蓋上蓋玻片置于顯微鏡下進(jìn)行鑒定，使用時間與外界條件有關(guān)，一般為2～3天。 實驗室分析 定性樣品 非硅藻樣品（1）預(yù)處理：方法一：常規(guī)制片法將采集到的定性樣品根據(jù)其樣品中個體密度適當(dāng)沉淀、濃縮至適宜體積，觀察時，將樣品充分搖晃均勻后靜置5～10s，膠頭滴管吸取液體中間略偏下位置的樣品滴放到載玻片上，制成臨時裝片鑒定并粗略計數(shù)，以獲得定性樣品中的優(yōu)勢種類。（2）記錄：在野外記錄本或著生藻類采樣記錄表（附表A3）中記錄下河流名稱、采樣位置、站位編碼、采樣日期、采集人姓名、采樣方法及相關(guān)的生態(tài)信息。在樣品記錄本上記錄與樣品編號相對應(yīng)的采樣地點、站位編號、日期與樣品類型，并建立電子檔案保存。（3）樣品保存：將樣品放入密封的樣品瓶中，置于統(tǒng)一的樣品柜中保存。 樣品的固定與保存（1）定性樣品固定：按100:3的比例在樣品中加入市售的甲醛溶液。大塊巖石、河床巖石、原木、樹木用牙刷或刮刀將直接將基質(zhì)上的藻類刮下，沖洗入樣品瓶中。 天然基質(zhì)法（多數(shù)用于定性樣品的采集）采集所有生境（淺灘、急流、淺池、近岸區(qū)域）不同基質(zhì)上的著生樣品，將所有樣品混合裝入樣品瓶中，貼上臨時標(biāo)簽（臨時標(biāo)簽可以只標(biāo)注樣品號或一次采集的統(tǒng)一編號）。定期了解采樣器材放置情況，如果樣品丟失要及時補(bǔ)樣。放置時間為14天。為了將人為的干擾或破壞降到最低，應(yīng)該將人工基質(zhì)隱藏在視野之外，避開走航、觀光河流的主干道。同時可以參照《水質(zhì)微型生物群落監(jiān)測PFU法》（GB/T 1299091）的掛放方式進(jìn)行放置。 野外采樣程序 采樣點設(shè)置一般情況下著生藻類的采樣點位、采樣頻次與底棲動物以及常規(guī)理化監(jiān)測的采樣點位保持一致。 試劑 樣品固定固定劑：魯哥氏液（40g碘溶于含碘化鉀60g的1000ml水溶液中）福爾馬林（市售40%的甲醛溶液） 硅藻前處理濃鹽酸，濃硫酸，濃硝酸，雙氧水，75％酒精，蒸餾水。 結(jié)果填報將各點位的數(shù)據(jù)整理后填寫在鑒定結(jié)果表格里，見附表5。 棲息密度換算（1）定量樣品實測個體總數(shù)量除以采樣總面積（人工基質(zhì)籠的總數(shù)），即可得該種類的棲息密度（ind/m2或ind/籠）。在廣口瓶外側(cè)附可黏貼標(biāo)簽，標(biāo)明樣品識別碼、日期以及防腐劑（95%變性乙醇）。 標(biāo)本保存可將標(biāo)本（按站點和日期歸類）放置在加有少量95%變性乙醇的廣口瓶中，緊緊封住瓶口。標(biāo)明采樣點位、時間、采樣器材個數(shù)、鑒定種類中文名、拉丁名、數(shù)量及種類鑒定的主要特征。推薦鑒定使用的文獻(xiàn)和工具書見參考文獻(xiàn)。 鑒定推薦至少鑒定到科，如有條件則鑒定到到屬或種。樣品標(biāo)本的挑揀周期不宜超過2天，且當(dāng)日工作結(jié)束時應(yīng)將待挑揀樣品冷藏保存。此膠擱置時間越久越好。注：卑瑞斯膠配方：阿拉伯膠8g，蒸餾水10ml，水合氯醛30g，甘油7ml，冰乙酸3ml。（8）搖蚊（搖蚊科）的幼蟲和蛹應(yīng)當(dāng)用合適的介質(zhì)（可使用卑瑞斯膠封片）封在玻片內(nèi)；標(biāo)注位點識別碼、采集日期、采集人的姓名。為方便查看瓶內(nèi)的標(biāo)簽，先把標(biāo)簽插到左邊緣。在玻璃瓶內(nèi)放入標(biāo)簽，注明識別碼或批次編號、日期、河流名稱及采樣位置。（7）將揀選出來的200（177。未揀選樣品的殘體，也放入單獨(dú)的樣品瓶保存，標(biāo)注“剩余樣品”；樣品瓶應(yīng)貼附原始的樣品標(biāo)簽信息。