【正文】 Taq DNA聚合酶(5iu/181。l、3’引物(2181。l 、 dNTP 、5’引物（2181。l、10X Buffer 2181。l (200iu),37℃ 50 min、75℃ 5 min。l。l、RNA酶抑制劑(40iu/181。g）、10X RT buffer 4181。 RNA逆轉(zhuǎn)錄 在PCR管中加入2181。切取大腦左前部1/2約30mg,放入玻璃研磨器中，加入裂解液后研磨，按RNeasy mini Kit操作方法提取總RNA。 實(shí)驗(yàn)用引物:由賽百盛公司合成，序列如下：A1: 5’ACAGA GCACA； APG: 5’AAGCT TTTTT TTTTT TG；APC: 5’AAGCT TTTTT TTTTT TC；APA: 5’AAGCT TTTTT TTTTT TA。 硝酸纖維素轉(zhuǎn)印膜(Schleicheramp。 PCR Preps DNA純化系統(tǒng)（Promga）、pGEM174。 實(shí)驗(yàn)用試劑 RNA小量提取試劑盒(Qiagen)、 QIAshredderTM (Qiagen)、 PCR 管（Axygen）、MMuLV逆轉(zhuǎn)錄酶(Biolabs174。1 材料和方法 材料 實(shí)驗(yàn)動物及飼養(yǎng)條件 SAMR1TA、SAMP8/Ta、SAMP10/Ta系小鼠購自日本京都大學(xué)，在本所實(shí)驗(yàn)動物中心按普通級進(jìn)行飼養(yǎng)，12小時(shí)明暗光周期，自由飲水及采食。 Kumar et al., 2000）。SAM模式小鼠顯示出的加速衰老的病理表型說明：衰老至少從一定意義上來說是受遺傳控制的。本研究應(yīng)用了三個(gè)品系小鼠作為研究對象，以期發(fā)現(xiàn)衰老相關(guān)表達(dá)的基因。模式動物加速衰老小鼠（SenescenceAccelerated Mouse，SAM）是由一系列相關(guān)的純系所組成，包括9個(gè)短壽的加速衰老品系和3個(gè)壽命較長的正常衰老的品系（Takeda et al.,1981，1991）。進(jìn)化理論認(rèn)為衰老并非是機(jī)體的適應(yīng)性特征，而是隨著時(shí)間推移機(jī)體許多功能注定喪失的結(jié)果。Coschigano et al., 2000)、體重(Piantanelli et al., 2001)、體脂含量和環(huán)境因素(Coschigano et al., 2000。機(jī)體的壽命取決于許多因素，其中包括遺傳因素（Finch et al.,1997。 and in age 11, 4 and 2 month of the SAMP8/Ta strain, two fragments have been found, which belong to 11 and 2 month respectively. And pared gene expression profile in different strains mice, 16 fragments have been detected, 3, 6 and 7 of them belong to SAMP10/Ta, SAMP8/Ta and SAMR1TA respectively. Sequence results indicate that those fragments are homologous with heat shock protein cognate protein 70，ATPdependent mitochondrial RNA helicase, Dleu2 mRNA, Mouse DNA sequence from clone RP23334C3 on chromosome X, ubiquinolcytochrome c reductase plex ( kD), 60S ribosomal protein L21, FIS, phenylalkylamine Ca2+ antagonist (emopamil) binding protein, fucosyltransferase 9, glial cell line derived neurotrophic factor family receptor alpha 1, endonuclease/reverse transcriptase, PER1 interacting protein of the suprachiamatic nucleus homolog, centrosomal protein CGNAP, ferritin heavy chain gene, NID2 gene, and prkdc gene for DNAdependent protein kinase catalytic subunit [Acta Zoologica Sinica 50(4): , 2004]. Key words SenescenceAccelerated Mouse, Ageingassociated gene expression, Differential display reverse transcription polymerase chain reaction。測序結(jié)果經(jīng)檢索顯示，它們分別與下列基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物同源：熱休克識別蛋白－70、ATP依賴性線粒體RNA螺旋酶、Dleu mRNA、小鼠X染色體RP23334C4克隆DNA序列、60S核糖體蛋白L2FIS、苯基烷基胺鈣離子拮抗物結(jié)合蛋白、巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶－膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子家族受體α內(nèi)切核酸酶/逆轉(zhuǎn)錄酶、PER1蛋白相關(guān)超級融原核蛋白、中心體蛋白CGNAP、轉(zhuǎn)鐵蛋白重鏈基因、巢蛋白2基因、DNA依賴性蛋白激酶催化亞單位基因prkdc [動物學(xué)報(bào) 50（4） ，2004]。在SAMR1TA、SAMP8/Ta、SAMP10/Ta三個(gè)品系中，通過比較不同鼠齡SAMP10/Ta（118月齡）的基因表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)在4月齡和12月齡分別有一個(gè)差異表達(dá)片段；對不同鼠齡的SAMP8/Ta（11月齡）經(jīng)差顯比較, 發(fā)現(xiàn)在2月齡和11月齡各有一差異表達(dá)片段。