（6）揀選出來的殘體，放入單獨(dú)的樣品瓶保存。按第一次的做法，隨機(jī)選擇網(wǎng)格，進(jìn)行二級揀選，每次揀選一個網(wǎng)格，直至分樣達(dá)到200177。如果無法確定其頭部的位置（如蠕蟲），則將其計入大部分身體所在的網(wǎng)格。20%個，分樣即可完成。從這個4個網(wǎng)格中移出所有材料（生物和殘體），將其放入白色淺盤，加入少量水，便于揀選。在實驗室記錄表中注明大型生物或明顯較多的生物；不要將其從托盤中移走。清洗時，用手輕輕地攪動樣品，使其混合均勻。如樣品在乙醇保存里，則需將樣品在水中浸15min左右，使大型底棲動物吸水，防止揀選過程中漂浮于水表。（2）在500μm孔徑網(wǎng)篩中徹底沖洗樣品，清除防腐劑和細(xì)小沉積物。如果物種種類較少，但個體數(shù)較多，采樣時又沒有細(xì)致揀選的，可采用分樣處理的方法，之后再分類揀選。將永久性標(biāo)簽分別附于樣品瓶內(nèi)外側(cè)，附以下信息：水體名稱、點位編號、采樣時間、采集人姓名、防腐劑類型。固定液的體積應(yīng)為動物體積的10倍以上，常溫保存，每隔幾周檢查防腐劑，必要時進(jìn)行添加，直至完成種類鑒定。 樣品運(yùn)輸常溫運(yùn)輸，避免樣品倒置。③來不及分檢的樣品，應(yīng)放加入固定劑后放冰箱內(nèi)保存，以免蟲體腐爛不利于分析。②根據(jù)采集種類多少，可將堅硬的甲殼類和軟體動物與水生昆蟲幼蟲及蛭類等分開保存。 揀選將卵石轉(zhuǎn)入盛有少量水的桶里，附在卵石上的底棲動物用尖角鑷子直接夾取到盛有95%酒精的廣口瓶（塑料為宜）中；附帶的泥沙、雜草等在水中沖洗（淤泥可用豬毛刷刷下），經(jīng)40目的分樣篩過濾，將生物撿出，裝入廣口瓶；附著于篩絹上的直接夾取到廣口瓶中，貼好標(biāo)簽帶回實驗室。③人工基質(zhì)外面的枯草附著的生物統(tǒng)計少量枯草中的底棲動物可以算定量樣，大量的枯草需要將其清除，不算定量，但如果定性采樣時未采到，可以算入定性。②成蟲統(tǒng)計采樣過程中，羽化的成蟲捕獲后，可以算入底棲動物，尤其是飛行能力較弱的成蟲。其他資料上還有一些定性、定量采樣的方法，可以通過試驗，總結(jié)經(jīng)驗后加以應(yīng)用。取樣時，采樣器提出水面后，放置到白磁盤或盆里（以免采到的樣品丟失）運(yùn)到岸邊。河流水體可涉的至少兩個，要考慮到流速和生境的不同；不可涉河流需要左右岸采樣，各下兩個，考慮到流速和生境；另外防止丟失，可以多下。如果條件允許可以雇漁民看護(hù)。放置時間為14天，如果在樣品孵育期間發(fā)生洪水或沖刷等情況，待水體平穩(wěn)后，重新安置人工基質(zhì)。 人工基質(zhì)法采樣點要選擇采樣斷面上下一定范圍內(nèi)生境最好的（最具代表性）點位，以便表達(dá)出水質(zhì)最佳（最具代表性）的狀態(tài)。同一點位一般選擇3～5個樣點，每個樣點采集2～3次。使用時將采泥器打開，掛好提鉤，將采泥器緩緩放至底部，然后抖脫提鉤，輕輕上提20cm，估計兩頁閉合后，將其拉出水面，置于桶或盆內(nèi)，用雙手打開兩頁，使底質(zhì)傾入桶內(nèi)。（3）抓取法：彼得遜采泥器用于大型河流湖泊等深水區(qū)的底棲動物的采集，但僅適用于軟底質(zhì)河床且水流較緩的區(qū)域。見圖310。圖39 踢網(wǎng)法采樣圖310 手抄網(wǎng)采樣（2）手抄網(wǎng)法：適合范圍較廣，迎水站立，深水可以采用“弓”字采法，采集一定面積；淺水可一手將手抄網(wǎng)迎水插到底質(zhì)表面并握緊，用另一只手將其前面50～60cm見方小面積上的石塊撿起，在手抄網(wǎng)前將附著的底棲動物剝離，以水流沖入網(wǎng)兜，然后用腳擾動底質(zhì)，使底棲動物受到擾動，沖入網(wǎng)兜，持續(xù)大約30s。用踢網(wǎng)進(jìn)行采樣，移動性強(qiáng)的一些物種會向側(cè)方游動而不被采獲。（1）踢網(wǎng)法：踢網(wǎng)規(guī)格為1m1m，主要適用于底質(zhì)為卵石或礫石且水深小于1m的流水區(qū)。④不同流速的樣品：要設(shè)主流（可涉）、淺灘、回水灣等不同流速的樣點。 ②不同生境的樣品：同一個樣點要盡量采集石頭、沉水植物、沙子、草叢、底泥等各種生境；單一生境采樣可采用梅花布點、一字布點，還可以采用S形布點，樣方的大小視環(huán)境而定，一般不少于5個樣方；復(fù)合生境生采樣要考慮到生境、水深、流速等要素進(jìn)行布點。（8）鑒定設(shè)備及器材：解剖鏡、相差顯微鏡冷光源、培養(yǎng)皿、腎形盤、載玻片及蓋玻片、尖角鑷子、解剖針等。鵝卵石、水草下面放一層40目的尼龍篩絹鋪底，泥、砂放入尼龍篩絹制作的網(wǎng)兜里。④手抄網(wǎng)（圖35），網(wǎng)兜用40目的篩絹縫制，（可用伸縮手柄），用于采集處于游動狀態(tài)的、在草叢、枯枝落葉和底泥表層的底棲動物，適合在較深水區(qū)域采集⑤踢網(wǎng)（圖36）可以自行加工，40目的篩絹，邊長1m1m，用于采集底泥中、石縫中、某些隱藏在草叢和落葉中、簡易巢穴中的底棲動物，適合在淺水區(qū)采集。②籃式采樣器（圖32）：高20cm、直徑18cm的圓柱形鐵籠，用8號和14號鐵絲編織，小孔為4～6cm2，使用時，籠底先鋪一層40目（）尼龍篩絹，再放上長約8cm的卵石。3 大型底棲無脊椎動物監(jiān)測方法 設(shè)備及耗材準(zhǔn)備 采樣設(shè)備及器材（1）采樣器材：僅推薦幾種常用的采樣器材，不同的采樣器材適合采集不同生活習(xí)性的動物，各地還可以根據(jù)采樣點位實際情況另行選擇，比如鐵鍬、索伯網(wǎng)等。進(jìn)行生境狀態(tài)評價時，應(yīng)注意以下問題：（1）近距離觀察棲息地特征，以便充分評價；（2）避免干擾采樣棲息地；（3）至少由2人共同完成棲息地評價。將分?jǐn)?shù)累加，并與參照環(huán)境比較，得到最終的棲息地等級。 生境狀態(tài)評價選擇調(diào)查點位上下各100m河段（或其他指定河長，如30～40倍河寬），通過目測，對調(diào)查河段的所有評價參數(shù)進(jìn)行評分。 （2）沉積物油污描述調(diào)查區(qū)域內(nèi)沉積物的油污量。 （4）渾濁度若未直接測量渾濁度，根據(jù)觀察，描述河水懸浮物數(shù)量。 （2）水體氣味注明調(diào)查區(qū)域內(nèi)河水的相關(guān)氣味描述。已知的情況下，列出水生植物的種類。 水生植物觀察水生植物的大體類型和相對優(yōu)勢度。 （8）渠道化：觀察調(diào)查河段或站位周圍是否有過疏浚。 （6）林冠蓋度：注明開闊區(qū)與覆蓋區(qū)的大體比例，可用密度計代替肉眼估測。 （4）水深：估計代表性測點自水面至河底的垂直距離，計算平均深度。 （2）河寬：估計調(diào)查河段典型橫斷面的兩岸距離，若寬度不同，則采用平均值。已知的情況下，記錄河岸帶的優(yōu)勢植被類型及物種。 河岸植被典型的河岸帶要包括河流兩岸至少18m的緩沖帶。其他可能影響水質(zhì)的危害因子包括養(yǎng)殖場、人工濕地、化糞池系統(tǒng)、水壩和水庫、礦井滲漏等?？煽紤]采用土地利用圖精確標(biāo)注該信息。 （3）河流源頭已知的情況下，注明調(diào)查河流的發(fā)源地，如冰川、山區(qū)、濕地或沼澤。 河流總體特征 （1）河流類型 注明河流為冷水性或暖水性。2 生境調(diào)查 生境調(diào)查所需設(shè)備及器材 （1）照相機(jī) （2）上游/下游“箭頭標(biāo)記”或采樣河段照相及記錄標(biāo)志（標(biāo)尺）