加速衰老小鼠腦組織中的衰老相關(guān)基因的表達(dá)20040318收稿，20040518接受* 國家重大基礎(chǔ)研究規(guī)劃項(xiàng)目（973）（）和北京靈泰必成醫(yī)藥技術(shù)有限公司資助 [This research was funded by the grants from the State Basic Research Development Program “973” (), and Lingtai Bichen Medical Technology Co. Ltd., Beijing]通迅作者(Corresponding author). Email: qingxuanchen 動物學(xué)報(bào) Acta Zoologica Sinica張 沖1,2 程錦雁1　王錦剛3 陳清軒1** 　 1．中國科學(xué)院遺傳與發(fā)育生物學(xué)研究所，北京100080；2．國科學(xué)院研究生院，北京100039；3. 北京靈泰必成醫(yī)藥技術(shù)有限責(zé)任公司　北京　　100086.摘 要 從分子水平上研究衰老對大腦的影響有助于揭示機(jī)體衰老的分子機(jī)理，也有助于揭示衰老相關(guān)性腦功能異常的發(fā)生過程。本研究應(yīng)用DDRT－PCR方法研究衰老相關(guān)基因在SAM（SenescenceAccelerated Mouse）小鼠腦組織中表達(dá)的變化情況。在不同品系的比較中發(fā)現(xiàn)了16個(gè)差異性片段，分別屬于SAMP10/Ta(3個(gè))、SAMP8/Ta(6個(gè))和SAMR1TA（7個(gè)）。關(guān)鍵詞 加速衰老小鼠 衰老相關(guān)基因表達(dá) 逆轉(zhuǎn)錄差異顯示聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) 腦組織Expressions of ageingassociated gene in cerebral tissue of senescenceaccelerated mouse*Zhang Cheng JinYan1　 Wang JinGang3 Chen QingXuan1** 　 1. Institute of Genetics and Developmental Biology, The Chinese Academy of Sciences, Beijing 100080, China2. Graduate School of Chinese Academy of Sciences, Beijing 100039, China3. Lingtai Bichen Medical Technology Co. Ltd. Beijing, 100086, ChinaAbastract A better understanding of the molecular effects of ageing in the brain may help to reveal important aspects of organismal ageing, as well as processes that lead to ageingrelated brain dysfunction. In this study, the ageingspecific expression genes of the murine cerebrum were investigated by employing differentialdisplay reverse transcription polymerase chain reaction (DDRTPCR) in three senescenceaccelerated mouse (SAM) strains: SAMP8/Ta, SAMP10/Ta and SAMR1TA. Through pared gene expression profile among the age 18, 12, 4, and 2 month of the SAMP10/Ta strain, two differential fragments have been found, which belong to 4 and 12 month individually。 Cerebral Tissue衰老是指機(jī)體達(dá)到其最大繁殖能力后生理功能的進(jìn)行性降低(Roy et al., 1996),是一個(gè)自發(fā)而又與早期的程序化發(fā)育相對應(yīng)的過程。 Puca et al., 2001）、激素和生長因子信號(Flurkey et al., 2001。 Masoro, 2000)等。醫(yī)療記錄也給我們這樣的印象：衰老是許多獨(dú)立導(dǎo)致疾病并最終導(dǎo)致死亡的退行性變化過程的集合(Hekimi et al., 2003)。SAMP系小鼠顯示系特異性衰老相關(guān)的病理表型，包括出現(xiàn)衰老表征提前和壽命縮短。其中，SAMP8/Ta與SAMP10/Ta表現(xiàn)為短壽及與鼠齡相關(guān)的學(xué)習(xí)認(rèn)知損害、情感紊亂、晝夜節(jié)律異常，SAMP8/Ta還表現(xiàn)免疫損害；SAMR1TA則為正常壽命且無衰老相關(guān)病理表型的對照系（Takeda，1999）。迄今為止，SAM小鼠己被廣泛用于衰老相關(guān)性疾病的研究，但很少涉及導(dǎo)致其壽命縮短的分子機(jī)理的研究（Zhang et al., 2002。因此，我們應(yīng)用DDRTPCR方法對不同鼠齡和不同品系的加速衰老小鼠(SAM)腦組織進(jìn)行了比較研究，以期找出與衰老相關(guān)的基因片段，進(jìn)而為進(jìn)一步研究衰老的分子機(jī)制打下基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)中動物使用飼料為購自軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心飼料廠的商業(yè)化小鼠飼料。Inc.)、dNTP (promga)、Taq DNA聚合酶 (Promga)、α32pdCTP（亞輝）、無RNA酶的DNA酶(Promga)、RNA酶抑制劑(Promga)、尿素（Promga）、糖原(Sigma)、瓊脂糖（Biowest）、Wizard174。T Easy載體(Promga)、氨芐青霉素(sigma)、IPTG(Promga)、XGal (Promga)、 DH5α感受態(tài)菌（天威時(shí)代）、UltraPureTM 質(zhì)粒純化試劑盒（賽百盛）、X光膠片(Fuji Photo Film .)、BD MarathonTM cDNA 擴(kuò)增試劑盒(BD Bioscience Clontech)、 PROTRAN174。Schuell)、 預(yù)雜交及雜交液(上海生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司)、 隨機(jī)引物DNA標(biāo)記試劑盒(TaKaRa Biotechnology .)。 方法 總RNA提取 實(shí)驗(yàn)用雄性小鼠斷頸處死，撕去頭部皮膚，打開頭蓋骨，取出腦組織。經(jīng)無RNA酶的DNA酶處理后備用。l總RNA（約1181。l、 dNTP 、3’引物 2181。l) 、加水至19181。65℃ 5 min，42℃10 min、加入MM